氯氮平片有关物质的测定

戴 琴，陈宇波，陈 凯

(常州制药厂有限公司，江苏 常州 213016)

氯氮平片为抗精神病药，该药用于精神阳性和阴性症状，适用于急性与慢性精神分裂症的各个亚型，也可减轻与精神分裂症状有关的情感症状。本文建立了UPLC法测定该品的有关物质[1]，方法简便、灵敏、准确。

1 仪器与试剂

Waters超高液相色谱仪。氯氮平片，本公司自制：批号：YZ18051911，规格25mg。对照品：氯氮平对照品（100323-201703），由中国药品食品检验所提供；杂质C，杂质D，本公司自制。试剂：三氟乙酸、甲醇和乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水-三氟乙酸（体积比，1000∶1，下同）为流动相A，以乙腈-三氟乙酸（1000∶1） 为流动相B，按表1梯度洗脱。检测波长为257nm，柱温为40℃，流速为0.5mL/min。

取杂质C和杂质D对照品适量，先加量瓶体积的80%的甲醇超声溶解，再用水稀释至刻度，制成每1mL约35μg的溶液作为各杂质贮备液，再称取氯氮平对照品约17.5mg，置于50mL量瓶中，加40mL甲醇超声溶解后，加入上述杂质C贮备液1.5mL和杂质B贮备液1mL后用水稀释至刻度，摇匀，制成每1mL约含氯氮平0.35mg、杂质C约1.05μg和杂质D约0.7mg的混合溶液作为系统适用性溶液[2]。取系统适用性溶液2μL，注入超高液相色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液出峰顺序为杂质C、氯氮平和杂质D，各组分分离度应不小于1.5。

表1 AB流动相梯度洗脱设计

3 灵敏度

取氯氮平对照品和杂质D对照品适量，用甲醇-水（80∶20） 逐步稀释进样，以S/N=10计算定量限，结果：氯氮平为0.021μg/mL，相当于供试品溶液的0.006%水平，杂质D为0.063μg/mL，相当于供试品溶液的0.018%水平。

4 线性范围

取氯氮平对照品和杂质D对照品适量，先用甲醇-水（80∶20） 超声溶解，再稀释至刻度，制成每1mL约7μg氯氮平和7μg杂质D的溶液作为线性贮备液。

按表2精密量取线性贮备液。分别置于相应量瓶中，用甲醇-水（80∶20） 稀释至刻度，摇匀，即得线性溶液。

表2 线性溶液配制方法

取上述溶液各2μL，注入超高液相色谱仪，并记录色谱图。得氯氮平线性回归方程为y=15409.06x+109.54，相关系数R=0.9999，杂质D线性回归方程为y=4949.45x+36.91，相关系数R=0.9999。结果表明：氯氮平在0.17～2.09μg/mL浓度范围内，线性关系良好，杂质D在0.18～2.11μg/mL范围内，线性关系良好。氯氮平的校正因子为1.0，杂质D的校正因子为3.1。

5 回收率

精密称取杂质D对照品适量，用甲醇-水（80∶20） 溶解并稀释制成每1mL约含杂质D约28μg的溶液作为贮备液。取氯氮平片细粉适量（约相当于氯氮平35mg），置一100mL量瓶中，按表3加入杂质D贮备液，加甲醇约80mL，超声是氯氮平溶解，再用水稀释至刻度。摇匀，离心，取上清液作为回收率溶液。每个水平平行配制3份。

取氯氮平片细粉适量（约相当于氯氮平35mg），置一100mL量瓶中，加甲醇约80mL，超声是氯氮平溶解，再用水稀释至刻度。摇匀，离心，取上清液作为本底供试品溶液。

表3 回收率溶液配制方法

分别量取上述回收率溶液和本底供试品溶液适量，用甲醇-水（80∶20） 各稀释制成每1mL含0.7μg氯氮平的溶液作为其对照溶液。

精密量取上述溶液2μL，注入超高液相色谱仪，并记录色谱图。按自身对照法以峰面积计算杂质D的回收率。80%水平的回收率为102.7%，RSD为0.6%；100%水平的回收率为101.4%，RSD为0.5%；120%水平的回收率为100.4%，RSD为0.5%。结果表明：该方法的回收率符合要求。

6 杂质干扰试验

取空白辅料适量，置100mL量瓶中，加甲醇-水 （80：20） 适量超声，再用甲醇-水 （80∶20）稀释至刻度。摇匀，离心，取上清液作为空白辅料溶液。取上述系统适用性溶液、本底供试品溶液、空白和空白辅料溶液各2μL，注入超高液相色谱仪，并记录色谱图。空白溶剂和空白辅料不干扰检测。

7 降解试验

取氯氮平片细粉三份（约相当于氯氮平35mg/份），各置100mL量瓶中，第一份加5mL 1mol/L盐酸溶液，第二份加5mL 1mol/L氢氧化钠溶液，第三份加5mL 10%双氧水溶液。各放置4h后，第一份和第二份分别用1mol/L氢氧化钠溶液和1mol/L盐酸溶液中和至中性。三份样品加甲醇约80mL，超声是氯氮平溶解，再用水稀释至刻度。摇匀，离心，取上清液2μL，注入超高液相色谱仪，并记录色谱图[3]。从色谱图看，降解杂质不干扰主峰检测。

8 结论

由上述实验可以看出：方法专属性好，线性良好，相关系数R大于0.999，准确度好，适用于有关物质的检测。