虾青素、二十二碳六烯酸、磷脂酰丝氨酸相互配伍功效作用研究

曲 辉，李丽杰，刘 霞

(1.聊城大学 药学院，山东 聊城 252000；2.青岛海佑海洋生物工程有限公司，山东 青岛 266100；3.荣成市人民医院，山东 威海 264300)

我国保健食品行业发展迅速，新资源食品成为现代研究的热点。有资料表明含有虾青素、二十二碳六烯酸(DHA)、磷脂酰丝氨酸的保健食品具有增强免疫和辅助改善记忆力的功效[1-6]。本文根据中国科学院心理研究所编制《临床记忆量表》[7]评价该保健食品对受试者的记忆力水平的影响，并参照《保健食品检验与评价技术规范》[8]进行辅助改善记忆力的人体试食实验和增强免疫力的动物功能实验，判定虾青素、DHA、磷脂酰丝氨酸相互配伍的功效作用。

1 实验前准备

1.1 受试物

虾青素、DHA、磷脂酰丝氨酸复合物软胶囊由某公司提供，人体每日推荐量为2 g；分别含虾青素(5%)10 mg/d、DHA(35%)210 mg/d、磷脂酰丝氨酸(50%)200 mg/d。将该受试物按成人5、10、30倍量设置低、中、高剂量组进行设计动物实验，受试物以灌胃的方式进行给予实验动物，并用大豆油补足，灌胃量为20 mL/kg。

1.2 实验方法

本实验参考《保健食品检验与评价技术规范》中辅助改善记忆力与增强免疫力功能的检验方法，并结合本实验研究的需要，设计改良实验方案，除试验分组及实验给药剂量外，其余实验步骤、数据分析等均参照《保健食品检验与评价技术规范》，来探索虾青素、DHA以及磷脂酰丝氨酸在辅助改善记忆力和增强免疫力方面的作用。

1.2.1 辅助改善记忆力实验

1.2.1.1 受试人群及材料

受试者为8～9岁成绩不太理想，身体健康的小学三年级学生，男女各半。临床记忆测试使用中国科学院心理研究所研制的甲、乙两套测试材料及量表手册。

1.2.1.2 实验分组及方法

在学生及监护人自愿的情况下，通过填写基本调查表和处理前记忆量表测试，剔除正在服用与本产品功能类似的学生和剔除高记忆商学生，保留受试者60名。受试者按照处理前记忆商各组进行均衡，分为受试组和对照组。采用双盲法，受试组服用复合物2 g/d，对照组服用安慰剂(服用除有效成分外，其剂型、口感、外观和包装与复合物完全相同)，连续服用30 d，采用临床记忆量表测试指向记忆、联想学习、图象自由回忆、无意义图形再认和人像特点回忆。处理前后甲、乙两套记忆量表交叉使用，每一受试者前、后两次测试在同一地点由同一主试者作单个测试。

1.2.2 增强免疫力实验

1.2.2.1 主要仪器材料

RPMI1640细胞培养液、小牛血清、2-巯基乙醇(2-ME)、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、盐酸、异丙醇、MTT、Hank's液、PBS缓冲液(pH值7.2～7.4)、纱布或200目筛网、24孔培养板、96孔培养板(平底)、手术器械、二氧化碳培养箱、酶标仪、721分光光度计、超净工作台、高压来灭菌器、无菌滤器；计时器、计时器、血色素吸管、印度墨汁、Na2CO3；恒温水浴、离心机、玻片架、200目筛网、SRBC、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液，琼脂糖；YAC-1细胞、Hank's液(pH值7.2～7.4)、RPMI1640完全培养液、乳酸锂或乳酸钠、硝基氯化四氮唑(INT)、吩嗪二钾酯硫酸盐(PMS)、NAD、0.2 mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH值8.2)、1%NP40或2.5%Trito等。

1.2.2.2 实验动物

SPF级雌性昆明种成年小鼠50只，体重18～22 g。由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供；实验动物饲料由北京科奥协力饲料有限公司提供。

1.2.2.3 实验分组

将160只小鼠分为4个免疫大组，每个免疫大组再分别为空白组、低、中、高剂量组，分别进行ConA诱导的淋巴细胞转化实验、小鼠碳廓清实验、抗体生成细胞测定实验以及NK细胞活性测定。

1.3 数据处理

各实验的实验数据均用SPSS软件对原始实验数据进行统计分析。

2 实验结果

表1 实验前各组各分测验量表分和记忆商比较

由表1可知，参与实验的受试者均能完成整套实验。受试组与对照组均有50人，每组男生25人、女生25人；处理前受试组与对照组各测验量表分和记忆商比较，差异均无显著差异性(P>0.05)，说明处理前受试组与对照组水平均衡。

