HSP90α联合肿瘤标志物水平检测对肝癌患者预后的评估价值

罗小怀 桂普国 杜一鸿

肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是具有高发病率恶性肿瘤之一，我国肝癌发病率的增速是世界平均水平的2倍左右，已成为严重危害我国居民健康的主要问题[1-2]。由于各种因素的影响，肝癌患者确诊时大多数已经属于中晚期患者，导致预后比较差[3-4]。肝癌的影像学检查有一定的误差性，病理学检查也存在检查的创伤性、阅片者自身偏倚等不足[5]。近年来，随着现分子生物学技术、现代免疫组织化学的不断发展，通过检测肿瘤标志物与肿瘤细胞特异抗原等来诊断蛋白水平的变化已成为了可能[6]。甲胎蛋白(alphafetoprorein，AFP)作为肝癌的肿瘤标志物具有很好的诊断与评估效果，但因其灵敏度和特异度不高，在临床上的应用具有一定的限制[7-8]。HSP90是热休克蛋白(heat shock protein,HSP)家族中广泛存在于原核和真核细胞质中的高度保守的同源二聚体分子伴侣，人HSP90分为HSP90α和HSP90β两类，HSP90α不仅位于细胞内，也可分泌至细胞外甚或存在于细胞表明，与肿瘤高侵袭性及转移密切相关[9-10]。HSP90α在肝癌组织中过表达[11]，但HSP90α与肝癌的预后相关性及其与其他指标的联合检测价值还有待分析。本研究收集相关肝癌病例，探讨HSP90α联合肿瘤标志物水平检测在肝癌患者预后评估中的应用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

使用回顾性、总结研究方法，2014年7月至2017年2月选择在我院诊治的肝癌患者76例作为研究对象。纳入标准：临床、随访与病理学资料完整；在取样本前都无进行药物或者其他方法治疗；无严重心、肝、肾及血液系统等重要脏器疾病；年龄18～85岁；医院伦理委员会批准了此次研究标准。排除标准：临床、随访与病理学资料存在缺项或者不明确者；患有其他恶性肿瘤患者原发于肝癌；其他部位转移或复发的肝癌病例；未行手术或活检病例。

1.2 免疫组化分析

取所有患者的原发癌组织标本(癌症组)与癌旁组织标本(癌旁组，癌旁标本为相应的肠管组织，距离癌灶最边缘2 cm处，病理证实无肿瘤侵犯)。显微镜及病理图像分析系统(日本Olympus)；手术转轮切片机(德国LeicaRM2235)；微量移液器(美国Axg公司)；塑料孵育盒(北京中山金桥生物技术有限公司)。羊抗人HSP90α、AFP多克隆抗体均为美国Santa Cruz公司产品，SP试剂盒为福建迈新产品。

所有标本经10%福尔马林固定24 h，分别取癌灶组织、癌旁组织，然后裁剪成大小为1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm的组织块，脱水、透明、浸蜡、包埋、连续切片(4 μm)，然后进行免疫组化染色。

HSP90α与AFP都以细胞膜或(和)细胞质出现黄色或棕黄色颗粒为阳性反应，随机观察5个400倍视野，每个视野计算100个细胞，无细胞染色为未表达，小于10%的肿瘤细胞染色为弱表达，10%～50%的细胞染色为中度表达，大于50%的细胞染色为强表达，中度表达与强表达都定义为阳性。

1.3 调查与随访分析

收集两组的临床资料信息，进一步调阅肝癌患者的病史，通过查阅住院、门诊病历，或电话随访等方式对患者进行随访，核定诊断并进行组织学病理分型。随访至2018年3月，所有患者在随访中都积极遵医嘱进行治疗，记录患者的生存与死亡情况。生存时间定义为从手术至患者死亡的时间。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 一般资料情况

在76例患者中，男性40例，女性36例；年龄35～81岁，平均年龄(53.19±11.34)岁；平均体重指数为(22.51±1.62)kg/m2；淋巴结转移：有42例，无34例；分化程度：高分化20例，中分化20例，低分化36例；浸润深度：<肌层26例，≥肌层50例；所有患者都给予积极的对症治疗，包括手术治疗、化疗、靶向治疗等。

2.2 HSP90α与AFP阳性率对比

癌症组的HSP90α与AFP阳性率分别为85.5%和96.1%，癌旁组分别为7.9%和6.6%，对比差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 不同组织样本HSP90α与AFP阳性率对比(例，%)

