RP-HPLC测定兰索拉唑制剂中主药及有关物质的含量

刘丹花，高 青

（郑州澍青医学高等专科学校，河南 郑州 450064）

兰索拉唑是第二个质子泵抑制类抗溃疡药物，于1992年正式投放于法国市场，国内剂型主要有两种，即胶囊剂、片剂，规格同样有两种即15、30 mg，注射用已经获得FDA批准，但是国内市场上尚未进行销售[1]。为确保国内临床用药的需求得到充分满足，现对注射用与兰索拉唑肠溶片进行了研究，为更好地控制其治疗可使用兰索拉唑含量测定高效液相色谱法，这种是一种操作简单、准确、快速、重现性好的方法，能够更好地分离、测定相关检测对象物质组成、主药的具体含量值。

1 仪器和试药

仪器：本次试验使用的设备包括高效液相色谱仪、紫外检测器及工作站。

试药：准备兰索拉唑对照品与该药物的注射剂、口服肠溶片，准备的甲醇包括色谱醇、分析醇。

2 方法与结果

2.1 色谱条件和行为

（1）色谱柱：Shim-packC18；（2）流动相：甲醇-水-三乙胺-磷酸，1.0 ml/min-1；（3）检测波长：284 nm；（4）进样量20 uL。理论塔板数应大于1500，具体计算时需要严格按照兰索拉唑峰。

2.2 制备对照品、供试品溶液

（1）在棕色量瓶50ml放置精密称取的40 mg对照品，溶解时可以加入甲醇，稀释至刻度，充分摇匀后备用[2]。

（2）取5瓶注射用兰索拉唑、10片去肠溶衣的兰索拉唑肠溶片，将内容物倾出以后研细，进行准确的称量，在25 mL棕色量瓶中放置，溶解时加入流动相并稀释到刻度，充分摇匀后取精密量2 mL，同样在25 mL棕色量瓶中放置，组委供试品1、2溶液备用；另外，关于不含主药空白辅料的制备可分别根据注射用与肠溶片处方比例、制备工艺进行制备，关于空白供试品1、2溶液的制作可严格按照“供试品”项下方法。

2.3 考察线性关系

对照品溶液分别精密程度0.5 mL、2.0 mL、、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、10.0 mL，在25 mL棕色量瓶中分别放置，稀释到刻度，摇匀后便可得到相应系列溶度；然后分别注入液相色谱仪20 uL，以此将色谱图详细记录下来，关于标准曲线地绘制分别取浓度为横坐标、峰面积为纵坐标。经结果可知，浓度与色谱峰面积在16～320 ug·mL-1内的线性关系满足相关要求

2.4 精密度试验

从兰索拉唑对照品中，取出一部分溶液进行进样处理（重复），溶液取出量控制为20 uL，之后进行峰面积积分制测定时，要求严格根据上述色谱条件，精密度较好的条件为RSD=0.90%（n=6）[3]。

2.5 重复性试验

在同一批注射用、肠溶片中进行精密的称取，关于溶液的制备需要严格按照供试品1、2方法，按照对照品同样的方法进行操作，20 uL进样，认真记录色谱图，其含量的计算需采用外标法，注射用药物、口服用肠溶片两种药物的RSD分别为0.83%、0.90%，结合该结果说明该试验效果好。

2.6 辅料干扰试验

待试验条件最终确定以后，各取20 uL空白供试品1、2溶液，为记录色谱图可将液相色谱仪注入。研究发现，对于兰索拉唑峰辅料不会产生干扰作用，主峰和杂之峰之间具有良好的分离度。

2.7 最低检测限

试验条件确定后，在测定最低检测限进时可根据信噪比（S/N=3）进行，结果可知：在50 ng·mL-1浓度、20ul进样条件下，其峰信号是噪音的3倍，即最低检测限=1 ng。

2.8 回收率试验

称取10瓶处方量辅料，在研体钵中放置、摇匀后研细，然后取10瓶处方量的80%、100%、120%，加入，制作浓度不同的模拟样品，即低、中、高，上述细粉取适量，放置在25 mL棕色量瓶中，通过加入适量甲醇并振荡的方式来溶解主药，稀释到刻度后摇匀，作为供试品溶液；另外，在研钵中放置肠溶片10片处方量辅料，以下同注射用回收率试验制备。取上述两种溶液进样各20 uL，关于项下条件的测定需严格根据含量进行，对回收率进行计算，以此注射用的平均回收率为100.0%、RSD为1.08%，肠溶片尾99.63%、1.03%[4]。

2.9 测定样品含量

对照溶液和供试品1、2溶液各取20 uL，注入液相色谱仪，将色谱图记录下来，关于其含量的计算可采用外标法，结果如下表1。

2.10 检测相关物质

精密称取适量的注射用、肠溶片，在25 mL棕色量瓶中放置，稀释溶解到刻度、溶解，当作供应品溶液；分别取1 mL，在100 mL棕色量瓶中放置参照量瓶刻度值进行溶液稀释处理，待该项工作结束后可轻轻摇匀量瓶，于对照溶液中取出适量溶液，取出量控制为20 uL，使用液相色谱仪对这些溶液作以处理，在设备灵敏度符合检查要求的情况下进行相关物质检查，要求主成分峰峰高参考满量程标准，为其20%、不超过25%，然后各称取20 uL在液相色谱仪中注入，将色谱图到保留主成分峰的3倍记录下来。如果色谱图中存在杂质峰，则需要对各杂质峰面积进行科学的量取，对有关物质量进行科学的计算，如上表1。

表1 样品含量和有关物质测定结果（%）

3 讨 论

为有效分离兰索拉唑和辅料，可通过HPLC建立的方式，二者之间的分离度不得小于1.5，具有较高的色谱柱效[5]。本品与色谱峰面积具有良好线性关系的浓度范围为16～320 ug·mL-1，经含量测定所取得回收率较高，且重现性良好，辅料和有关物质均不会对其产生干扰，在临床上所具有的可靠性、准确性与灵敏度较高，有助于提高相关制剂质量。