表2 实验后各组各分测验量表分和记忆商比较

由表2可知，受试组服用虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊30 d前后的各分测验量表分和记忆商差异均有高度显著性，指向记忆、联想学习、图象自由回忆、无意义图形再确认、人像特点回忆、记忆商(显示受试组的语文和非语文记忆能力以及整体记忆水平)均有显著改善(P值均<0.01)；受试组与对照组的各分测验量表分和记忆商差异均有高度显著性(P值均<0.01)。

表3 受试物对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响-细胞免疫功能

注：*P<0.05，**P<0.01。

由表3可知，经口给予小鼠不同剂量的虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊30 d，经统计学处理,其淋巴细胞增殖能力在正常对照组与低剂量组之间比较无显著性(P>0.05)，在正常对照组与中、高剂量组比较差异均有显著性(P<0.05，P<0.01)，即虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊可增强小鼠淋巴细胞转化能力。

表4 受试物对小鼠血清溶血素的影响-体液免疫功能

注：*P<0.05，**P<0.01。

由表4可知，经口给予小鼠不同剂量的虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊30d，经统计学处理，其抗体积数在正常对照组与低剂量组之间比较差异无显著性(P>0.05)，在正常对照组与中、高剂量组间比较差异性(P<0.05，P<0.01)，即虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊可提高小鼠血清溶血素水平。

由表5可知，经口给予小鼠不同剂量的虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊30 d，经统计学处理，其单核-巨噬细胞碳廓清能力在正常对照组与低、中剂量组比较，差异均无显著性(P>0.05)；在正常对照组与高剂量组间比较差异性(P<0.05)，即虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊可以提高小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清能力。

表5 受试物对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力的影响-单核-巨噬细胞功能

注：*P<0.05，**P<0.01。

表6 受试物对小鼠NK细胞活性影响

注：*P<0.05，**P<0.01

由表6可知，经口给予小鼠不同剂量的虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊30 d，经统计学处理，其NK细胞活性在正常对照组与低剂量组之间比较，差异无显著性(P>0.05)，在正常对照组与中、高剂量组之间比较，差异均有显著性P<0.05或P<0.01)，即虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊可增强小鼠NK细胞活性。

3 分析与结论

人体的中枢神经系统富含丰富的不饱和脂肪酸和铁，并且极易受氧化损伤，而虾青素超强的氧化性能够透过血-脑脊液屏障，淬灭损伤性的活性氧，起到辅助改善记忆力的作用，同时虾青素还能诱导细胞分裂的活性，起到免疫增强剂作用，具有提高免疫力的功效[9]；DHA来源为前体脂肪酸α-亚麻酸，DHA作为长链不饱和脂肪酸，在生物膜中含量的增加对膜的流动性、物质的通过性、受体活性均会产生一定的影响，可提高膜的生理机能，有利于增强神经信息的传递，增强脑和神经系统的活性，对维持大脑发育、功能有着举足轻重的作用。DHA还可以抑制癌症的发生、生长和转移，并通过抑制促炎症因子产生，调节粘附分子表达来调节免疫功能[10]；磷脂酰丝氨酸是某种神经的主要成分，能营养和活化脑中各种酶的活性、减缓神经递质的减少，并对大脑具有修复作用，对维持大脑的功能平衡，以及消除神经疲劳，活化脑细胞，提高活性酶的活性，保持机体各项生理功能稳步运行，以起到增强改善与记忆增强免疫的作用。

综上所述，本品受试物软胶囊中的有效成分虾青素、DHA、磷脂酰丝氨酸均有确切的功能作用。

辅助改善记忆作用的人体试食实验，是参照《保健食品检验与评价技术规范》方法进行，并在受试者和监护人自愿的前提下开展。为了消除心理暗示，试验中使用安慰剂；为减少系统误差，受试者前后两次由同一主试者施测；为避免外界干扰与生物节律的影响，进行单个测试并在同一地点进行。临床记忆量表的五项测试实验，均能很好的反映记忆的整体水平。对虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊改善记忆力人体试食实验证明，该产品具有改善记忆水平的作用。

根据《保健食品检验与评价技术规范》增强免疫力功能实验中的判定结果，经口给予虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊30d，对小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性测定结果均呈阳性，结果表明虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊具有增强免疫能力功能的作用。

因此，虾青素DHA磷脂酰丝氨酸软胶囊具有增强免疫和辅助改善记忆力的功效作用。