枳壳不同产地传统与一体化饮片主要成分含量比较*

★ 王凤娇 钟凌云* 祝婧（江西中医药大学药学院 南昌 330004）

枳壳是中医临床上常用的理气药，其为芸香科植物酸橙及其栽培变种的干燥未成熟果实。枳壳，味苦、辛、酸、性微寒；归脾、胃、大肠经。具有理气宽中，行滞消胀的功效［1］；常用于治疗胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，痰饮内停，胃下垂， 脱肛，子宫脱垂等症状［2］。枳壳的主要有效成分为黄酮类、生物碱、挥发油，其中黄酮类化合物柚皮苷、新橙皮苷可抑制平滑肌收缩，生物碱类化合物辛弗林具有升压、抗休克等药理作用［3-4］。枳壳生品中含有较多的挥发油，其作用峻烈，易伤元气，体虚者不宜服用，且刺激人体胃肠道，会产生恶心、呕吐等副作用；麦麸性平，味甘淡，能和中益脾，且能吸收部分挥发油，因此枳壳经麦麸炒后，挥发油成分减少，燥性缓和，疗效增强，在临床上多以炮制品入药［5］。

目前枳壳的产地加工方法为：7月果皮尚绿时采收，自中部横切为两半，晒干或低温干燥［6］。而枳壳传统炮制饮片加工方法为：取原药材，除去杂质，洗净，润透，去瓤，切薄片，干燥，筛去碎落的瓤核［6］。中药材一体化加工则是从鲜药材直接到炮制饮片的过程。枳壳一体化饮片加工方法为：取鲜药材，除去杂质，对半切开，去瓤，切薄片，干燥。与枳壳传统加工工艺比较，一体化加工工艺减少了中间干燥、水洗、浸润过程，缩短了加工时间，避免了中间储存环节，同时也避免了枳壳成分的损失。因此本研究主要从枳壳传统与一体化饮片主要成分含量的差异进行比较，以期为枳壳饮片的一体化加工提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Ultimate 3000 高效液相色谱仪（Ultimate 3000柱温箱，VWD 检测器，Chromeleon 7.10色谱工作站）；TDL-60B低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；电热鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；十万分之一电子分析天平（梅特勒－托利多仪器上海有限公司）；FW135中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市子华仪器有限责任公司）。

1.2 材料 柚皮苷（批号：BCTG-0808）；橙皮苷（批号：BCTG-0092）；新橙皮苷（批号：BCTG-0713）；辛弗林（批号：BCTG-0709，）；上述对照品纯度均大于98%，均购自中药固体制剂制造技术国家工程研究中心。甲醇、乙腈均为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂为分析纯。枳壳药材由江西中医药大学叶喜德老师从四个不同产地采购并由中药鉴定学葛菲老师鉴定为芸香科植物酸橙的干燥未成熟果实。

2 方法与结果

2.1 枳壳加工炮制方法 传统生品枳壳：取原药材，除去杂质，洗净，润透，去瓤，切薄片，干燥，筛去碎落的瓤核。

一体化生品枳壳：取鲜药材，除去杂质，对半切开，去瓤，切薄片，干燥。

2.2 色谱条件

2.2.1 黄酮苷类测定［7］色谱柱：Inertsil ODS-3（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-水（用磷酸调pH=3）（18∶82），检测波长：283nm，流速：1.0mL/min，柱温：30℃，进样量：10μL，样品及对照品色谱图见图1。

图1 枳壳中黄酮苷类HPLC图

2.2.2 生物碱类测定［8］色谱柱：Inertsil ODS-3（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈-水（0.1%十二烷基硫酸钠和0.1%磷酸）（32∶68），检测波长：224nm，柱温25℃，流速：1.0mL/min，进样量：10μL，样品及对照品色谱图见图2。

图2 枳壳中生物碱类HPLC图

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 黄酮苷类制备［7］取枳壳饮片粉末（40目）约0.2g，置100mL圆底烧瓶中，加甲醇25mL，水浴加热回流1.5h后，趁热滤过，滤液置50mL容量瓶中，残渣再用甲醇提取2次，每次加甲醇10mL提取10min，滤液置同一容量瓶中，冷却，最后加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取该溶液5mL置50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3.2 生物碱类制备［8］取枳壳饮片粉末（40目）约0.5g，精密称定，置50mL离心管中，加体积分数为50%的乙醇25mL，超声处理30min（240W），取出。于3000r/min离心5min，将上清液转移至100mL容量瓶中，重复提取1次，合并提取液。用体积分数50%的乙醇定容至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 对照品溶液的制备 （1）精密称取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷适量，置于10mL的容量瓶中，加甲醇溶解并定容到刻度，摇匀，即得柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的对照品储备溶液。精密吸取1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每mL分别含柚皮苷0.413mg，橙皮苷0.180mg，新橙皮苷0.185mg）。

