三七纳豆红曲复配对高脂血症模型大鼠血脂的影响

◎ 杨晓惠，廖秋红

（汤臣倍健股份有限公司，广东 珠海 519040）

三七是我国传统中药材，具有抗炎、止血、改善脑血循环、抗肿瘤等药理活性[1]。三七的主要活性成分是皂苷，目前可获取的皂苷成分有70多种。其中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1在改善血液循环、抗心律失常、抗衰老、抗肿瘤等方面均显示出一定的药理作用[2]。纳豆是以大豆为原料，经纳豆芽孢杆菌发酵而成的一种传统大豆发酵食品。纳豆中含有纳豆激酶、异黄酮、超氧化物歧化酶等多种活性成分，其中纳豆激酶能够有效清除人体血液内的血栓[3-4]。研究表明，纳豆具有调节血脂、调节血压、溶血栓等多种生理功能，可用于预防和治疗心脑血管疾病[5]。红曲是以大米为原料经红曲霉发酵而成的一种紫红色米曲，是传统药、食两用中药材。红曲是首先发现并研究的具有降脂作用的中药，其有效降脂成分主要为莫奈可林（Monacolin K），为他汀同系物[6-7]。Monacolin K是HMG-CoA还原酶的竞争性抑制剂，通过降低其活性，从而抑制TC的合成[8]。同时，红曲还含有多种不饱和脂肪酸、氨基酸、异黄酮等，具有降血压、降血糖等其他重要功能[9]。

心脑血管疾病是当今世界上威胁人类健康的疾病之一，而心脑血管药物一般具有较大的副作用。所以，充分利用我国丰富的传统食物和中药资源，开发安全且有效的降血脂、预防心血管疾病的保健食品具有一定的现实意义。三七、纳豆与红曲均有降血脂、改善心血管健康的功效，但对三者研究的重点不同，三七的研究重点在改善血液循环，纳豆的研究重点在于纳豆激酶溶血栓，红曲的研究重点在于降低胆固醇和甘油三酯。将三者合用研制降血脂的保健食品尚未见报道，为研究三者合用协同降血脂作用，本文对三七纳豆红曲复配物进行降血脂动物实验研究，为评价其辅助血脂功能提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象

受试样品：以三七提取物、红曲粉、纳豆粉为原料制成的三七纳豆红曲复配物，生产批号为201601，人体口服推荐日摄入量为每人1.16 g。其中，三七提取物折合为生药材1.0 g/d，纳豆按纳豆激酶计1250 FU/d，红曲按洛伐他汀计4 mg/d。

1.1.2 实验动物

SPF级SD雄性大鼠45只，180～220 g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2013-0002，实验动物质量合格证明号：No.44007200031497。

繁殖饲料：购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，配制标准及营养要求符合GB 14924.2-2001、GB 14924.3-2010标准。

1.1.3 阴性及阳性对照品

阴性对照品与受试物溶媒均为0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液，自行制备。

阳性对照品：舒降之（商品名：辛伐他汀片，生产厂家：Merck Sharp & Dohme (Australia) Pty. Ltd，生产批号：L045609）。推荐的起始剂量为每天5～40 mg，对于因存在冠心病、糖尿病、周围血管疾病、中风或其他脑血管疾病史而属于CHD事件高危人群患者，推荐的起始剂量为每天10 mg或20 mg。对于只需中度降低LDL-C的患者，起始剂量为10 mg。

1.1.4 主要仪器和试剂

主要仪器：日立7100全自动生化分析仪，赛多利斯 GP2 100、BP2 100、BP3 100S、BL3 100、TE601-L、TE4 100-L、BS2 24S电子天平。

主要试剂：总胆固醇检测试剂（生产厂家：浙江伊利康公司，批号：160301），甘油三酯检测试剂（生产厂家：浙江伊利康公司，批号：151004），低密度脂蛋白胆固醇检测试剂（生产厂家：购自浙江伊利康公司，批号：161002），高密度脂蛋白胆固醇检测试剂（生产厂家：购自浙江伊利康公司，批号：161201）。

1.2 方法

1.2.1 实验设计

（1）剂量设计。受试样品的人体推荐日摄入量为1.16 g（按照成人60 kg体重均值计算），本试验以人体日推荐量的15、30倍分别作为低、高剂量组，即0.29、0.58 g/kg·BW。辛伐他汀片参照说明书，临床只需中度降低低密度脂蛋白胆固醇的患者起始剂量为10 mg，本试验以其起始剂量的30倍作为给药剂量，即5 mg/kg·BW，空白对照组和模型对照组均给予0.5% CMC-Na溶液。

（2）给药途径、频率、期限。灌胃给药，每天一次，连续给药30 d，给药容积10 mL/kg。空白对照组和模型对照组均给予等量的0.5% CMC-Na，阳性对照组给予辛伐他汀片。

