玉米苞叶中芦丁的含量测定

1.广西壮族自治区人民医院，广西 南宁 530021；2.广西中医药大学，广西 南宁 530001；3.广西卫生职业技术学院，广西 南宁 530023

玉米苞叶(corn husks)，是禾本科玉蜀黍属植物玉米(Zea mays L)[1]果穗外部的包被部分。玉米苞叶含有大量的纤维素、一定量的淀粉、总黄酮及单糖多糖等活性成分。2017年我国玉米产量为21 589万吨，其中玉米副产物产量达到百万吨级，大多数的玉米苞叶被丢弃或当燃料使用，造成资源浪费与环境污染，近年来对玉米苞叶的研究表明其具有降低血脂[2-5]、抗动脉粥样硬化[6-7]、抗氧化[8]、抑制α-糖苷酶活性而降糖等药理作用[9]。玉米苞叶可食可药，渴望能开发成为防治心血管疾病的保健品或药品。

目前还没有关于玉米苞叶的质量标准研究，为此，笔者建立HPLC法测定玉米苞叶中芦丁含量的方法，为玉米苞叶质量标准提供依据，为玉米苞叶的进一步开发提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验药材 玉米苞叶采自广西各地，经广西一心药业马利飞副主任药师鉴定均为禾本科玉蜀黍属植物玉米(Zeamays L)的苞叶，来源见表1。

表1 10批不同产地的玉米药材

1.2 实验仪器、试剂 超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司)；电子天平分析天平(瑞士梅特勒AJ150)；恒温水浴锅B-220(上海亚荣生化仪器厂)；高效液相色谱仪(Alliance e2695,美国沃特世)；芦丁(批号：0787-200102，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；甲醇(广东省化学试剂工程技术研究开发中心，分析纯)；超纯水。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件 色谱柱：phenomenon C18 (5μm，250 mm×4.6 mm)；检测波长：280 nm；流动相：乙腈-0.1%冰醋酸(20∶80)；流速：0.8 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10 μL。

1.3.2 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品适量,置50 mL容量瓶中, 用甲醇溶解, 并至刻度, 摇匀, 得0.11 mg/mL的芦丁对照溶液，用0.22 μm微孔滤膜滤过，滤液备用。

1.3.3 供试品溶液的制备 精密称取经干燥粉碎后的玉米苞叶粉末约0.5g(过100目筛)，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL,称定重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足重量，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2 方法学考察

2.1 线性关系考察 分别取上述标准溶液2、5、10、15、20 μL注入高效液相色谱仪, 按上述色谱条件测定其峰面积。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。并计算回归方程：y=17559x+3478.8,r2=0.9996。表明芦丁在0.1947～2.0047 μg·mL-1内呈良好的线性关系。进样量、峰面积见表2，标准曲线见图1，对照品图见图2、样品图见图3。

表2 芦丁线性关系

图1 标准曲线

图2 芦丁对照品

图3 玉米苞叶样品

2.2 精密度实验 精密吸取芦丁对照品溶液10 μL，按上述色谱条件连续进样6次，记录色谱图。结果芦丁峰面积的相对标准偏差RSD为0.11%，结果表明仪器精密度良好，见表3。

表3 芦丁精密度实验结果

2.3 重复性实验 同一玉米6份,每份约0.5 g，精密称定, 按1.3.3项下供试品溶液制备方法制备, 进样量10 μL，RSD为1.01%(n=6)，结果表明样品重复性良好，结果见表4。

2.4 稳定性实验 取同一份供试品溶液, 在相同色谱条件下分别在 0、2、4、6、8、12 h进样10 μL，采用HPLC测定芦丁的峰面积。在12 h内芦丁的RSD为1.41% (n=6)。结果表明供试品溶液在12 h内稳定，结果见表5。

2.5 加样回收实验 取同一批已测含量的供试品6份, 每份约0.5 g,精密称定, 置具塞锥形瓶中, 分别精密加入适量的对照品，再加入甲醇20 mL,按上述供试品溶液的提取方法制备, 进样10 μL依法测定, 计算平均加样回收率为97.7%，RSD为1.46%(n=6), 结果表明该方法可靠, 准确度高，结果见表6。

表4 玉米苞叶的重复性试验

表5 玉米稳定性实验结果

表6 玉米苞叶加样回收实验结果

3 玉米苞叶中芦丁的含量测定

分别称取10个产地玉米苞叶药材粗粉, 按1.3.3项下供试品制备方法制备,精密吸取供试品溶液10 μL进样, 按1.3.1项下色谱条件进行测定，记录色谱图,以外标一点法计算各样品中芦丁的百分含量，结果见表7，结果表明广西10个产地玉米苞叶的芦丁含量相差不大。

表7 芦丁的含量测定

4 小结

4.1 色谱条件的选择 本实验分别考察了ThermoC18(5 μm，250 mm×4.6 mm)色谱柱，Agilent Wonda SilC18-WR(5 μm，250 mm×4.6 mm)色谱柱和phenomenon C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)色谱柱。结果显示phenomenonC18(5 μm，250 mm×4.6 nm)色谱柱分离效果比较好。

本实验分别考察了甲醇-水系统，甲醇-0.1%冰乙酸系统，乙腈-水系统，乙腈-0.1%冰醋酸系统，结果显示乙腈-0.1%冰醋酸系统作为流动相条件下峰形整体比较好，经过几种比例的考察，选用(20∶80)的比例最佳，所以选用乙腈-0.1%冰醋酸(20∶80)为流动相。

本实验使用了二极管阵列检测器(DAD检测器)，对样品进行190～400 nm全波长扫描，综合考虑对照品的出峰情况及分离度，最终确定280 nm为本实验的检测波长。

本实验分别考察了20 ℃、25 ℃和30 ℃ 3个不同柱温的色谱图，结果显示25 ℃峰形整体比较好，所以选择25 ℃为检测温度。

本实验分别考察0.5 mL/min流速、0.8 mL/min和1.0 mL/min的色谱图，结果显示0.8 mL/min流速色谱图分离效果最佳，所以选择流速为0.8 mL/min。

4.2 结果 试验建立HPLC测定玉米苞叶中芦丁含量的方法，以甲醇为提取溶剂，超声辅助提取玉米苞叶，提取液过0.22 μm微孔滤膜，利用HPLC测定。以色谱柱：phenomenonC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流速：0.8 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10 μL；流动相：乙腈-0.1%冰醋酸(20∶80)的条件分离较好。芦丁进样量在0.19470～2.0047 μg·mL-1(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率为97.7%，RSD为0.93%(n=6)。该方法简便、快捷，重现性好，为玉米苞叶的质量评价提供依据。