电针补肾益精法对围绝经期血管性痴呆大鼠脑组织SOD、MDA含量的影响

宋 扬 徐天舒

（1.南京中医药大学中西医结合鼓楼临床学院，江苏南京210023；2.南京鼓楼医院，江苏南京210008）

血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）主要是由于出血或缺血性卒中导致人体行为和认知等脑区低灌注从而出现的认知功能障碍。已有研究发现，绝经是女性血脂异常的独立危险因素，绝经后总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均较绝经前明显升高[1]，且随着绝经年限的延长，升高越显著，由此引发的脑血管疾病、VD成为围绝经期及绝经后中老年女性需关注的问题。随着医疗条件和技术的进步，脑血管病的死亡率在逐年下降，但因脑血管病造成的各类痴呆发生率却在升高，因此对围绝经期VD的研究具有现实和迫切的社会意义。大量研究表明，电针治疗VD有较确切的疗效[2-4]。我们前期研究发现，电针补肾益精法对围绝经期大鼠有脑保护的作用[5]。为此，本研究采用电针治疗围绝经期VD模型大鼠，观察其空间学习记忆能力，并检测脑组织SOD、MDA水平，旨在研究电针对围绝经期VD的治疗作用。

1 实验材料

1.1 实验动物 11～15月龄清洁级SD雌性大鼠，体重370g左右，上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK（沪）2012-0017，饲养和实验在南京大学医学院附属鼓楼医院动物实验中心屏障环境[SYXK（苏）2014-0052]。

1.2 主要仪器与试剂 低温高速离心机，分光光 度 计，Labsystems Finnpipette 100μL单 道 移 液器，Thermo 50μL 8道移液器，HH-4数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），MCAO栓线（北京沙东生物技术有限公司，型号为2432-50 AAAA），华佗牌SDZ-V型电子针疗仪（苏州医疗用品厂），0.25mm×13mm华佗牌一次性针灸针。

2 实验方法

2.1 造模与分组 造模大鼠适应性饲养3d后连续5d行阴道分泌物采样涂片，经HE染色后光镜下观察脱落细胞。镜下连续5d呈现无规律动情周期变化则可确定为围绝经期大鼠。用3.5%水合氯醛按1mL/100g体重将围绝经期大鼠腹腔麻醉后，仰卧固定；颈正中切口，分离双颈总动脉；用“0”号线结扎双颈总动脉血流10min，再灌注10min，共间歇阻断双侧颈总动脉血流3次，每次间隔10min；术后缝合切口，笼内饲养。假手术组大鼠仅分离双颈总动脉不结扎。术后7d，对造模大鼠进行Morris水迷宫试验以筛选入组大鼠。分别记录每只大鼠的逃避潜伏期，计算假手术组逃避潜伏期的平均值（X），标准差（Y），以“X+2Y”为标准值[2]，如逃避潜伏期大于“X+2Y”则认为VD模型造模成功。将造模成功的大鼠随机分为模型组和电针组，每组10只，假手术组取10只。

2.2 干预方法 电针组：固定大鼠，选取“关元”及双侧“三阴交”（大鼠穴位定位参考《实验针灸学》），针刺得气后，连接电子针疗仪，以肢体微微抖动为度，连续波，频率为2Hz，每次20min，每日1次，共治疗20次。模型组、假手术组：每日同时间点固定20min。

2.3 行为学检测 治疗结束后各组大鼠行Morris水迷宫试验检测其定位航行能力。每日将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中若干次，记录其寻找到隐藏在水面下平台的时间，即逃避潜伏期（escape latency）。记录每只大鼠连续5d的逃避潜伏期平均值，计算每日每组大鼠潜伏期的平均值，评价各组动物空间学习记忆的获得能力。

2.4 脑组织SOD、MDA含量测定 行为学检测结束后，各组鼠断头处死，2min内取出大鼠脑组织，迅速置于冰盘上分离脑组织，弃取嗅球和小脑，与4℃预冷的生理盐水一起倒入匀浆管中进行匀浆，充分研碎，使组织匀浆化，制成10%的脑组织匀浆，3000r/min离心10min，留上清液，4℃保存待测。按照SOD、MDA试剂盒说明书，用光电比色法测定大鼠脑组织中SOD活性、MDA含量。

2.5 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件，计量资料用（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验，方差齐时采用t检验，方差不齐时采用t′检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 各组大鼠Morris水迷宫定位航行逃避潜伏期比较 结果见表1。随着训练时间的延长，各组大鼠在Morris水迷宫试验中的上台前游泳时间都呈现下降的趋势。与同期假手术组比较，模型组大鼠各时期的逃避潜伏期均明显延长（P＜0.05），说明VD模型建立成功，模型大鼠存在明显的学习记忆障碍。与模型组比较，电针组大鼠的逃避潜伏期明显缩短（P＜0.05），说明经过一段时间的治疗后，“补肾益精”电针疗法可明显改善围绝经期VD大鼠的学习记忆能力。