2.3 随访情况

随访至2018年3月，76例患者中，死亡20例，生存56例，生存率为73.7%，中位生存时间为(28.33±4.19)个月。

2.4 HSP90α、AFP与生存情况的相关性

在76例患者中，HSP90α、AFP阳性患者的生存率均显著低于阴性患者(P<0.05)。见表2。以随访生存率作为因变量，以调查的内容与HSP90α、AFP表达作为自变量，Cox回归模型分析显示淋巴结转移、HSP90α、AFP阳性为影响肝癌患者预后生存的危险因素(P<0.05)，见表3。

表2 HSP90α、AFP与肝癌患者生存情况的相关性(例，%)

表3 影响肝癌预后生存的危险因素分析

2.5 评估价值

HSP90α预测患者预后生存的敏感性、特异性为83.3%和76.7%，AFP预测的敏感性、特异性为66.7%和100.0%，HSP90α联合AFP预测的敏感性、特异性为96.7%和100.0%。

3 讨论

肝癌为临床上比较常见的恶性肿瘤，不过早期症状不明显，发现病情时多为癌症中晚期，使得死亡率一直居高不下[12]。在常规检查中，影像学检查上倾向于良性肿瘤的表现，细针穿刺细胞学多需要石蜡组织病理检测后才可以确诊[13]。目前肝癌发病机理尚未完全了解，肝癌的发生归因于基因一环境的相互作用[14]。AFP是目前对肝癌诊断、评估和随访最常用的指标，但AFP检出肝癌有很好的敏感性，但是特异性不够；对于预后生存的预测特异性佳，但是敏感性不足。比如AFP水平尤其是在肝癌早期呈现低敏感性，而在肝硬化患者中确可表达为阳性，因此其在临床应用中存在一定的不足[15]。

HSP是机体在应激状态下合成的1组蛋白质分子，被称为分子伴侣或伴侣蛋白，参与细胞的生长和发育过程。HSP90α的分子量约为83～90 kD，由732个氨基酸组成，HSP90α参与PI3K-Akt信号通路和许多其他恶性肿瘤相关途径，并与肿瘤转移行为密切相关[16-17]。本研究显示癌症组的HSP90α与AFP阳性率分别为85.5%和96.1%，癌旁组分别为7.9%和6.6%，对比差异有统计学意义(P<0.05)，表明HSP90α在肝癌中呈现高表达状况。有研究表明用HSP90α抗体抑制HSP90α，可以阻止细胞的侵袭迁移及癌症的转移；用HSP90α抑制剂也可有效抑制HSP90α客白的致瘤活性，促进肿瘤细胞凋亡[18]。

肝癌一旦发生其他脏器的转移则明显影响患者预后。本研究显示在76例患者中，HSP90α、AFP阳性患者的生存率都显著低于阴性患者(P<0.05)；Cox回归模型分析显示淋巴结转移、HSP90α、AFP阳性为影响肝癌患者预后生存的危险因素(P<0.05)。HSP90α在多数肿瘤细胞中的表达量为细胞的2～10倍，可参与了肿瘤进展的关键环节[19]。有研究显示HSP90α在胃癌、乳腺癌等肿瘤中高表达，并与肿瘤分级分期及预后密切相关，高表达的HSP90预示着肿瘤的预后不良[20]。

寻找有效、安全的预测肝癌患者预后的方法，对于降低肝癌的死亡率意义重大[21]。理想的肝癌标志物应具有较高的灵敏度与特异度。AFP在我国仍是临床上非常重要的肝癌诊断指标，但是其预测预后的价值还有所不足[22]。现代研究表明肝癌的发展是1个多因素、多步骤的调控过程所有这些步骤均由生长因子、细胞和细胞外基质间的相互作用所调控[23]。HSP90α与肿瘤高侵袭性及转移密切相关，许多肿瘤细胞中HSP90α的表达升高，且表达与细胞多个部位，具有很好的早期检测与预测价值[24-25]。本研究显示HSP90α预测患者预后生存的敏感性、特异性为83.3%和76.7%，AFP预测的敏感性、特异性为66.7%和100.0%，HSP90α联合AFP预测的敏感性、特异性为96.7%和100.0%，表明联合检测具有更好的预测预后价值。

总之，HSP90α与AFP在肝癌患者中都呈现高表达水平，与患者预后生存显著相关，两者联合检测可有效预测肝癌患者的预后生存情况。