磺胺嘧啶银联合芦荟烧伤膏对糖尿病大鼠末梢循环障碍及足溃疡的保护作用

赵跃萍，张 博，刘美君，侯雨杉，孙萌萌，李 清，袁菲阳，苏 红，邰 贺

(武警辽宁省总队医院内分泌与代谢病科1、烧伤整形科2，辽宁 沈阳 110034)

磺胺嘧啶银联合芦荟烧伤膏对糖尿病大鼠末梢循环障碍及足溃疡的保护作用

赵跃萍1，张 博2，刘美君1，侯雨杉2，孙萌萌1，李 清1，袁菲阳1，苏 红1，邰 贺1

(武警辽宁省总队医院内分泌与代谢病科1、烧伤整形科2，辽宁 沈阳 110034)

目的 研究磺胺嘧啶银联合芦荟烧伤膏对糖尿病大鼠足溃疡的保护作用并探讨其机制。方法 选取清洁级性成熟Wistar大鼠90只制成糖尿病大鼠模型，将成功造模的80只大鼠按照随机数表法分为末梢循环障碍模型组与足溃疡模型组，每组均40只。成功造模且符合研究要求的末梢循环障碍模型组(n=35)按照随机数表法分为对照组(n=18)与观察组(n=17)，足溃疡模型组(n=36)按照随机数表法分为对照组(n=18)与观察组(n=18)，所有大鼠均给予磺胺嘧啶涂抹患处，观察组在此基础上给予芦荟烧伤膏，连续给药35 d，治疗期间(1周、2周、3周)记录末梢循环障碍大鼠足底皮温、疼痛阈值，记录足溃疡大鼠溃疡面愈合情况及其外周血清血管内皮生长因子(VEGF)。结果 末梢循环障碍模型组大鼠治疗过程中各个时间点观察组的足底温度高于对照组，而疼痛阈值低于对照组，且差异有统计学意义(P＜0.05)。足溃疡模型组大鼠治疗过程中各个时间点比较观察组溃疡愈合率、外周血清血管内皮生长因子(VEGF)均高于对照组，且差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 磺胺嘧啶银联合芦荟烧伤膏能很好地改善糖尿病大鼠的末梢循环引起的温度及痛觉迟钝，与此同时能通过提高VEGF的表达促进足溃疡大鼠溃疡面愈合。

糖尿病足；溃疡；末梢循环障碍；血管内皮生长因子；磺胺嘧啶银；芦荟烧伤膏

糖尿病的严重并发症末之一是梢微循环障碍，长期高糖状态能导致末梢血管狭窄而导致相应的细胞与组织缺血缺氧，在早期临床表现中为下肢皮肤温度降低、痛觉迟钝，受外界的物理或化学损伤导致的溃疡出现时，其愈合速度与程度均明显低于健康人群[1]。临床上常用的促进溃疡面愈合的药物有磺胺嘧啶银，具有一定的抗菌消炎、保护创面与促进创面愈合的功效，同时在糖尿病足溃疡治疗中也有较大的应用价值[2]。作为治疗烧伤的常用药物芦荟，在民间已经得到广泛使用，多糖化合物是其主要有效成分，具有很好的保护创面、抗炎、促进表皮修复等功效[3]，此外芦荟对末梢循环具有一定的调节功效[3]，但是磺胺嘧啶银对外周微循环是否有调节作用还未有研究，而糖尿病足合并溃疡面的出现可加重末梢微循环障碍，从而形成恶性循环，因此研究其对创面的修复及其改善其末梢循环的效果及其作用机制中选择磺胺嘧啶银联合芦荟有一定的实践价值。既往芦荟膏仅仅用作于烧伤患者而用于微循环障碍治疗方面还未有报道，这将为今后的临床工作提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用90只近交系健康Wistar大鼠(中国医科大学实验动物中心提供；周龄8～10周，体质量210～230 g(雌鼠)、230～250 g(雄鼠)；80只成功造模成糖尿病大鼠按照随机数字表法分为末梢循环障碍研究组和足溃疡模型研究组，每组40只，分别进行建立足溃疡(Ⅱ度烫伤)大鼠模型(成功36只)与建立末梢循环障碍大鼠模型(成功35只)，且将两个实验模型组分别按照随机数表法分为对照组与观察组两个亚组，两个模型组大鼠中的对照组与观察组造模前基线资料差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性，见表1和表2。

表1 完成研究的末梢循环障碍模型组大鼠造模前基线资料比较

表2 完成研究的足溃疡模型组大鼠造模前基线资料比较

1.2 主要试剂与仪器 云南万绿生物有限公司产品：200:1库拉索芦荟凝胶冻干粉；山东健康药业有限公司产品：磺胺嘧啶银粉；美国Sigma公司产品：链脲佐菌素；Sigma公司产品：外周血清VEGF水平检测试剂盒(ELISA法)。使用美国Sigma公司生产的ASD-310S型低温离心机。