3.2 各组大鼠脑组织SOD、MDA水平比较 结果见表2，说明“补肾益精”电针法可有效改善围绝经期VD模型大鼠脑组织SOD、MDA水平。

4 讨论

VD发病多见于中老年人群，中国65岁以上人群中VD患病率为1.1%，约占痴呆总患病率的30%[6]。围绝经期和绝经后妇女血脂异常率高[7]，并随着绝经时间的延长，升高更显著，由此损伤心脑血管造成缺血缺氧脑损害机率不断升高。

表1 各组大鼠连续5d逃避潜伏期比较（±s） s

表1 各组大鼠连续5d逃避潜伏期比较（±s） s

注：△与假手术组比较，P＜0.05；#与模型组比较，P＜0.05。

假手术组 10 82.4±1.43 64.7±2.23 52.6±1.78 39.0±1.15 23.5±1.43模型组 10 96.9±1.52△ 89.3±1.49△ 77.4±1.35△ 69.2±1.14△ 61.9±0.99△电针组 10 88.1±1.97#75.7±1.52#66.1±1.73#52.3±1.42#41.5±2.46#

表2 各组大鼠脑组织SOD、MDA水平比较（±s）

表2 各组大鼠脑组织SOD、MDA水平比较（±s）

注：△与假手术组比较，P＜0.05；#与模型组比较，P＜0.05。

假手术组 10 178.00±24.02 1.04±0.18模型组 10 111.40±2.07△ 3.30±0.12△电针组 10 174.60±2.76# 1.30±0.09#

中医学认为，VD是由于各种原因导致肾精亏虚，痰瘀阻痹，使脑髓空虚，脑髓失养，其基本病机为髓减脑消，神机失用，属于“痴呆”“善忘”等范畴。围绝经期VD又有其独特的病因病机。妇女进入围绝经期，肾气渐衰，天癸将竭，冲任二脉虚损，肾精不足，脏腑功能紊乱，髓海空虚，神机失守。故肾精亏虚为发病之本，治疗以补肾益精为基本原则。三阴交是足太阴脾经、足少阴肾经和足厥阴肝经三条阴经交汇处。电针三阴交可以升高雌激素，抑制促性腺激素释放激素（GnRH）分泌，调节下丘脑—腺垂体—卵巢轴，提高痴呆小鼠记忆能力[8]；关元穴位于有“阴脉之海”之称的任脉，可养肝脾之气血，能够补肾益精，调理冲任。两穴合用，可以补肾益精，充盈髓海，达到补肾益脑之效。

西医学认为，因各种原因导致的脑缺血所引起的脑损害是VD发病的主要原因之一，而自由基是脑缺血、缺氧后神经细胞损伤的重要发病因素。自由基生成系统对学习记忆有明显的损害作用，主要源于自由基对细胞及细胞膜上不饱和脂肪酸的破坏、过氧化及MDA产生。MDA是脂质发生过氧化反应后的分解产物，其通过交链蛋白质、糖类、核酸及脂类，使DNA发生突变，从而影响信息传递、转录和复制过程，致使蛋白质合成功能紊乱，合成能力下降，从而表现出记忆力和智力下降。MDA含量间接反映了自由基损害程度，含量越高，损害程度越高。SOD是机体直接清除自由基的重要抗氧化酶类，是机体新陈代谢中重要的金属酶，其可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。前期研究表明，电针补肾益精法对围绝经期大鼠脑组织有一定保护作用[5]，能够清除自由基，改善脑缺血、缺氧症状[9]。

本研究结果发现，与假手术组比较，模型组大鼠的Morris水迷宫定位航行逃避潜伏期时间明显延长，说明VD模型建立成功，其存在明显的学习记忆障碍。与模型组比较，电针组大鼠的逃避潜伏期明显缩短，说明经过一段时间“补肾益精”电针的治疗，围绝经期VD大鼠的学习记忆能力得到明显改善。脑组织检测结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠脑组织SOD水平下降，MDA水平明显上升，说明脑组织SOD、MDA水平与VD存在一定联系。与模型组比较，电针组大鼠脑组织SOD水平明显上升，MDA水平明显下降，说明“补肾益精”电针法可有效改善围绝经期VD模型大鼠脑组织SOD、MDA水平。

综上，电针补肾益精法能提高围绝经期VD大鼠自身的抗氧化能力，减轻VD引起的组织过氧化损伤，减少MDA含量，从而保护VD后继发的神经元损伤。本研究初步探讨电针补肾益精法对围绝经期血管性痴呆大鼠脑保护机制，其他可能的作用机制还有待进一步研究。