β-地中海贫血不同基因分型红细胞参数变化及其临床意义

刘小琳，杨浩，任天凤

信宜市妇幼保健院检验科，广东 茂名 525300

β-地中海贫血是由于基因β-珠蛋白被抑制而引发的血红蛋白疾病，它属于小细胞低色素溶血性贫血，危害性较大，我国南方地区尤为常见，且有较高的遗传性[1]。目前诊断地中海贫血的金标准是基因检测，主要是依据聚合酶链反应(PCR)与分子生物学相结合的技术进行。然而这种方式操作步骤复杂、费用比较高且有较高的设备要求，广泛于临床上开展并不现实[2-3]。我国在筛查β-地中海贫血中，广泛推荐红细胞脆性试验(RCOF)和平均红细胞体积(MCV)两种方式，然而多项文献显示，这两种方式结合对β-地中海贫血检测漏诊率较高[4]。使用红细胞参数诊断和筛查β-地中海贫血在国内外属于比较简便且常见的检测方式，然而针对相关参数的使用价值缺少整体性评估。红细胞参数筛查和诊断的临界值实用性、临床值范围等都需更进一步研究分析，通过分析研究可以使各项参数于临床中发挥它们的筛查价值[5]。本研究选择本院近年来收治的β-地中海贫血患者为研究对象，探讨不同基因型β-地中海贫血患者红细胞参数的差别，希望发现一种方便快捷、简单易行的筛查手段，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2020年6月至2021年1月信宜市妇幼保健院收治的100例β-地中海贫血患者纳入研究。贫血诊断标准：MCV小于80 fl，红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)小于320 g/L，MCH小于27 pg，6个月～5岁血红蛋白浓度(Hb)小于110 g/L，5～12岁Hb＜115 g/L，12～14岁Hb＜120 g/L。β-地中海贫血诊断标准：①与贫血诊断标准相符，临床特征有地中海贫血面容、肝脾肿大等；②通过实验室检查血红蛋白A2正常或大于3.5%，增加HbF等；③诊断基因出现β基因缺陷。100例患者中男性54例，女性46例；年龄13～47岁，平均(32.64±2.74)岁。本研究经医院医学伦理委员会审核通过，所有患者及其家属均对本研究知情并签署同意书。

1.2 观察指标与评价(检测)方法(1)检测所有患者β-地中海贫血不同基因型分布。地中海贫血基因检测方法：选择全血基因提取试剂盒对基因组DNA(外周血)进行提取，选择中国珠海亚能公司基因诊断试剂盒，采用PCR-反向点杂交法对β-地中海贫血的点突变(17种)进行诊断，主要有检测分析、PCR扩增、杂交。(2)比较β-地中海贫血βE/βN、β+/βN、β0/βN三种基因型红细胞参数。红细胞参数检测方法：所有患者抽取2 mL肘静脉血，抗凝使用乙二胺四乙酸二钾，选择全自动血细胞分析仪Sysmex XE-5000及其配套试剂(日本东亚公司)对血红蛋白浓度(HGB)、红细胞计数(RBC)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)进行检测。所有样本均于2 h之内完成检测。

1.3 统计学方法应用SPSS19.0统计软件分析数据。计量资料符合正态分布，以均数±标准差(±s)表示，多组比较采用F检验，两两比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 所有β-地中海贫血患者的不同基因型分布100例β-地中海贫血患者中，有2例βE/βN基因型，均为CD26/N，占2.00%；有40例β+/βN基因型，其中IVS-II-654/N最多，占30%；有58例β0/βN基因型，其中CD41-42/N、CD17/N较多，分别占34.00%、14.00%，见表1。

表1 所有β-地中海贫血患者的不同基因型分布

2.2 β-地中海贫血βE/βN、β+/βN、β0/βN三种基因型红细胞参数比较β+/βN与β0/βN基因型的HGB、MCH、MCV、MCHC明显低于βE/βN基因型，RBC、RDW明显高于βE/βN基因型，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 β-地中海贫血βE/βN、β+/βN、β0/βN三种基因型红细胞参数比较(±s)

表2 β-地中海贫血βE/βN、β+/βN、β0/βN三种基因型红细胞参数比较(±s)

注：与βE/βN比较，a P＜0.05；与β+/βN比较，b P＜0.05。

组别βE/βN β+/βN β0/βN F值P值例数2 40 58 HGB(g/L)137.83±8.12 129.38±12.04a 128.36±15.42ab 1.042 0.327 RBC(×1012/L)5.42±0.44 6.43±0.66a 6.49±0.90a 3.428 0.040 MCH(pg)25.06±0.95 20.01±1.53a 19.21±1.27ab 25.053 0.001 MCV(fl)76.57±3.28 64.98±4.76a 63.86±4.32ab 14.837 0.001 RDW(%)13.44±0.51 15.48±1.18a 17.20±1.22ab 21.816 0.001 MCHC(g/L)327.92±9.11 310.05±8.73a 308.63±9.14ab 8.792 0.001

3 讨论

β-地中海贫血是由基因β珠蛋白点突变引发，较少部分为缺乏β珠蛋白基因导致，链合成β珠蛋白降低就是β+地中海贫血，完全不能合成β珠蛋白就是β0地中海贫血，此病病情较轻时无临床特征，较严重时会出现溶血性贫血，并为进行性，有较高的残疾率与死亡率[6]。1995年，世界卫生组织公布的数据显示世界上有1.6%的人口携带β-地中海基因，且每年约有3万人患有β-地中海贫血，高发区之一就是中国，其中四川省患有此病的几率为2.18%，广东、广西发生β-地中海贫血的几率分别为2.54%与6.43%，发病率均较高[7]。

基因β-珠蛋白突变对基因β-珠蛋白作用的影响主要是经由显性突变、RNA加工突变、RNA翻译突变及转录突变等，杂合子β-地中海贫血，像β+/βN、β0/βN，这往往会引发轻型β-地中海贫血[8-9]。我国大部分相关学者认为通过检测红细胞参数能够对β-地中海贫血进行筛查，然而都无对应参数筛查、诊断的临界值，还需要对适用范围进行更进一步的研究探讨，因此应用各参数还比较困难，目前还不能充分发挥红细胞参数的筛查作用[10-11]。

目前，MCH、MCV已经广泛被用于筛查地中海贫血中，通过这两种指标进行筛查有较高的特异性和灵敏度[12-14]。本文对100例β-地中海贫血病患的红细胞参数进行检测，MCH、MCV水平出现明显降低，RDW表现出明显的不正常，MCHC、RBC表现出轻微的不正常。100例病患中，基因β0/βN型占58.00%，基因β+/βN型占40.00%，基因βE/βN型占2.00%，以-28/N(8.00%)、CD17/N(14.00%)、IVS-II-654/N(30.00%)、CD41-42/N(34.00%)为主，同深圳地区[15]较为多见的突变类型基本相符。对比β+/βN同β0/βN基因型的红细胞参数发现，HGB、MCH、MCV、MCHC、RDW差异均有统计学意义。同β+/βN病患比较，β0/βN病患MCH、MCV水平降低，MCH在20 pg徘徊，MCV在64 fl徘徊。这表明在实际操作过程中能通过对红细胞参数进行综合分析，特别是MCH、MCV水平降低的幅度，来对β0/βN同β+/βN病患进行辨别。对于βE/βN来说，它的HGB、MCH、MCV、MCHC、RBC、RDW水平同β+/βN、β0/βN均有显著的差异，容易进行区分。

综上所述，不同基因型β-地中海贫血患者的红细胞参数水平各不相同，对临床区分β-地中海贫血的不同基因分型有参考价值。