浅谈《样品中细菌总数测定》的稀释计算

罗丽

（连云港师范高等专科学校 海洋港口学院，江苏连云港 222000）

许多研究和检测都需要确定所采集样品中细菌的数量，最常使用的就是细菌平板计数法。而当中最重要的操作环节就是需要对样品进行逐级稀释，直到稀释的程度可以在平板上长出25～250个单菌落。不在此范围之中，太少则不能满足统计分析要求，超过则使得菌落密集不利于单个菌落的区分和计数。混菌涂布平板采用的稀释范围多数在10-3～10-8范围，每个稀释度做两个重复以保障更高的精度。下面将使用3个例子介绍不同的稀释操作[1-3]情况下该如何进行正确的计算。

1 实验

1.1 常规10倍梯度稀释法的计算

根据图1展示的稀释操作，计算最初样品中的细菌量。

说明：1 mL表示1mL上一管样品溶液，9 mL表示9mL生理盐水

图1 常规10倍梯度稀释图例

带少量溶质（样品）的溶液常会用一定体积或重量的溶质与稀释液终浓度的比率来表示。如图1中取1体积（mL）样品添加到9体积（mL）溶剂中，得到1/10稀释比率溶液，经过4次稀释，最后1管的中样品的最终稀释率为：

平板中涂布的是1mL的1/10000稀释液，生长的单菌落数是138个，则最初的样品中的细菌数为1.38×106个。计算方法如下：

细菌数/mL=最终平板菌落数/稀释率=138/10-4=1.38×106

1.2 100倍梯度稀释法的计算

根据图2展示的稀释操作，计算最初样品中的细菌量。

图2 100倍梯度稀释图例

如图2中取0.1体积（mL）样品添加到9.9体积（mL）溶剂中，得到1/100稀释比率溶液，经过3次稀释，最后1管的中样品的最终稀释率为：

平板中涂布的是0.1 mL的1/10-6稀释液，生长的单菌落数是58个，则最初的样品中的细菌数为5.8×108个。计算方法如下：

细菌数/mL=（最终平板菌落数/稀释率）÷涂布体积=（58/10-6）÷0.1 mL=5.88

1.3 无规律梯度稀释法的计算

根据图3展示的稀释操作，计算最初样品中的细菌量。

如图3中取1体积（mL）样品添加到9体积（mL）溶剂中，得到1/10稀释比率溶液，第二次取3体积加入到27体积溶剂中，仍然得到1/10稀释比率溶液。第三次1体积加入9体积溶剂中，得到的还是1/10稀释比率。第四次取0.5体积加入4.5体积溶剂中；第五次2体积加入到8体积溶剂中，第六次1体积加入到9体积溶剂中，均得到的溶液稀释比率为1/10。所以虽然操作中采用各种体积取样稀释，其实得到的都是相同的稀释比率。经过6次稀释，最后1管的中样品的最终稀释率为：

图3 无规律梯度稀释图例

平板中涂布的是0.01 mL的1/10-6稀释液，生长的单菌落数是96个，则最初的样品中的细菌数为9.6×109个。计算方法如下：

细菌数/mL=（最终平板菌落数/稀释率）÷涂布体积=（96/10-6）÷0.01mL=9.6×109

2 结论

稀释问题是微生物课程中必不可少的部分[4]，也是学生易计算错误的地方。通过在课堂中展开不同稀释操作实例计算，可以帮助学生理解样品的多步稀释计算问题。教师在开展教学过程中应根据教学内容、教学对象安排稀释问题的讲解并保障学生充足的课堂计算练习，从而切实地帮助学生掌握处理样品的稀释问题并能正确计算。