支气管冲洗液细胞块HE切片及免疫组化染色在肺癌病理诊断与鉴别诊断中的应用价值

史永灿

（山东省济宁市金乡县人民医院病理科，山东 济宁 272200）

肺癌是全球范围内常见的癌症之一，也是导致癌症相关死亡的主要原因。临床上，准确的肺癌病理诊断和鉴别诊断对于制定有效的治疗方案和预后评估至关重要。支气管冲洗液细胞学检查作为一种无创性的检查方法，在肺癌的早期诊断、鉴别诊断和疗效监测等方面具有广阔的应用前景。传统的肺癌组织学诊断通常需要通过活检获得组织标本，然后进行石蜡包埋、切片染色等多个步骤，流程繁琐且耗时[1]。相比之下，支气管冲洗液细胞学检查是一种近年来备受关注的研究热点，尤其是在胸部疾病的早期诊断和鉴别诊断中具有重要的临床应用前景。该检查方式是用生理盐水冲洗患者的肺部，再行回收并对其中的细胞样本进行细胞学检测，因其具有简便无创、侵袭性小等特点，在临床实践中备受青睐。如果能够有效结合支气管冲洗液细胞学检查与其他组织学和免疫组化技术，有望为肺癌等疾病的早期诊断和治疗提供更加准确和及时的帮助。免疫组化染色是通过特定抗体结合组织中的特定抗原，然后利用化学方法使其呈色，从而对组织中的抗原进行定性定量检测的技术[2]。免疫组化染色技术在癌症的诊断和治疗中被广泛应用，对于肺癌的鉴别诊断和分子亚型的判定起着重要作用。结合支气管冲洗液细胞块苏木精- 伊红（HE）切片和免疫组化染色技术，有望提高肺癌病理诊断的准确性和可靠性[3]。基于这一研究背景，本研究选取了支气管冲洗液细胞块HE 切片和免疫组化染色技术，结合两者的特点，旨在探讨其在肺癌病理诊断及鉴别诊断中的应用价值，为提高肺癌诊断的准确性以及本病的早期干预提供新的思路，推动肺癌的早期诊断和治疗取得新的突破，具体研究方法和结果报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

本研究应用随机抽样法选取2021 年9 月至2023年9 月期间我院收治的支气管冲洗液阳性患者118 例作为研究对象，其中包含分型明确与不明确的患者。在这些患者中，有男性患者73 例，女性患者45 例；其最小年龄为49 岁，最大年龄为73 岁，平均年龄为（60.32±9.08）岁。

1.2 方法

1.2.1 仪器设备 本研究所用的仪器设备包括低速离心机（安必平医药科技有限公司生产，型号SC-3612）和微量振荡器等，所有仪器设备在应用前均已完成检查准备工作，符合实验标准。

1.2.2 检查方法 液基薄层细胞学检查方法：取支气管冲洗液与检查保存液，将两种液体等量均匀混合在一起。取适量的混合液静置30 min，然后置于振荡器中进行振动处理，振动时间为10 min。振动结束后将液体倒入离心管中，置于离心机中离心10 min，离心速度为每分钟1832 r。离心结束后，去除上部分的液体，在剩余液体中加入适量的缓冲液，再次摇晃均匀，并重复离心操作。再次离心完成后振荡细胞块，并将其涂抹试剂后放置于制片板上，添加样本后静置10 min进行巴氏染色并封片。制备液基细胞块、HE 切片与免疫组化染色的具体操作步骤如下：（1）液基细胞块制备：将振动处理后的混合液倒入离心管中，置于离心机中进行离心处理，离心时间为10 min，离心速度为每分钟1832 r。离心结束后，去除上部分的液体，在剩余液体中加入适量的缓冲液，再次摇晃均匀，重复离心操作。再次离心完成后，振荡细胞块，将其涂抹在制片板上。（2）HE 切片制备：将涂抹好细胞块的制片板放入切片机中，切取适当厚度的切片，然后将切片放入染色缸中，进行HE 染色。染色结束后，用封片胶封片，晾干备用。（3）免疫组化染色：将染色后的切片放入抗原修复液中，进行抗原修复。修复结束后，用磷酸缓冲盐水（PBS）冲洗切片，然后将切片放入含有第一抗体的孵育盒中，4 ℃孵育过夜。次日，用PBS 冲洗切片，再将切片放入生物素化二抗的孵育盒中，室温孵育1 ～2 h。用PBS 冲洗切片，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，室温孵育1 ～2 h。最后，用DAB 显色剂进行显色，观察切片的染色效果。若需要进一步加深染色，可加入适量复染剂（如苏木精）进行复染。染色结束后，用封片胶封片，晾干备用。本研究中所用的抗体包括：Ki-67、TTF-1、CK7、Syn、CD56、p63、CK5/6、Naspin-A。

