UPLC法测定卡托普利原料药的有关物质

邱荣荣，朱 娟，王亚芬

（常州制药厂有限公司，江苏常州 213000）

卡托普利（captopril）是首个人工合成口服有效的血管紧张素转换酶抑制剂，已广泛应用临床，主要用于高血压、充血性心力衰竭、心肌梗死、肾功能障碍等。尽管在各国药典[1-3]均有收载，但检测方法均存在一些不足，在前期研究过程[1-7]中发现，现有三种药典检测方法都不能很好分离本文确定的8个已知杂质（杂质A，C，G，H，I，J，M，N），都存在分析时间较长、分离度较差、峰型较差等问题。查阅文献，参考欧洲药典并结合目前药品快速检验技术不断更新和检验效率要求[1-7]，开发了超高效液相色谱法（UPLC）测定方法。本论文建立的UPLC方法操作简便、结果准确，分离度好、重复性好，分析效率高。

1 仪器与试药

Waters Aquity UPLC H-class超高压液相色谱仪，Empower3 软件；METTLER TOLEDO XP205DR电子天平；卡托普利原料药（常州制药厂有限公司，批号C170704）；卡托普利对照品（中检所，批号100318-201103）及杂质A，C，I，G，H，J，M，N对照品（常州制药厂有限公司）；乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH（2.1mm×100mm 1.7 μm）；流动相：以1 000mL水中加入0.3mL磷酸混匀为流动相A，以500mL水加入500mL乙腈加入0.3mL磷酸混匀为流动相B；以900mL水加入100mL乙腈加入0.3mL磷酸混匀为稀释液；进行梯度洗脱（见表1）；流速0.43mL/min；检测波长210nm；柱温50℃；样品室温度5℃；进样量1.8μL。

表1 流动相洗脱梯度

2.2 溶液的制备

称取卡托普利杂质A对照品10mg，置于20mL容量瓶中加稀释液溶解定容稀释至刻度摇匀；称取卡托普利杂质C，I，G，H，J，M，N各10mg，置于同一200mL量瓶中加稀释液溶解稀释至刻度摇匀；称取30mg卡托普利对照品置于10mL量瓶中加上述杂质溶液各1mL再加稀释液稀释至刻度，摇匀作为系统适应性溶液；称取卡托普利样品约125mg于25mL容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀作为供试品溶液；量取1mL供试品溶液置于100mL量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。再量取1mL于10mL量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀作为对照溶液。

2.3 专属性试验

取系统适应性溶液照“2.1”项色谱条件进样分析，系统适应性图谱见图1。结果表明，卡托普利主峰与各杂质峰均能达到良好的分离，各色谱峰间的分离度可达到4.5以上。

图1 系统适应性图谱

2.4 降解实验

称取本品125mg共9份，分别置25mL量瓶中，分别进行酸破坏（加4mL的0.5mol/LHCl溶液，放置2h，加0.5mol/LNaOH溶液4mL调pH至中性）、碱破坏（加4mL的0.5mol/LNaOH溶液，放置2h，加0.5mol/LHCl溶液4mL调pH至中性）、氧化破坏（加2mL 3%双氧水放置2h）、光照破坏（置于4500LUX±500LUX下光照12d）、高温破坏（置于100℃中放置4h）、高湿破坏（置湿度RH92.5%中放置14d）和未破坏均加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀作为降解供试品溶液。照“2.1”项下色谱条件测定上述溶液。降解实验结果：卡托普利与各杂质峰（降解杂质峰）均能达到良好的分离，峰纯度均符合要求（峰纯度阈值大于峰纯度角值），且质量保持平衡，能够有效检测样品中的降解产物，氧化破坏杂质A，G和特定未知杂质增长较大，酸、碱、高温破坏杂质A和特定未知杂质略有增长，其他破坏影响较小。

