杨敬迪
(安丘市畜牧局,山东安丘 262100)
2016年,美国堪萨斯州立大学科研职员操纵宏基因组测序技术,从患有皮炎肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍的母猪及其流产胎儿体内初次判定出 PCV3。由于是新发现的病原体,PCV3对各种猪的致病性,对于猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的作用,及其现有商品化 PCV2的各种疫苗对它免疫效力等,等待下一步探究。
pcv3在分类上属圆环病毒。2016之前,猪圆环病毒(PCV)全世界认可的只有PCV1和PCV2基因型。PCV2是多系统衰竭综合征(PMWS)主要引起断奶仔猪,这是PDNS密切相关,猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、繁殖障碍、增生性坏死性肺炎(PNP)、肠炎,都是此类疾病。通过对 PCV3全基因组及部分基因组序列进化分析,发现我国 PCV3包括3a和3b两个亚群,在这种情况下,3a和美国pcv3参考应变中的一个分支,有着非常密切的同源演化。
猪圆环病毒是最小的动物病毒之一。猪圆环病毒3型是一种环状DNA病毒,病毒颗粒无外膜,直径17~20 nm。猪环对环境有较强的屏障作用,可在酸性条件下(pH=3)长时间存活。无血凝,耐热性好。PCV对有机溶剂如氯仿、碘或酒精敏感,但对苯酚,氢氧化钠和氧化剂更敏感。由于pcv3 pcv2病毒属于同一个家族,物理化学性质相似,同样的方法可以用消毒剂来消毒处理环境和运输工具。
pcv3基因组总长度为2000 bp,包括5个主要的开放阅读框(ORF),分别编码Rep蛋白,一种蛋白,和一个特定的ORF3蛋白对PCV同源。Cap protein是PCV的主要结构蛋白,可诱导实验动物产生特异性免疫应答。PCV2和pcv3 Cap蛋白的同源性仅为30,而他们之间的交错免疫保护的可能性较低。在湛洋的2个研究表明,在结构和抗原性pcv3 PCV2和盖之间有显著性差异。因此,没有交叉免疫保护和pcv3 PCV2之间。
目前,猪肾细胞(PK-15,SK)和猪睾丸细胞(ST)是常用的PCV2的分离和培养基。据推测,pcv3可以在细胞增殖。
雌雄不同、年龄不一和各种不同的育种猪可以感染pcv3,但怀孕母猪和初产猪更易感染。pcv3可引起母猪没有吃症状,皮肤泛起多灶性丘疹、雀斑和浅表性皮炎,输送能力下降,妊娠母猪繁殖障碍,如流产、出生缺胳膊少腿、出生死亡、木乃伊、弱仔。即使那些病情严重的人也会死于急性死亡。。患病仔猪多出现器官系统的功能性混乱。PCV3能够感染不同大猪的脑(包括死胎大脑),肺(同上)、淋巴结、扁桃体、精液和血清检测。一系列结果表明 PCV3存在于猪的不同组织中,且存在垂直传播风险。
病毒分离和诊断是诊断流行性疾病最准确的方法。由于成年感染动物缺乏临床症状,病毒难以掌握,影响了病毒的分离,因此病毒通常是从流产胎儿或死胎的组织样本中分离出来的。
5.2.1 PCR
国内专家专为pcv3cap基因的药引,建立了迅速、敏捷、一对一的PCR检测方法。通过使用这种方法,168名可能得病的从河北猪场进行了检测,得病样品9份进行检测,表明河北有pcv3感染猪。徐朋丽等也建立了一个pcv3 PCR检测方法,对pcv3最低检出量为61.9份/L,利用该法对河南省112份临床样品进行检测,发现 PCV3阳性率为33.9(38/112),表明 PCV3在河南已有流行。贺会利等PCR技术在广西某猪场仔猪腹泻pcv3从样品检测,并pcv3也被检测到。PCR方法提供了用于监控猪场和在中国pcv3防治pcv3盛行的技术支持。
5.2.2 荧光定量 PCR
Palinski等利用实时荧光定量 PCRpcv3从流产母猪生下来的小猪的检测,pcv3抗原和淋巴结在猪的皮肤佳能发现,肾脏和肺,表明pcv3在美国非常普遍,有可能是母猪不生小猪的主要得病原因。荧光定量PCR方法的建立,使pcv3更快速、简便、经济和实用的检测,为PCV3感染的早期判断提供了有力的手段支持。
目前对于 PCV3的研究尚处于刚开始的阶段,需要尽快展开相关检验技术研究,快速、一对一pcv3病原学和血清学检测方法有助于pcv3菌株的分离和测定,为开展疫苗研发以及动物回归试验奠定了基石,从而保护我国生猪产业健康发展。预防和控制pcv3,必须坚持"早发现、早报告、早隔离的原则,早期诊断、早期抑制"。要强化物体安全,提高有关调查人的防范意识,严格执行消毒程序,对杀蚊拍蝇要重视,保护环境,保持卫生,定期灭鼠。