1.3 观察指标

观察并比较液基薄层细胞学检查与支气管冲洗液细胞块HE 切片及免疫组化染色检查的肺癌分型检出率。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 软件进行数据的统计分析与处理，计数资料以% 表示，用χ² 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

对118 例支气管冲洗液阳性患者进行液基薄层细胞学检查，发现肺鳞状细胞癌患者43 例，肺腺癌患者7 例，小细胞肺癌患者19 例，肺癌分型检出率为58.47% ；对118 例支气管冲洗液阳性患者进行支气管冲洗液细胞块HE 切片及免疫组化染色检查，发现肺鳞状细胞癌患者57 例，肺腺癌患者25 例，小细胞肺癌患者19 例，肺癌分型检出率为85.59%。相较于液基薄层细胞学检查，支气管冲洗液细胞块HE 切片及免疫组化染色检查的肺癌分型检出率更高，差异有统计学意义P＜0.05）。详见表1。

表1 两种检查方法的肺癌分型检出率

3 讨论

肺癌是临床常见的癌症之一，是肺部细胞异常增殖所形成的恶性肿瘤。肺癌通常分为两种类型：小细胞肺癌和非小细胞肺癌。其中小细胞肺癌是一种侵袭性较强的癌症，在确诊时多已经扩散至其他部位。而非小细胞肺癌则更为常见，占肺癌总数的80% ～85%。肺癌的主要病因是吸烟，过度吸烟会增加罹患肺癌的风险。暴露于二手烟、空气污染、放射线和臭氧等环境中也会增加肺癌的发病风险。此外，家族遗传因素、一些化学药物、石棉等也可能引起肺癌[4]。肺癌早期通常无明显症状，随着病情的恶化，患者可能出现咳嗽、咳痰、咯血、呼吸困难、胸痛、声音嘶哑、体重减轻等症状。患者一旦出现上述症状，应尽快就医并进行相应检查[5]。根据肺癌的类型、分期以及患者的身体状况，可选择手术、放疗、化疗、靶向治疗、免疫治疗等治疗方案。手术是治疗肺癌的常见方式，通过手术可将肿瘤切除。放疗和化疗可以有效控制肿瘤的扩散和生长。靶向治疗和免疫治疗是近年来新兴的治疗方式，通过干扰肿瘤细胞的生长、增强机体免疫功能来治疗肺癌[6]。肺癌患者的预后取决于多种因素，包括肿瘤类型、分期、患者的年龄和健康状况等。早期诊断和综合治疗对于改善患者的预后具有重要意义。然而，由于肺癌的发病风险较高且早期通常无症状，大多数肺癌患者在确诊时已进展至晚期，因此其治疗难度非常大。总体来说，肺癌是一种常见且危险的癌症，可给患者的身心健康造成极大的影响。近年来随着医疗技术的进步和治疗手段的不断改进，肺癌患者的生存率和生活质量均有了较大的提高。早期诊断和综合治疗是控制肺癌进展的关键，希望通过不懈的努力，肺癌能够早日得到有效控制和治疗[7]。