2.5 线性与校正因子

称取卡托普利及杂质C，I，G，H，J，M，N对照品各10mg置于同一200mL量瓶中加稀释液溶解并稀释至刻度摇匀，分别移取0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0mL置于10mL量瓶稀释液至刻度摇匀作为混合线性溶液；称取杂质A对照品25mg置于50mL量瓶中加稀释液溶解稀释至刻度摇匀，分别移取0.1、0.5、1.0、3.0、5.0、10.0mL置于100mL量瓶加稀释液至刻度摇匀作为杂质A线性溶液。照“2.1”项下色谱条件测定上述溶液，由浓度（μg/mL）对峰面积做线性回归方程及校正因子，卡托普利和各杂质A，C，I，G，H，J，M，N线性方程分别为Y=7 823.532 6X、Y=7 540.8X-156.3、Y=1 404.6X-22.6、Y= 7 002.0X+56.3、Y=1 411.9X+94.6、Y=4 189.27X-56.5、Y= 6 639.8X-264.5、Y=5 050.1X-319.4、Y=1 792.5X-150.2；相关系数均大于0.999 5，在相应浓度范围内线性良好；校正因子分别为1.0、5.6、1.1、5.5、1.9、1.2、1.6、4.4。

2.6 回收率试验

称取杂质A对照品25mg置于50mL量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀作为回收率贮备液①；称取杂质C，I，G，H，J，M，N对照品各10mg于200mL量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀作为回收率贮备液②。称取卡托普利样品100mg共12份，分别置于20mL量瓶中，分别加入0.1mL贮备溶液①和1.0mL贮备液②平行3份；1.0mL贮备溶液①及2.0mL贮备液②平行3份；2.0mL贮备溶液①及3.0mL贮备液②平行3份；2.4mL贮备溶液①及4.0mL贮备液②平行3份加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀作为回收率供试品溶液。照“2.1”项下色谱条件测定上述12份溶液，计算各杂质A，C，I，G，H，J，M，N回收率分别为96.6%、104.2%、90.4%、101.5%、101.1%、101.8%、92.5%、99.9%和RSD分别为3.2%、2.6%、3.9%、4.3%、1.3%、1.8%、6.5%、10.1%，表明本方法杂质回收率好。

2.7 检测限和定量限

精密称取卡托普利及杂质A，C，I，G，H，J，M，N对照品各10mg分别置于20mL量瓶中加稀释液溶解稀释至刻度摇匀，精密移取相应溶液适量，用稀释液逐级稀释，照“2.1”项下色谱条件进样分析，按信噪比S/N=10计算定量限0.38、0.32、0.53、0.36、0.64、0.95、0.91、0.58、2.33μg/mL均 低于相当于主成分0.05%限度水平，且连续6针峰面积RSD均小于5.0%；按信噪比S/N=3计算检测限分别为0.13、0.10、0.17、0.12、0.21、0.31、0.30、0.19、0.77μg/mL均低于相当于主成品0.02%限度水平。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液，于仪器样品室中（5℃）条件下，分别于0、4、8、12、18、24h，照“2.1”项下色谱条件进样分析，试验结果供试品溶液8h内较为稳定（杂质A随置时间有很小幅度增长，由0h的0.06%增长至8h的0.08%，峰面积的RSD%小于10%）。

2.9 耐用性考察

根据“2.1”项下色谱条件，分别改变柱温（48、52℃）、流速（0.41、0.45mL/min）、波长（208、212nm）、流动相A中磷酸加入量（0.02、0.04%）和流动相B中乙腈与水的比例（48∶52、52∶48）进行系统适应性溶液试验，结果表明上述色谱条件下，卡托普利与各杂质峰间均能达到较好分离，其参数的微小变化不影响检测，表明本方法耐用性较好。

3 结语

本文UPLC法测定卡托普利原料药有关物质，各杂质分离效果好、线性好、重复性好、准确度高、回收率好。与HPLC法比，UPLC法分析时间短、分离效率高、检出能力强、溶剂用量少，可用于卡托普利原料药有关物质的质量控制。