1.3 方法

1.3.1 实验动物的处理 (1)大鼠环境适应期：将90只SD大鼠雌雄分开饲养1周(每笼4只，人工控温20℃～26℃，12 h光照，12 h黑暗，颗粒饲料喂养，自由饮水取食)；(2)糖尿病大鼠造模期：诱导建立糖尿病大鼠模型，将40只大鼠禁食水12 h后以30 mg/kg的剂量标准腹腔注射链脲佐菌素(用新鲜配制的0.1 mmol/L，pH值为4.4的枸橼酸钠缓冲液配制，现用现配)，3周后所有大鼠禁食水12 h后按照2 g/kg的标准灌胃葡萄糖溶液(200 g/L)，2 h后采尾缘静脉血测定血糖值，70只成功造模(血糖＞11.1 mmol/L代表糖尿病大鼠模型建立成功)[5]；(3)注射链脲佐菌素第9周后将40只大鼠腹腔注射浓度为20 g/L的戊巴比妥钠(40 mg/kg)进行麻醉后固定好四肢，并取左后足底37 mm2皮肤的面积进行100℃水蒸气熏蒸5 s而造成Ⅱ度烫伤(以病理诊断为准，有35只达到标准)周围循环障碍与Ⅱ度烫伤溃疡模型大鼠建立，将另外40只大鼠建立末梢循环障碍模型进行足部低温处理，浸置呈有冰水的不锈钢盆钢板表面的40只大鼠，每天行走10 min，连续进行两周，最终36只造模成功。两组大鼠在当日连续给予药物35 d，其中对照组大鼠每日8时给予磺胺嘧啶银粉末(用生理盐水混匀呈泥状物后涂抹于患处)，每日18时给予麻油涂抹患处；观察组大鼠每日8时给予磺胺嘧啶银粉末(用生理盐水混匀呈泥状物后涂抹于患处)，每日18时给予芦荟烧伤膏，末梢循环障碍组大鼠治疗过程中(1周、2周、3周)记录大鼠足底皮温、疼痛阈值，足溃疡模型组大鼠治疗过程中(1周、2周、3周)记录溃疡面愈合情况及其外周血清VEGF水平。

1.3.2 足底皮温与痛阈测定方法 检测大鼠左后足底温度与疼痛阈值是在室温条件下采取红外温度仪及其足底测试仪。检测皮肤温度时要注意以免损伤皮肤，辐射热光照限值为60 s；必须要在大鼠安静的条件下进行测定疼痛阈值，且要连续在每次检测间隔不少于5 min情况下进行3次后取平均值[4]。

1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以均值±标准差)表示，计量资料两组间比较采用两个独立样本t检验，组内治疗时间点与前一时间点比较采用配对样本t检验，组内各个时间点比较采用重复测量方差分析，计数资料比较采用χ2检验，均以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 末梢循环障碍大鼠模型足底皮温比较该模型的两组大鼠治疗前足底温度比较差异无统计学意义(P＞0.05)；两组大鼠的足底温度在治疗后的前两周均低于治疗前，而于治疗后的第3周皮温开始升高，且观察组高于治疗前，差异均有统计学意义(P＜0.05)，而对照组与治疗前足底温度比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表 3。

表3 末梢循环障碍大鼠模型足底温度比较（s）

2.2 末梢循环障碍大鼠模型痛阈比较 两组大鼠治疗前痛阈比较差异无统计学意义(P＞0.05)，两组大鼠的痛阈随着治疗均逐渐降低，且观察组低于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表4。

表4 末梢循环障碍大鼠模型痛阈比较（s）

2.3 足溃疡大鼠模型溃疡面愈合情况比较治疗过程中(1周、2周、3周)观察组愈合率明显优于对照组，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表5。

表5 足溃疡大鼠模型溃疡愈合情况比较[例(%)]

2.4 足溃疡模型两组大鼠组外周血清VEGF水平比较 治疗过程中两组大鼠VEGF均逐渐升高，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，治疗过程中(1周、2周、3周)观察组VEGF水平明显优于对照组，且差异有统计学意义(P＜0.05)，见表 6。

表6 足溃疡大鼠模型外周血VEGF水平比较(s)

表6 足溃疡大鼠模型外周血VEGF水平比较(s)

