胸腔积液脱落细胞的不同制片方法及其病理学研究

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(广东省第二人民医院，广东 广州 510317)

脱落细胞学技术属于一种病理学先进技术，主要通过将患者病变部位的细胞采集下来制片染色，然后病理医师对玻片进行观察，从而对患者病情进行诊断[1]。现阶段，TCT、传统涂片法是临床通常采用的脱落细胞学制片方法[2]。本研究回顾性分析了2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔积液标本40份的相关资料，对胸腔积液脱落细胞的不同制片方法及其病理学进行了研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：随机选取2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔积液标本40份，其中男性标本20份，女性标本20份，年龄17～92岁，平均(54.3±9.6)岁。

1.2方法

1.2.1标本采集与处理：将200～500 ml胸腔积液标本采集下来送检，至少送检3次，从而在极大程度上提升肿瘤细胞检出率。通常情况下，离体后30 min内是最佳送检时机，最好在处理与固定标本15 min内送检，这时脱落细胞具有最小的退变程度。如果无法及时送检、制片、固定或低温保存，则可以将适量50%乙醇或40%甲醛加入固定，从而对胸腔积液变质退变的现象进行有效预防。

1.2.2不同制片方法

1.2.2.1新柏氏液基细胞学技术(TCT)：在2个容积为14 ml的离心管中置入同一患者的同一瓶胸腔积液，对其进行离心，速率为2 500～3 000 r/min，15 min左右后将上清液弃去，将沉淀物留置下来，将超薄液基波层处理液加入，2 h左右后再次离心，将上清液取出来，将上清液倒出过程中使残留水分不对检测造成不良影响得到切实有效的保证，然后将一个离心管底部的沉淀物吸取出来，在TCT专用玻片夹中放入，再向TCT专用制片机中放入，将细胞薄片制作出来，直径为2 cm，制片后用95%乙醇固定15 min，最后进行苏木素-伊红(HE)染色，梯度乙醇脱水二甲苯透明后用中性树胶封片，保证湿封。

1.2.2.2传统涂片法：吸取另一个离心管中的沉淀物，在载玻片上均匀涂抹，稍干燥后95%乙醇固定15 min，然后进行苏木素-伊红(HE)染色，梯度乙醇脱水二甲苯透明后用中性树胶封片，保证湿封。完成胸腔积液脱落细胞制片后在显微镜下放置观察判断。复检阳性载玻片，对误诊、漏诊的发生进行有效预防。

1.3判断标准：癌症检出标准为观察结果阳性[3]。

1.4统计学方法：采用SPSS21.0软件进行分析处理，计数资料用率(%)表示，用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1不同制片方法标本细胞形态与质量比较：TCT具有较多的细胞量、干净的背景、适当的细胞厚薄、均匀的分布、清晰的细胞形态与结构，偶见细胞退变。传统涂片法具有较多的细胞量，缺乏干净的背景，血细胞、炎细胞覆盖细胞或细胞相互重叠，很难识别，具有模糊的细胞形态与结构，常见细胞退变。

2.2不同制片方法检查结果比较：TCT检查阳性率15.0%(6/40)显著高于传统涂片法7.5%(3/40)(P<0.05)，但两者检查可疑率、阴性率2.5%(1/40)、82.5%(33/40)VS 5.0%(2/40)、87.5%(35/40)之间差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1不同制片方法检查结果比较[例(%)]

制片方法例数阳性可疑阴性TCT406(15.0)1(2.5)33(82.5)传统涂片法403(7.5)2(5.0)35(87.5)χ2值11.141.320.86P值<0.05>0.05>0.05

3 讨论

液基薄层细胞制片检查系统处理技术诞生于1991年美国等国家，率先应用于妇科细胞学检查，国内从2001年开始作液基细胞学筛查宫颈癌的研究，使该项技术得到迅速发展，被称之为一场细胞学制片技术的革命，从根本上解决了常规脱落细胞制片假阴性率高(15%～20%)、丢失细胞率高(80%)和涂片质量差等技术难题，使宫颈癌的阳性检出率达95%以上，为脱落细胞学诊断作出了重大贡献。但是过去该技术需要国外的制片机、细胞保存液等，他的价格昂贵，在国内也只能是一些大医院才能开展该项目，在基层医院的推广则比较缓慢。为此，我们联合国内的有关厂家合作研发了半自动的离心法制片机，并自主研发了细胞保存液，大大地降低了液基薄层细胞的制片成本，从而使该项技术易于被广大基层医院所接受且进行推广使用。目前，他已成为筛查宫颈癌最好的推荐方法之一，为宫颈癌的早期诊断和治疗提供了非常明确的诊断依据，是一项非常值得推广应用的临床操作技术。对胸腔积液进行离心后，其肿瘤细胞会集中分布，绝大部分细胞呈圆形或类圆形，同时呈片状分布，通常情况下还会呈细胞团，形式为特定组织形态[4]。相关医学研究表明[5]，胸腔积液脱落细胞学薄层液基制片术能够集中载破片上的细胞，将优质细胞HE片制作出来，促进肿瘤检查阳性率的提升，将手工涂片的各种弊端解决掉，比如，严重丢失细胞、缺乏良好的制片质量、通常情况下血细胞、炎性反应细胞覆盖细胞或细胞相互重叠造成病理医师很难识别、在没有及时固定的情况下涂片细胞会干燥退变而对诊断造成不良影响等。液基细胞学制片具有多方面的优越性，具体体现在：对采集与处理标本方法进行了变革，将细胞涂膜面积缩小，破坏大部分红细胞或将其消除，溶解黏液丝，在极大程度上减少炎性反应细胞，清晰观察异常细胞，促进漏诊率的降低，且具有清晰的细胞图像、分明的层次，能够清晰观察核膜、核仁、染色质等细微结构，从而促进细胞病理学诊断价值的有效提升。当然，临床医师的阅片经验也对其造成了直接而深刻的影响[6]。