薄层细胞学在纤维支气管镜检查中应用广泛，可以帮助诊断活检钳无法到达的部位，从而提高阳性诊断率。然而，在细胞学诊断中，特别是对于分化差的癌症，有时形态上存在相似点，例如非角化型鳞癌和腺癌都可能出现明显的核仁，可以是单个散在或者松散成群，仅凭形态很难做出准确的诊断，经常笼统地诊断为非小细胞肺癌[8]。一方面，这可能是由于诊断医师的经验不足，另一方面，细胞学本身存在着一定的局限性。通过使用HE 切片和免疫组化染色法，可以弥补上述检测方法的不足。细胞块HE 切片及免疫组化染色是一种在病理学诊断中广泛应用的检查方法，该方法通过对细胞块进行HE 染色和免疫组化染色，观察细胞形态学和抗原性的变化，能够对疾病进行诊断和鉴别诊断。HE 染色是一种常用的组织染色方法，分别染色细胞核和细胞质，从而呈现细胞形态和组织结构[9]。苏木精与细胞核中的核酸结合后，会使细胞核呈现蓝色；伊红则与细胞质中的蛋白质结合，使细胞质呈现红色。这种染色方法能够清晰地显示组织细胞的形态和结构，便于病理学家观察和诊断。HE 切片广泛应用于肺癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的病理诊断中。通过观察细胞形态学和结构的变化，可以对肿瘤的良恶性、分化程度、侵袭性和转移性等进行评估，为临床治疗提供重要依据。免疫组化染色是一种检测特定抗原或抗体表达的方法，应用于各种肿瘤和炎症性疾病的诊断中。通过检测特定抗原或抗体的表达，可以评估肿瘤的分子分型、预后和治疗策略。同时还可以协助鉴别病原体、评估疾病的活动度及指导治疗方案。研究发现，细胞块HE切片及免疫组化染色具有高分辨率和敏感性，能够清晰地显示细胞形态学和抗原性的变化，这使得病理学家能够对疾病进行精确的诊断和鉴别诊断，提高临床诊断和治疗的准确性。细胞块HE 切片及免疫组化染色可以提供丰富的病理学信息，包括细胞形态、组织结构、抗原表达等，这些信息有助于临床医生全面了解患者的病情，为治疗方案的制定提供更多依据[10]。

本研究采用先行HE 切片、再开展免疫组化染色的方法，旨在达到定位肿瘤细胞的效果，利于肺癌的病理诊断与鉴别诊断。在实际操作过程中，若发现患者的癌细胞数量较少或几乎没有，可以省略免疫组化染色步骤，从而提高检测效率。在完成切片和染色后，通过抗体组合染色，可以对患者的肿瘤病理情况进行详细分析。本研究中，不同分型的肺癌患者表现出差异化的染色结果，经支气管冲洗液细胞块HE 切片及免疫组化染色，肺癌分型检出率达到85.59%，而液基薄层细胞学检查的肺癌分型检出率仅为58.47%，明显体现出前者的优越性。深入分析这一结果，首先，HE 切片和免疫组化染色的组合能够更准确地定位肿瘤细胞，为病理诊断和鉴别诊断提供有力支持。尤其是在癌细胞数量较少的情况下，免疫组化染色能够提高检测的准确性，避免误诊和漏诊。其次，抗体组合染色能够针对不同的肿瘤类型，呈现出特定的染色结果，为肿瘤分型提供依据。本研究中，抗体组合染色分型检出率达到85.59%，显著高于液基薄层细胞学检查的58.47%。这说明抗体组合染色在肿瘤诊断方面的敏感性和特异性较高，有助于临床医生对患者进行精细化管理。此外，本研究方法还具有以下应用优势：一方面，通过HE 切片和免疫组化染色的优化组合，可以降低检测成本，提高检测效率。另一方面，抗体组合染色能够满足临床对肿瘤诊断的精准性需求，有助于提高患者的治疗效果和生存率。需要注意的是，小细胞肺癌的恶性程度较高，因此Ki-67 的表达具有较高的参考价值。在肿瘤细胞较少的情况下，如果考虑为小细胞肺癌，需要与淋巴瘤进行鉴别，并借助PAX-5 进行诊断分析。

综上所述，支气管冲洗液细胞块HE 切片及免疫组化染色在肺癌病理诊断和鉴别诊断中具有较高的应用价值，能够为临床医生提供可靠的诊断依据，值得在临床上广泛应用。