口腔癌组织MK、SPARC表达量与临床病理及预后转归的关系

王现玲 孙吏聪 郭培云 吕艳丽

近年来，口腔癌患病率逐年增加，尤以年轻人居多，由于口腔癌早期症状不太明显，被临床发现时往往确诊为中晚期，导致患者生存率不高[1]。因此，早期诊断对改善口腔癌患者的生存率具有重要意义。中期因子(midkine，MK)是1988年Kadomatsu等发现的肝素结合生长因子，可以修复创伤，加快神经生长，增强纤维溶酶活性[2]。有研究报道[3]，MK在肾癌患者中的表达高于良性病变患者，可以提高肾癌的临床诊断准确率。富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)是1981年Termine等分离提纯的细胞基质蛋白，在血管新生、组织修复、细胞迁移等方面发挥重要作用[4]。已有研究证实，SPARC在多种恶性肿瘤中存在高表达，但在口腔癌的相关报道较少[5]。本研究探讨口腔癌组织MK、SPARC表达量与临床病理及预后转归的关系，旨在为口腔癌的早期诊断给出有价值的参考指标。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取本院2016年3月至2017年10月行手术切除的口腔癌标本组织84例，另取癌旁正常口腔组织作为对照。纳入标准：①经病理及组织学检查确诊为口腔癌；②年龄大于18周岁。排除标准：①合并脏器疾病；②合并全身慢性疾病；③其他恶性肿瘤；④精神类疾病；⑤手术前没有进行过化疗。入选患者中男性46例，女性38例；年龄28～79岁，平均(64.32±5.82)岁；癌旁正常口腔组织距离肿瘤边缘5 cm以上，经病理证实无肿瘤浸润。

1.2 方法

对MK、SPARC进行免疫组织化学染色，操作严格按照试剂盒(北京中山生物技术有限公司)说明书进行。(1)在光镜(×400)下，MK阳性标准为细胞膜/质中观察到清晰的棕黄色颗粒。随机选取10个视野，阳性细胞数15%以上为高表达，小于15%为低表达[6]。(2)采用半定量积分法判定SPARC结果，SPARC阳性为细胞质和细胞间质呈黄色。以染色强度计分：棕褐色3分，棕黄色2分，浅黄色1分，无色0分。在光镜(×400)下，随机选取5个视野，阳性细胞百分比>75%为4分，>50%～75%为3分，>10%～50%为2分，≤10%为1分，阴性为0分。两项的乘积大于或等于3分，为免疫组化阳性，反之阴性[7]。

1.3 随访

于术后通过电话询问、门诊复诊等方式随访，统计患者的死亡率，以患者死亡为观察终点，随访截止时间是2020年10月。

1.4 观察指标

癌组织和癌旁组织中MK和SPARC的表达差异，MK和SPARC表达水平与临床病理特征以及患者3年生存率的关系。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 2组组织中MK和SPARC表达情况比较

口腔癌组织中MK的高表达率为52.38%(44/84)，高于癌旁组织的2.38%(2/84)(χ2=52.807,P<0.001)；SPARC的阳性表达率为40.48%(34/84)，低于癌旁组织的65.48%(55/84)(χ2=10.537,P=0.001)。

2.2 癌组织中MK、SPARC表达水平与临床病理特征的关系

MK在分化程度低、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ、Ⅳ的口腔癌组织中，高表达率高于分化程度高、无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ、Ⅱ的口腔癌组织(P<0.05)，而在不同年龄、性别、肿瘤直径的口腔癌组织中无明显差异(P>0.05)；SPARC在分化程度低、无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ、Ⅱ的口腔癌组织中，阳性率高于分化程度高、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ、Ⅳ的口腔癌组织(P<0.05)，而在不同年龄、性别、肿瘤直径的口腔癌组织中无明显差异(P>0.05)。见表1。

表1 MK、SPARC表达水平与口腔癌临床病理的关系(例，%)