胸腔指的是由膈肌和胸廓围成的总腔,胸膜腔是由脏壁两层胸膜在左右两肺周围围成的一个完全封闭的潜在性腔隙,腔内含少量浆液,起到润滑作用。我们常说胸腔积液,实际上是胸膜腔积液。胸腔积液,可由多种疾病引起,治疗上主要针对原发病,漏出液常在病因纠正后自行吸收,渗出性胸膜炎中以结核性多见,其次为炎性反应性和癌性胸膜炎,应针对其病因,进行抗结核,抗炎等治疗,并可行胸腔穿刺抽液，其预后与原发病有关,肿瘤所致者预后较差。胸腔积液具有较为复杂的情况，如果单个肿瘤细胞长时间悬浮于液态环境中，那么其原有形态就可能发生改变，这样必然会将困扰带给临床诊断工作。因此，在诊断过程中应该给予成团细胞以充分关注，如，通常情况下，癌腺细胞会呈腺泡状，之后再结合特染等。胸腔积液是一种临床症状，在临床极为常见，在一些情况下甚至是唯一的临床表现，尤其是肺腺癌会较早有胸腔积液出现，发生这一现象的原因为其有胸膜转移发生，造成临床在胸腔积液的影响下很难对原发癌进行影像学诊断，在这种情况下，可以将胸腔积液抽取出来，对其进行细胞学检查，从而为诊断和鉴别诊断肺癌提供有效依据。而肿瘤细胞在脱落向胸腔的过程中，通常情况下，那些成团的细胞能够将肿瘤组织形态保留下来。因此，在癌症检查手段中，胸腔积液脱落细胞学检查已经占有极为重要的地位[7]。相关医学研究表明[8]，采用TCT技术将优质的胸腔积液脱落细胞HE片制备出来能够促进胸腔积液脱落细胞病理学检查阳性率的提升，进而促进肿瘤诊断中脱落细胞学应用价值的提升，将更为准确的诊断结果获取过来，因此受到了临床的广泛关注和普遍认可。

液基薄层细胞学检测技术(Thin-Cytologic Test TCT)，是近年新发展起来的一种细胞学诊断新技术，改变了以往巴氏涂片检测方法的不足，标本取出后立即洗入细胞保存液中，经程序化处理，制成均匀的薄层涂片，使薄片中的不正常细胞容易观察，并且固定的细胞核结构清楚，易于鉴别。需要做液基薄层细胞检测者有：宫颈炎、宫颈糜烂应作为常规检查；从未接受子宫刮片检查；过早开始有性行为；自身或丈夫超过一个性伴侣；曾患和性行为有关疾病如滴虫、梅毒等;HPV病毒感染；长期慢性宫颈炎。本研究为了研究胸腔积液脱落细胞的不同制片方法及其病理学，随机选取2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔积液标本40份，均分别运用TCT、传统涂片法制片，然后比较不同制片方法标本细胞形态与质量，并统计分析不同制片方法检查结果，结果表明，TCT具有较多的细胞量、干净的背景、适当的细胞厚薄、均匀的分布、清晰的细胞形态与结构，偶见细胞退变；传统涂片法具有较多的细胞量，缺乏干净的背景，血细胞、炎细胞覆盖细胞或细胞相互重叠，很难识别，具有模糊的细胞形态与结构，常见细胞退变。TCT检查阳性率15.0%(6/40)显著高于传统涂片法7.5%(3/40)(P<0.05)，但两者检查可疑率、阴性率2.5%(1/40)、82.5%(33/40)VS 5.0%(2/40)、87.5%(35/40)之间的差异均不显著(P>0.05)，和上述相关医学研究结果一致。

总之，胸腔积液脱落细胞的TCT技术能够集中载破片上的细胞，将优质的细胞HE片制作出来，促进肿瘤细胞病理学检查阳性率的提升，从而促进肿瘤诊断中脱落细胞学应用价值的提升，值得推广。