固相萃取-高效液相色谱法测定地表水中三氯吡氧乙酸残留量的研究

李 青,徐瑞丽,李丽君,梁 军,袁 晓

(广电计量检测(湖南)有限公司，湖南 长沙 410205)

三氯吡氧乙酸，英文通用名称：Trichlopyr ，CAS号：55335-06-3，化学名称：[(3,5,6-三氯-2-吡啶)氧基]乙酸。属内吸传导型苗后茎叶处理除草剂，施药后很快被杂草吸收，并传导到全株各部位，敏感杂草受药2～3 d内顶端萎蔫，出现典型激素类除草剂反应，植物畸形、扭曲，最后死亡。其主要用于防除冬小麦、玉米田间等的一年生阔叶杂草，如猪殃殃、马齿苋、龙葵、水花生等对作物有好安全性。近年来关于氯氟吡氧乙酸的文献报道很少，多为氯氟吡氧乙酸类在病虫害防治方面的使用安全、农药残留以及环境中降解等方面的研究[1-6]，未见使用反相高效液相色谱法进行含量测定分析相关报道。本文采用C18固相萃取柱对地表水进行净化，使用C18反相柱和紫外可变波长检测器，对地表水中三氯吡氧乙酸进行定量分析，得到良好结果。该方法具有操作简单、准确度高、重现性好特点，能为三氟吡氧乙酸的生产质量控制和分析方法提供参考。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

甲醇 ：色谱纯；超纯水：电阻率：18.25MΩ·cm；冰醋酸：分析纯；C18固相萃取柱；三氯吡氧乙酸标准品：99.0%，Dr. Ehrenstorfer Gmbh。

Agilent 1260型高效液相色谱仪，带二极管阵列检测器(DAD)；Agilent色谱工作站；固相萃取仪；电子天平：BD324，准确至0.1mg。

1.2 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18，4.6×250mm×5μm；流动相：V(甲醇): V(水(含0.5%冰乙酸))=80:20；流速：1.0mL/min；检测波长：291nm；柱温：25℃；进样量：5μL。

1.3 标准溶液的配制

准确称取0.0100g三氯吡氧乙酸标准品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，得到三氯吡氧乙酸标准品浓度为1000μg/mL的储备液，摇匀备用。稀释1000μg/mL的储备液为以下浓度：10、20、50、100和200μg/mL；摇匀作为标准溶液。

1.4 样品处理

水样分别取自郊区池塘、水渠、小溪。准确量取20mL水样，用冰醋酸调节pH，浑浊水样经高速离心机4000转/min离心5min，取澄清水至活化后的C18小柱，真空泵抽干，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液至40℃水浴氮吹仪上氮吹干，用流动相溶解残留物并定容至1mL，过0.22μm有机滤膜,按1.2中的色谱条件测定。

2 结果与讨论

2.1 流动相的优化

色谱柱及流动相的选择是决定液相色谱分离效果的关键。以体积比为80∶20的甲醇-水为流动相，是因为分离色谱柱的固定相为ZORBAX SB-C18，在用洗脱能力较强的甲醇比例高于80%作流动相时，三氯吡氧乙酸出峰时间过快；而甲醇比例低于80%作流动相时，三氯吡氧乙酸保留时间延长且峰型变宽。用体积比为80∶20的甲醇-水且加入0.5%冰乙酸为流动相时，此时的色谱峰峰型对称，基线平稳，在最优流动相条件下测定标准品色谱图如图1所示。

图1 三氯吡氧乙酸标品图谱

2.2 检测波长的确定

使用紫外可见分光光度仪对氯氟吡氧乙酸异辛酯的标准溶液进行200～400 nm的全波长扫描，得到如图2的紫外图谱。吸收波长在201、231、291 nm都出现吸收峰，但是在波长201、231nm处，线性范围窄，而且有干扰峰，不适合常量分析。291 nm为三氯吡氧乙酸的第3个吸收峰，在该波长下三氯吡氧乙酸吸收值适中，线性范围宽，可以满足定量分析的要求。

图2 紫外图谱

2.3 提取和净化条件的优化

鉴于三氯吡氧乙酸显弱酸性及相关文献研究[7-9]，故考虑在提取溶剂中添加适量酸，以提高目标物的回收率。分别取5、10、15、20、30、50mL水样进行C18柱固相萃取，发现取样量过少时C18柱富集量不够而达不到检出限，取样量过多时C18柱会吸附杂质而产生干扰，通过对各取样量回收率的比较，取20mL水样进行净化时回收率能在80%以上，达到地表水中三氯吡氧乙酸测定的实验要求。

2.4 方法的线性关系

配制5个不同浓度的标准溶液，在最优的色谱条件下进行色谱分析，峰面积(y)与浓度(x)之间表现出良好的线性，得到线性方程为y=3.6951x+7.8549，相关系数为：0.9996。结果表明三氯吡氧乙酸在2～600μg/mL范围内，最低检测限为0.01mg·L-1,质量浓度和峰面积呈良好的线性相关性。具体数据见表1。

表1 三氯吡氧乙酸标准品的浓度与峰面积

通过对数据进行处理得到如下图3所示图谱：

图3 校正曲线

2.5 精密度试验

用空白水样配制5个同一浓度的样品。在相同的色谱操作条件下测定其浓度值，计算三氯吡氧乙酸的平均值和相对标准偏差，结果见表2。该方法的相对标准偏差为0.13%，表明本方法可行。

表2 三氯吡氧乙酸精密度测定结果

2.6 准确度试验

评价该方法的准确度，可采用添加回收率试验，即在已知被测组分含量的样品中精确加入一定量的被测组分标准品，再进行测定，计算回收率。取池塘水、水渠水、小溪水各三份，每一份水样中加入三个不同浓度的标准溶液，按1.4的处理过程进行样品前处理，对处理后的每个样品重复测定3次，测得的回收率和相对标准偏差见表3。从表3中所示数据可知，本方法的回收率在82%～105%之间，相对标准偏差在4.0%～5.3%之间，数据表明本方法的回收率能够满足地表水中三氯吡氧乙酸残留量的测定要求。

表3 三氯吡氧乙酸回收率测定结果

3 结论

本文建立了固相萃取-高效液相色谱测定地表水中三氯吡氧乙酸残留量的分析方法。通过C18固相萃取柱对地表水进行净化和富集，避免大量使用有机溶剂的同时加快了检测进程。随着液相色谱仪和色谱柱的发展，高效液相色谱法已成为当今农药产品质量检测、环境污染监测以及农药残留研究的重要手段。本文提出高效液相色谱分析方法简单快速、实验结果准确可靠，为地表水中三氯吡氧乙酸残留量的测定提供了良好的检测手段。

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