食品中喹诺酮类抗生素多残留同时检测研究

李嘉慧，刘凤银，王宇，黄松，彭心愉，穆洪涛＊

（1.广东第二师范学院生物与食品工程学院，广东广州 510303；2.广州市食品检验所，广东广州 511400）

喹诺酮类抗生素是一种广谱性的抗菌剂，能够通过抑制细菌的DNA复制来快速杀灭细菌以及一些厌氧菌、支原体、衣原体等[1]。喹诺酮类抗生素具有抗菌效果好、安全性高和价格低廉等优点，因此被广泛运用到牲畜的饲养中。

由于喹诺酮类抗生素的滥用，药物残留的问题也愈发严重。喹诺酮药物不能轻易被人体和动物体代谢和吸收，对人体健康产生不良影响。2005年以来，美国食品和药物管理局（FDA）已禁止使用恩诺沙星医治家禽细菌感染，因为科学证据表明，用抗菌剂治疗的鸡和火鸡中出现了弯曲杆菌抗性物种[2]，对生态平衡造成了一定的破坏。

据调查，市场上食品中喹诺酮类残留现象仍然严重。李彦文等[3]发现，广州市面上约96%的蔬菜含有不同水平的氟喹诺酮残留，浓度为1.0～1680.1 μg/kg。因此，开展食品中喹诺酮类抗生素准确、快速、灵敏的多残留检测方法的研究势在必行。

1 高效液相色谱法

高效液相色谱（HPLC）是一种灵敏度高、应用范围广的仪器分析方法，常用于食品中的喹诺酮类药物的多残留检测，近几年也是研究多残留组分同时分析的热点方法[4-5]。刘畅[6]以甲醇和0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相，利用正离子电喷雾质谱检测器，建立了蔬菜中14种喹诺酮药物的多残留检测方法，定量限为 0.14～ 0.52 μg/kg。ZhangZ等[7]选用 0.1% 甲酸水溶液和0.1%甲醇乙腈溶液作为流动相，用色谱检测器对动物组织中四环素、磺胺和喹诺酮3种不同类型抗生素中38种化合物进行有效鉴定和量化，检出限可达0.2～4 μg/kg。

2 免疫分析法

2.1 酶联免疫分析法

酶联免疫法是一种基于抗原抗体和酶催化反应而建立的液体中微量物质的定量检测方法，具有灵敏度高、操作简单、快速、样品前处理简单等优点，成为食品残留检测中的热门方法[8-9]。樊晓博等[10]用恩诺沙星制备恩诺沙星抗体，实现了多种畜禽产品中12种氟喹诺酮药物的多残留统率检测，方法的IC50为 2.04 μg/L，线性范围 0.3 ～ 1.5 μg/L。ChenJ等[11]建立了间接竞争性酶联免疫分析法，同时检测食用动物可食用组织中24种喹诺酮类药物，检测限范围为0.45～15.16 ng/mL，低于最大残留水平。

2.2 胶体金免疫层析法

胶体金免疫层析法兼具了酶联免疫法高灵敏度和稳定性的特点，还具备操作步骤简单、耗时短的优点，因此在现场大批量的稳定快速检测中具有广泛的应用[12-13]。宗婧婧等[14]利用喹诺酮类单克隆抗体制备金标抗体，对水产品中15种喹诺酮类药物的检出限在 0.3 ～ 5 μg/kg。

2.3 发光免疫分析法

发光免疫分析法可分为生物发光法和化学发光法。生物发光法仅需依靠生物自身的酶促化学反应，不需要额外引用外光源，因此在检测实验中的成本低，在检测领域具有一定的作用[15]。于雪芝[16]构建了SAs-scFv-Fluc融合蛋白及制备了诺氟沙星抗体，IC50 值为 0.051 μg/L，检出限为 0.232 μg/L，可以实现对食品中19种氟喹诺酮类药物的多残留检测。化学发光法是利用化学反应过程中产生的光辐射效应的一种检测手段，在喹诺酮类药物的残留检测中具有较广泛的应用[17-18]。Tao X等[19]建立检测鱼和虾基质中的20种喹诺酮类抗生素的化学发光免疫分析方法，其中在鱼和虾中的曲氟沙星、诺氟沙星的检出限为0.2μg/kg，盐酸环丙沙星和恩诺沙星的检出限均低于0.2μg/kg。

2.4 荧光偏振免疫分析法

荧光偏振是指荧光分子在偏振光激发后发射出不对称光的一种现象，具有简单、可靠、快速和高效的特点，目前已被广泛应用于各种分析、监测等领域中。MiT等[20]合成了5种喹诺酮类抗生素的荧光标记物以及制备5种喹诺酮类抗生素的抗体，在牛奶、鸡肉中多种喹诺酮类抗生素的多残留检测中的检出限在0.46～3.52 ng/mL，能满足多残留检测的要求。

2.5 可视化蛋白芯片法

蛋白芯片法是一种高通量、快速的免疫检测方法，具有样品用量少、可同时进行多指标分析、检测成本低等优点，在食品中兽药多残留的快速检测中有很好的发展前景。钟文英等[21]利用间接竞争法原理，建立了可视化蛋白芯片分析技术，可实现牛乳中磺胺类和喹诺酮类抗生素多残留的同时检测，结果说明磺胺嘧啶和恩诺沙星线性范围分别为0.3～7.2 ng/mL和 0.4 ～ 18 ng/mL。

3 微生物抑制法

微生物抑制法是一种最早的抗生素残留检测方法，具有操作简便、仪器投入少、检测成本低、重复性好等优点。沈翠香[22]研究选择了对3种喹诺酮类抗生素具有特异敏感性的微生物E.coli ATCC8739进行培养，利用红四氮唑显色原理检测恩诺沙星的残留，结果显示，其对环丙沙星的检测下限由0.04 μg/mL降到 0.015 μg/mL，恩诺沙星由 0.05 μg/mL降低到0.015 μg/mL。但由于微生物抑制法容易出现假阳性现象，无法准确定性定量，因此只适于对大批量样品进行粗筛。

4 总结与展望

色谱法具有灵敏度高、重复性强、准确性强等优点，但对检测样品的处理要求较高，对仪器依赖强，不适于大批样品的快速筛查；免疫法具有操作简单、特异性强、快速灵敏等特点，且样品前处理方法简单，但对试剂的选择性较高，多组分同时检测的工作较难进行，当存在与被分析目标物结构类似的化合物时，会产生交叉反应；微生物法具有成本低廉、操作简单等特点，但灵敏度低，定性定量准确度差，检测时间长，检测效率低等，所以在检测时较少使用。

目前，对多种喹诺酮类抗生素在食品中的残留的检测研究越来越多，例如简化样品处理步骤、减少有害有机溶剂的使用、提高灵敏度和准确性、降低检测成本等，都是研究的热点，减少实验操作的时间、重复性好、满足检测现场大规模的初筛，是检测的发展需求。