苹果中腐霉利残留快检测定及方法评估

◎ 李 娟，高 华，陈海元，谭慧林

（阿克苏地区食品安全检测中心，新疆 阿克苏 843000）

腐霉利是二甲酰亚胺类杀菌剂，是一种新型杀菌剂，也是低毒性杀菌剂，具有安全、低价、效果好等优势，因此广泛应用于蔬菜和水果的栽培中，防治灰霉病和菌核病。腐霉利不规范使用会在植物中富集，长期暴露会对人体生殖系统产生影响，美国环境保护署（Environmental Protection Agency，EPA）认为，腐霉利能引发人体雄激素依赖组织发生组织学变化，或对其他类似内分泌系统产生负面影响，严重影响人类健康[1]；腐霉利对土壤微生物的能量合成、DNA合成、蛋白质合成等多种生理功能都有负面影响，且腐霉利还会增加土壤中致病菌毒力因子基因的丰度，对环境健康构成一定风险[2]。因此，腐霉利残留的测定对人们的健康和保护环境具有非常重要的意义。目前，腐霉利残留的检测主要利用荧光光谱法、高效液相色谱法、气相色谱串联质谱法等，这些方法具有选择性好、灵敏度及准确度高的优点，但存在耗时长、出结果慢等特点；快检法样品前处理简单，结果分析准确快速，携带方便，可随时随地进行现场实时检测。

国际上的快检产品评价体系已经发展得比较完善，但国内快检产品评价体系刚刚起步，存在质量参差不齐、稳定性不足、灵敏度偏低、重现性差等缺点，原食品药品监督管理总局印发的《食品快速检测方法评价技术规范》为快检试剂盒的评估提供了纲领性文件，本研究以《食品快速检测方法评价技术规范》为依据，旨在为腐霉利的残留快筛提供技术借鉴。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

实验所用苹果样品均采购于阿克苏市销售场所，均为阿克苏市当地苹果。腐霉利标准物质（浓度为1 000 μg·mL-1），北京坛墨质检科技有限公司；乙腈（色谱纯）、正己烷（色谱纯），北京迈瑞达科技有限公司；腐霉利快检试剂盒，均采用竞争法免疫胶体金检测技术，为避免评价结果作为厂家宣传工具，简称为试剂盒A、试剂盒B、试剂盒C。

1.2 仪器与设备

GC 2010 Pro气相色谱仪，日本岛津；NNW弗罗里矽柱，上海纳诺微新材料科技有限公司；高速匀浆机、涡旋仪，艾卡（广州）仪器设备有限公司；氮吹仪，上海安谱实验科技股份有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

取苹果样品2.5 kg，缩分后切碎，充分混匀后粉碎，制成待测样，放入分装容器中，于-20 ℃下进行保存，实验备用。

1.3.2 测定方法

按照行业标准《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》（NY/T 761—2008）对蔬菜和水果中有机氯类、拟除虫菊酯类农药多残留的测定要求，对待测样品进行提取、净化，并采用配有电子捕获检测器的气相色谱仪进行腐霉利含量的测定。

1.3.3 色谱条件

采用1.0 m内径的预柱和100%聚甲基硅氧烷分析柱；进样口温度200 ℃，检测器温度320 ℃；载气为纯度≥99.999%、流速为1 mL·min-1的氮气，辅助气为纯度≥99.999%、流速为60 mL·min-1的氮气；分流进样，分流比为10∶1；进样量为1.0 μL。

1.3.4 快检试剂盒测定

分别按照3种试剂盒的说明书要求进行具体操作。

（1）试剂盒A。称取（1±0.1）g待测样本于样品杯中（1 cm2左右，切勿将表皮切太碎，以免影响检测结果），加入5 mL配套腐霉利稀释液，手摇混匀30 s，放置于水平实验台上，充分提取1 min，此样本杯内混合液体即为前处理待测液。从包装袋中取出检测卡，水平放置于观察者正面，用移液器吸取80 μL稀释后的前处理待测液，垂直缓慢滴加到检测卡加样孔（S）中，液体流动时开始计时，反应5～6 min，根据示意图判定结果，其他时间判定无效。

