万寿菊中叶黄素的测定

张玉香 王艺霖 王鹏珍 刘玉伟 王雅娟 杨文秀

[摘 要]目的 探讨万寿菊中叶黄素的测定方法，为叶黄素产品的产业化生产提供依据。方法 选取高效液相色谱法以万寿菊为原料提取叶黄素，利用watersC18色谱柱；将甲醇：乙腈=40：60为流动相；流速控制在1mL·min-1；柱温30℃；检验波长445nm；体积5μL；外标法定量，测定万寿菊中叶黄素的含量。结果 叶黄素含量在8.99-44.68μg·mL-1范围内，叶黄素浓度和峰面积存在良好线性关系；样本总体回收率为99.35%；万寿菊干花叶黄素含量显著高于颗粒中的含量。结论 高效液相色谱法在测定万寿菊中叶黄素含量当中有着显著作用，该方法准确度、灵敏度以及专属性强，能够有效测定万寿菊中叶黄素含量，并为工业制取提供有力支持。

[关键词]万寿菊 叶黄素 测定

中图分类号：J514 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）09-0398-01

葉黄素是一种天然色素，色泽鲜艳，易于着色，营养价值高，而且安全无毒副作用，因此在食品、药品、化妆品等领域有着十分广泛的应用，应用范围也在不断扩大。万寿菊当中具有丰富的叶黄素含量，而在测定叶黄素的过程当中也有多种方法可供选用，当前主要包括紫外可见分光光度法和高效液相色谱法。前者只能检测出叶黄素和衍生物的总含量，难以对游离态的叶黄素含量进行准确测定，而后者则可以有效突破这一缺陷，可以有效提高结果准确度以及特定效率。下面将对高效液相色谱法对万寿菊中叶黄素的测定进行探讨。

1、材料与方法

1.1 实验材料

本次实验选择的材料是万寿菊干花和颗粒物；叶黄素对照品（总含量在95%以上）

1.2 仪器与试剂

根据高效液相色谱法测定万寿菊中叶黄素的实际需要需要选用以下仪器：高效液相色谱仪、多头磁力搅拌器、旋转蒸发器、循环水式真空泵等。需要选用的实验试剂主要有：乙醇、乙酸乙酯等分析纯；甲醇乙腈色谱纯。

1.3 实验方法

首先，对此次研究的对照品溶液进行置位，选用精密称取仪器选取叶黄素对照品2.23mg，利用已经将对照品进行溶解，定容到含量为25毫升的容量瓶当中，获得89.7μg·mL-1叶黄素储备液。其次，对此次研究当中的高效液相色谱条件进行调节，具体为：watersC18色谱柱；将甲醇：乙腈=40：60为流动相；流速控制在1mL·min-1；柱温30℃；检验波长445nm；体积5μL。最后，制备样品液。将万寿菊干花/颗粒进行粉碎过筛，称取过筛完成后的粉末5g，在其中加入100ml的四氢呋喃/无水乙醇混合液以及含量为80%的10ml KOH溶液。在40℃的温度条件下用仪器搅拌4个小时，过滤和滤渣，用四氢氟喃洗涤滤渣，滤液通过旋蒸除去溶剂。用乙酸乙酯洗下旋蒸瓶当中的浸膏，再一次完成过滤之后将滤液收集起来，用乙酸乙酯定容。从中精确移取1ml，利用乙腈定容到10ml容量瓶当中，用微孔过滤，最终得到样品液。

1.4 计算方法

利用高效液相色谱法对万寿菊当中的叶黄素进行含量的测定，需要先计算出提取叶黄素的质量，之后通过叶黄素质量/万寿菊颗粒质量得到万寿菊当中叶黄素的含量。

2、结果

叶黄素含量在8.99-44.68μg·mL-1范围内，叶黄素浓度和峰面积存在良好线性关系；样本总体回收率为99.35%；万寿菊干花叶黄素含量显著高于颗粒中的含量。

3、讨论

万寿菊也被叫做金盏菊，是一种草本植物，含有丰富的叶黄素。叶黄素是天然色素，在水果、蔬菜、藻类生物当中都广泛存在，是优质天然色素以及抗氧化剂。天然叶黄素，有着非常突出的应用功能，如可以保护人体视力，淡化老年斑，预防癌症、动脉硬化等疾病，与此同时还有着提高人体免疫力，促进微循环以及延缓衰老和提高人体生命活力的价值，是优质抗氧化剂之一，同时也在药品、化妆品、食品等各个领域有着广泛的应用，可以满足安全无毒和无副作用的要求，有着突出的研究和应用价值。叶黄素是植物中的黄金，而且万寿菊产量也在逐步提高，但是针对于在万寿菊中测定叶黄素含量以及万寿菊当中开发利用叶黄素等问题还需要进行深层次的研究，特别是还与国外存在极大差距，仍然需要大量依赖进口。因此，加强对万寿菊中叶黄素测定技术和开发利用方法的分析和研究显得至关重要，也有着十分广阔的前景。

通过大量的文献报道以及实践经验总结可以发现，高效液相色谱法是当前测定万寿菊中叶黄素含量的重要技术手段，当前已经成为了主要检测方法，因为这一方法有着极强的选择性和灵敏度，能够显著提高分离的质量和效率，能够满足定量以及定性分析的需求。凭借着高效液相色谱法在万寿菊中叶黄素含量测定当中的诸多优势，这一方法得到了更多的关注。以往在利用这一技术检测叶黄素时，将洗脱剂确定为二氯甲烷和乙酸乙酯，这样的方法很容易造成基线漂移问题，分离效果以及分离后保存时间都得不到保障，极大程度上加大了成本和实际测定的难度。而且上面的两种溶液会腐蚀高效液相色谱仪的管路。而在此次研究当中有关的实验条件进行了优化，把常规的洗脱剂甲醇乙腈作为改进条件，并通过调整有关比例投入的方式取得了较为突出的分离效果。

综上所述，高效液相色谱法在测定万寿菊中叶黄素含量当中有着显著作用，该方法准确度、灵敏度以及专属性强，能够有效提高样品回收率，降低杂质干扰，可以成为测定万寿菊中叶黄素含量的稳定方法。

参考文献

[1] 陈丽梅.万寿菊叶黄素的提取及分析方法研究进展[J].食品科学，2015，（16）：61-63.

[2] 孟祥河.高效液相法测定万寿菊颗粒中叶黄素的含量[J].特产研究，2014，（5）：82-83.

[3] 张志强.薄层扫描法测定万寿菊中叶黄素的含量[J].化学世界，2017，（9）：536-539.