（3）药液配制。①受试样品低剂量组（0.29 g/kg）：药粉若干，加0.5%CMC-Na溶液配制药液（浓度29 mg/mL）。②受试样品高剂量组（0.58 g/kg）：药粉若干，加0.5%CMC-Na溶液配制药液（浓度58 mg/mL)。③阳性对照组（5 mg/kg）：辛伐他汀片若干，加0.5%CMC-Na溶液配制阳性对照组药液（浓度0.5 mg/mL)。

1.2.2 实验方法

选取检疫合格的雄性SD大鼠45只按体重随机分为模型组36只和空白对照组9只，空白对照组给予维持饲料，模型组给予模型饲料建立高脂血症模型。每周称量大鼠体重1次。

模型组给予模型饲料2周后，空白对照组和模型组大鼠不禁食采血（眶静脉丛采血），采血后尽快分离血清，测定TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。模型组和空白对照组比较，TG升高，TC或LDL-C升高，组间差异有统计学意义（P＜0.01），判定模型成立。根据TC水平将模型动物组随机分为模型对照组、受试样品低剂量组、受试样品高剂量组和阳性对照组各9只。

5组给予相应的药物，空白对照组和模型对照组均给予等量的相应溶剂，除空白对照组外，其他各组继续给予高脂饲料，并定期称量体重，给药30 d后于实验结束时不禁食采血，采血后尽快分离血清，测定TC、TG、LDL-C、HDL-C水平，比较给药组与模型对照组血脂水平的差异。

1.2.3 实验数据处理

采用方差分析，先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P＜0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

1.2.4 结果判断

（1）各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组TC或LDL-C降低，且任一剂量组TG降低，差异均有显著性，同时各剂量组血清HDL-C不显著低于模型对照组，可判定该受试样品辅助降低血脂功能动物实验结果阳性。

（2）各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组TC或LDL-C降低，差异均有显著性，同时各剂量组TG不显著高于模型对照组，各剂量组血清HDL-C不显著低于模型对照组，可判定该受试样品辅助降低胆固醇功能动物实验结果阳性。

（3）各剂量组与模型对照组比较，任一剂量组TG降低，差异均有显著性，同时各剂量组TC及LDL-C不显著高于模型对照组，血清HDL-C不显著低于模型对照组，可判定该受试样品辅助降低TG功能动物实验结果阳性。

2 结果与分析

2.1 高脂血症动物模型的建立

给药前，与空白对照组相比，36只造模大鼠TC、TG、HDL-C均极显著升高（P﹤0.05），提示高脂血症模型造模成功，因此，选用于进行药物测试。各组组间比较，各项指标（TC、TG、HDL-C、LDL-C）无统计学差异（P＞0.05），见表1。

表1 给药前每组血脂指标表（X±SD）

2.2 血脂4项统计分析结果

给予受试物30后，与空白对照组相比，模型对照组的TC、LDL-C、TG均有显著升高（P＜0.05），根据模型判断标准，表明继续给予高脂饲料30 d后，高脂血症模型继续维持至30 d。

与模型对照组相比，阳性对照组TC、TG均显著降低（P＜0.05），符合药效评价标准“与模型对照组比较，TC或LDL-C降低，且TG降低，差异均有显著性，同时HDL-C不显著降低”，可判定阳性药物具有辅助降低血脂功能。提示本试验系统稳定，试验结果可靠。

与模型对照组相比，受试样品低剂量组大鼠血脂（TC、TG、LDL-C、HDL-C）无明显差异（P＞0.05）；受试样品高剂量组大鼠血脂（TC、TG）降低，有显著性差异（P＜0.05），同时HDL-C不显著降低，见表2。

表2 给药后每组血脂指标表（X±SD）

3 结论

动物高血脂模型是筛选降血脂药物最常用的模型之一，用含有胆固醇、蔗糖、猪油、胆酸钠的饲料喂养动物可形成脂代谢紊乱动物模型，再给予动物受试样品，可检测受试样品对高脂血症的影响，并可判定受试样品对脂质的吸收、脂蛋白的形成、脂质的降解等的影响。

辛伐他汀为羟甲基戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶抑制剂，抑制内源性胆固醇的合成，为血脂调节剂。研究表明[10]，辛伐他汀有降低高脂血症家兔血清、肝脏、主动脉中总胆固醇(TC)的含量，降低极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平的作用，辛伐他汀可作为辅助降血脂功能评价的阳性对照药。

受试样品是以三七提取物、纳豆粉、红曲粉为原料制成的三七纳豆红曲复配物。本试验采用SD大鼠建立高血脂模型，考察受试样品的辅助降血脂功能，造模成功后，继续给予高脂饲料，模型可维持至30天。根据《保健品辅助降血脂功能评价方法》[11]，判定三七纳豆红曲复配物辅助降血脂功能动物实验结果阳性。表明三七纳豆红曲复配物具有辅助降血脂功能。