（2）精密称取辛弗林对照品适量，置于10mL的容量瓶中，加50%的乙醇溶解并定容到刻度，摇匀，作为辛弗林的对照品储备溶液。精密吸取1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每mL含辛弗林0.114mg）。

2.5 线性关系考察 精密吸取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷混合对照品溶液0.5，1，2，4，5mL分别置于5mL容量瓶中，加入甲醇稀释定容至刻度，摇匀，即得不同浓度对照品混合溶液。按照

2.2.1项下色谱条件进样，以对照品含量为横坐标、峰面积为纵坐标作曲线，进行回归分析，求得回归方程。柚皮苷：Y=428.5X+1.0491，r=0.9995；橙皮苷：Y=93.139X+0.3746，r=0.9992；新橙皮苷：Y=517.47X+1.3197，r=0.9993。结果表明柚皮苷进样量在0.826～8.26μg，橙皮苷进样量在0.36～3.6μg，新橙皮苷进样量在 0.37～3.7μg范围内线性关系良好。

精密吸取辛弗林对照品溶液0.1，0.5，1，1.5，2mL分别置于10mL容量瓶中，加入50%的乙醇稀释定容至刻度，摇匀，即得不同浓度辛弗林对照品溶液。按照2.2.2项下色谱条件进样，以对照品含量为横坐标、峰面积为纵坐标作曲线，进行回归分析，求得回归方程。辛弗林：Y=816.22X+1.3571，r=0.9992。结果表明辛弗林进样量在0.0114～0.228μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度实验 精密吸取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品溶液，按照2.2.1项下色谱条件连续进样6次，每次10μL，测定峰面积，计算得RSD。柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分别为0.61%，0.78%，0.57%，表明精密度良好。

2.7 稳定性试验 取黄酮苷类供试品溶液适量，分别于0，4，8，12，16，20，24h按照 2.2.1项下色谱条件进样，测定柚皮苷，橙皮苷，新橙皮苷面积，计算RSD（n=6）分别为0.98%，1.66%，1.10%。表明样品溶液在24h内稳定。

2.8 重现性试验 按照2.3.1项下方法制备6份黄酮苷类供试品溶液，再按照2.2.1项下色谱条件进样，测定柚皮苷，橙皮苷，新橙皮苷峰面积，计算RSD（n=6）分别为0.81%，1.44%，1.60%。表明此方法的重复性好。

2.9 加样回收试验 取已知柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量的枳壳粉末0.2g，精密称定，共6份，加入含柚皮苷0.925mg/mL、橙皮苷0.336mg/mL、新橙皮苷0.671mg/mL混合对照品溶液20mL，按照2.3.1项下方法制备供试品溶液，再按照2.2.1项下色谱条件测定，计算回收率。结果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷平均加样回收率（n=6）分别为95.73%、95.60%、94.56%，RSD分 别 为1.68%、1.92%、1.71%。 同理测得辛弗林平均加样回收率（n=6）为97.82%，RSD为0.88%。说明加样回收率良好，符合要求。

2.10 样品含量测定 取四个不同产地传统饮片与一体化饮片分别按照2.3.1、2.3.2项下方法制备供试品溶液，然后再分别按照2.2.1、2.2.2项下色谱条件进样，采用外标法测定，计算四个不同产地传统饮片与一体化饮片中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林的含量，测定结果见表1。

表1 枳壳不同产地传统与一体化饮片中主要成分的含量测定

使用SPSS 21.0软件进行数据处理，对枳壳传统饮片与一体化饮片柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林含量，进行两组配对样本t检验，传统饮片与一体化饮片主要成分比较检验结果：柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林P值分别为0.859、0.9157、0.8447、0.7657，均大于0.05，差异有统计学意义，说明枳壳两种工艺饮片主要成分含量无显著差别。

从文献查阅［9-14］以及枳壳加工炮制的实际操作可知，一体化加工工艺节省了中间操作，避免了枳壳成分的损失，理论上枳壳一体化饮片主要成分含量要高于传统饮片的含量，但是从上述实验及结果分析可知，新干、重庆产地枳壳一体化饮片主要成分含量高于传统饮片含量；陕西产地枳壳两种饮片主要成分含量相近；金华产地枳壳一体化饮片主要成分含量低于传统饮片含量。进而综合枳壳加工炮制实际操作及本研究结果，可以说明枳壳一体化饮片具有替代传统饮片的可能性。

3 讨论

本研究结果表明，不同产地枳壳主要成分含量有明显的差异，而金华枳壳传统饮片含量高于一体化饮片含量，可能是金华枳壳一体化饮片处理不当，造成了主要成分的流失。但是结合生产需要及实验结果可知枳壳一体化生产饮片应具有替代传统工艺饮片的可能性。

综上，枳壳一体化饮片无论是在加工过程还是主要成分含量上均优于传统饮片，并且能节省时间、人力、物力、财力，提示枳壳一体化饮片在使用过程中具有可行性。

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