（2）试剂盒B。将样品剪成1 cm左右碎片，称取1.0 g于离心管中，加入6 mL腐霉利提取液，手动振荡30 s，静置1 min后得到样品待检液。使用前将检测卡和待测样本溶液恢复至室温。从包装袋中取出试纸条，水平放置，取样品待测液70 μL垂直滴于加样孔中，加样后开始计时，10 min后即可观察结果，超过12 min后判读无效。

（3）试剂盒C。检测前将样品剪碎成小于1 cm的碎片或细碎小丁，称取1 g剪碎的样品于15 mL离心管中，加入6 mL腐霉利稀释液，盖上盖子，手动振荡30 s，静置1 min。从包装袋中取出检测卡，将检测卡平放，用一次性吸管垂直滴加3滴于加样孔中，加样后开始计时，10 min后即可观察结果。

（4）加标测定。分别取腐霉利终浓度为0 mg·kg-1、0.1 mg·kg-1、0.2 mg·kg-1、0.3 mg·kg-1、0.4 mg·kg-1和1.0 mg·kg-1的加标样品，分别用3种快检试剂盒按操作说明进行检测，并判断检测结果。

1.4 数据处理

依据原国家食品药品监督管理总局发布的《食品快速检测方法评价技术规范》计算实验所用试剂盒的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率、显著性差异和相对准确度，使用Mcirosoft Excel 2010对数据进行整理分析。

2 结果与分析

2.1 苹果中腐霉利农药残留的测定结果

采用行业标准《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》（NY/T 761—2008）对所选样品进行腐霉利残留的测定，结果均显示未检出，见表1，说明在市场销售环节的苹果没有腐霉利残留，该结果与腐霉利行业标准检测结果一致，未出现检测结果的偏离。

表1 不同批次苹果样本中腐霉利残留检测情况表

2.2 快检试剂盒的评估

根据3家快检试剂盒提供信息检出限均为0.2 mg·kg-1，因此规定≥ 0.2 mg·kg-1即为阳性样品，＜0.2 mg·kg-1为阴性样品。对3家快检试剂盒添加不同浓度的加标基质进行检测，结果如表2所示，表明3家快检试剂盒在检出限临界值时的检测结果存在差异。

表2 不同腐霉利加标浓度快检结果表

3 结论与讨论

本研究采用的3家试剂盒检出限规定均在腐霉利浓度为0.2 mg·kg-1以上显色，但在本次研究验证过程中，试剂盒A和试剂盒C在0.3 mg·kg-1以上才显色，较说明书规定的检出限高；试剂盒B在0.1 mg·kg-1浓度显色，导致假阳性率偏高。通过本次结果也可以看出，试剂盒B的灵敏度较其他两者高，但其容易出现假阳性结果，试剂盒A和试剂盒C的灵敏度相对较低，容易出现假阴性结果，这与蔡新发、刘婷等[3-4]的研究结果一致。罗俊霞等[5]利用6种商品化农残试剂盒对5种氨基酸甲酯类农药进行检测比对，结果显示对同一种农药而言，不同试剂盒的敏感性也不相同。因此，不同厂家生产的试剂盒效能不同，建议在使用之前对其适用性进行评价。

根据行业标准法和快检试剂盒法对阿克苏地产苹果进行腐霉利残留测定，结果均未检出腐霉利残留。通过在苹果样品中添加不同浓度的腐霉利标准品，结果显示试剂盒B的灵敏度高于试剂盒A和试剂盒C，特异性较低，假阳性率高达50%，假阴性率低；3家快检试剂盒的显著性差异和相对准确度相同。综上所述，腐霉利快检试剂盒适于在基层开展苹果中腐霉利筛查。