2.3 不同MK和SPARC表达水平与患者预后关系

对84例口腔癌患者进行随访，随访36个月，以患者口腔癌复发死亡为观察终点，死亡45例，3年总生存率是46.43%(39/84)。MK高、低表达者3年生存率分别是38.64%(17/44)、55.00%(22/40)，差异有统计学意义(χ2=4.095，P=0.043)，见图1。SPARC阴、阳性患者3年生存率分别是22.00%(11/50)、82.35%(28/34)，差异有统计学意义(χ2=29.638，P<0.001)，见图2。

图1 不同MK表达口腔癌患者生存曲线图

图2 不同SPARC表达口腔癌患者生存曲线图

3 讨论

口腔癌多发于头颈部，与患者吸烟饮酒、局部刺激、病毒入侵等因素有关，目前，还没有研究报道给出明确的发病机制[8]。MK是肝素结合生长因子家族中的一员，名称是由妊娠中期首字母与肾脏英文首字母的合成，最早在小鼠胚胎瘤细胞中被发现[9]。有研究指出，MK与肿瘤的发展关系密切。正常组织中MK低表达或几乎不表达，而在已有的文献报道中，大肠癌、宫颈癌、肝癌、卵巢癌等癌组织中均呈现高表达[10]。研究结果显示，与癌旁组织相比，口腔癌组织中MK的高表达率更高；且在分化程度低、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ、Ⅳ的口腔癌组织中，MK的高表达率更高，提示MK参与了口腔癌的发生和发展，有望成为口腔癌早期诊断的监测指标。钱涛等[11]研究表明，MK高表达率在肝内胆管癌肿瘤组织中表达更高，且表达水平与淋巴结转移、分化程度、临床分期有关；研究结果与其一致。MK可通过诱导增加交感神经元的数量，促进神经母肿瘤细胞的发生；还可以上调Notch信号通路相关蛋白，促进口腔癌细胞的增殖与迁移，进而促进口腔癌组织的生长与分化。MK生存曲线图显示，MK高表达口腔癌患者的生存率低于低表达者，与方慧英等[12]研究结论基本一致，提示MK与口腔癌预后关系密切。

SPARC是由成纤维细胞、内皮细胞等不同类别细胞分泌的糖蛋白，主要位于细胞外基质中，可作用于细胞基质，使其成分和结构发生变化来阻断基质合成过程，同时可促进间质降解酶、胶原酶等多种蛋白酶的合成，在血管生成、肿瘤细胞表达中发挥作用[13]。SPARC在肿瘤组织中的表达呈两级分化，在有些癌组织中低表达甚至几乎不表达，而在部分癌组织中高表达，如前列腺癌、肺癌、黑色素瘤等。张书勤等[14]研究发现，SPARC在乳腺癌肿瘤组织中高表达，具有促癌作用。在细胞外基质中，SPARC可以降解基质蛋白，破坏细胞外基质的屏障保护功能，有助于肿瘤细胞迁移。此外，SPARC还能通过增加基底膜溶解产生的钙离子结合肽，促进生成肿瘤血管，进而促进肿瘤的侵袭能力和转移过程。本研究SPARC的表达结果与其相反。研究中，与癌旁组织相比，口腔癌组织中SPARC的阳性表达率更低；且在分化程度高、无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ、Ⅱ的口腔癌组织中，SPARC的阳性表达率更高，提示SPARC参与了口腔癌的发生和发展，有望成为口腔癌早期诊断的监测指标。SPARC在口腔癌中具有抑癌效果，作用机制有3个方面：(1)可以抑制基质金属蛋白酶-7等肿瘤细胞因子的表达，减少肿瘤血管生成；(2)作用于内皮细胞DNA的合成过程，从而限制癌细胞的生长；(3)提高肿瘤细胞在放、化疗中的敏感性，有助于加速肿瘤细胞凋亡。生存分析显示，SPARC阳性患者的生存期低于阴性患者，提示SPARC阳性表达可以提高口腔癌患者的生存率。

综上所述，MK和SPARC在口腔癌组织中表达水平比癌旁组织中更高。MK和SPAR在口腔癌组织中表达水平均与分化程度、有无淋巴结转移、临床分期有关；生存分析显示，MK低表达和SPARC阳性的口腔癌患者生存率更高。MK和SPARC可以作为口腔癌疾病发展及预后的指标，检测其水平有助于临床及时干预治疗，进而提高口腔癌患者的生存率。