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3 讨论

下肢组织坏死导致发生溃疡是糖尿病末梢循环障碍的主要症状之一，溃疡又能够加重末梢循环障碍，从而形成恶性循环，溃疡和末梢循环障碍相互关联，互相影响，同时末梢循环障碍加重溃疡面的修复，其中痛觉、温度觉减弱是末梢循环障碍主要表现[6]，在本实验中建立了糖尿病实验大鼠模型，并在此模型的基础上分别建立了两组模型(末梢循环障碍模型与足溃疡模型)，对设定的两个不同状态分别进行了研究，避免了实验过程中的相互干扰，合并足溃疡和末梢循环障碍是糖尿病患者往往同时存在的症状，因此需要寻找能同时改善两种状态的一种综合治疗方案。本临床研究显示应用磺胺嘧啶银联合芦荟烧伤膏治疗糖尿病足(溃疡与末梢循环障碍)动物实验过程中均取得了较好的效果，且该方案符合临床中糖尿病末梢循环障碍与溃疡的原则[7]，但是在今后的实验中我们将结合严格控制血糖的方法进行研究(本实验未针对血糖过高给予相应的降糖药物)，此外本实验没有研究其对具体的分子水平研究。广大学者一直重视的糖尿病足临床治疗方面研究。微血管功能障碍及其所产生的慢性炎性反应是其主要病理基础，同时往往合并着微循环障碍与溃疡，微血管的重建有助于改善溃疡的血供与提高末梢神经功能，创面愈合的核心点往往是血管内皮细胞的修复[8]，而内源性VEGF是一种能导致血管内皮细胞趋化与促进分泌血管内皮生长因子进而加速了创面的愈合[9]。

末梢循环障碍模型组研究结果表现：两组大鼠治疗前足底温度差异无统计学意义(P＞0.05)，两组大鼠的足底温度在治疗后的前两周均低于治疗前，且差异有统计学意义(P＜0.05)，而于治疗后的第3周皮温开始升高，且观察组高于治疗前，差异具有统计学意义(P＜0.05)，而对照组与治疗前足底温度差异无统计学意义(P＞0.05)，治疗过程中观察组皮温始终高于对照组，且差异具有统计学意义(P＜0.05)；两组大鼠治疗前痛阈差异均无统计学意义(P＞0.05)，两组大鼠的痛阈随着治疗均逐渐降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且观察组低于对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明改善末梢循环功能中单独采用磺胺嘧啶银有一定的效果，但联合芦荟膏后效果更佳，与李建学等[10]研究结果相似。与此同时在溃疡模型大鼠中治疗后溃疡愈合率均有所升高，但是芦荟膏联合运用磺胺嘧啶银效果会更明显，且差异有统计学意义(P＜0.05)，同时在治疗过程中两组大鼠VEGF均逐渐升高，且差异具有统计学意义(P＜0.05)，治疗过程中观察组VEGF水平明显优于对照组，且差异有统计学意义(P＜0.05)，说明其浓度与创面愈合密切相关。本研究并未进行对改善末梢循环功能的分子学机制进行研究，以往研究证实高糖状态下存在凋亡与抗凋亡平衡失调同氧化与抗氧化物质平衡失调有关，导致其凋亡率增加与血管壁受到自由基攻击的概率增加有一定的关系[10-11]，因此本研究将在今后的研究中去进行证实。此外临床中常用的能较好的抑制微血管病变的血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitors，ACEI)来促进组织修复[12]，在后续的研究中将加入该类药物进行研究(同时采用降糖)。

总之，磺胺嘧啶联合采用芦荟膏能很好的改善末梢循环功能与促进溃疡面愈合，该研究为今后的临床工作提供了很好的理论依据。

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A study of silver sulfadiazine combined with aloes burn cream in the protection of peripheral curculatory diaorders and ulcer on diabetic foot in diabetic rat.ZHAO Yue-ping1,ZHANG Bo2,LIU Mei-jun1,HOU Yu-shan2,

SUN Meng-meng1,LI Qing1,YUAN Fei-yang1,SU Hong1,TAI He1.Department of Endocrinology and Metabolic Disease1,Department of Burns and Plastic Surgery2,Liaoning Provincial Corps Hospital of Chinese People's Armed Police Forces,Shenyang 110034,Liangning,CHINA

Objective To study the mechanism of silver sulfadiazine combined with aloes burn cream in the protection of peripheral curculatory diaorders and ulcer on diabetic foot in diabetic rats.Methods A total of 80 modeling diabetic viripotent Wistar rats(modeled from 90 rats)were divided into the mold of peripheral curculatory diaorders group and the ulcer group according to random number tables,with 40 rats in each group.The peripheral curculatory diaorders group

an ice-cold stimulation,and 35 rats were successful,which were divided into the control group(silver sulfadiazine,n=18)and the observation group(silver sulfadiazine+aloes burn cream,n=17)randomly and received different treatments(treatment course for 35 days).On post treatment day(1,2,and 3 weeks),the plantar tempera-ture,hot pain thresholds of rats were detected in the peripheral curculatory diaorders group.Ulcer on diabetic foot group were given suffocating by steam,and 36 rats were successful,which were divided into the control group(silver sulfadiazine,n=18)and the observation group(silver sulfadiazine+aloes burn cream,n=18)randomly and received different treatments(treatment course for 35 days).On post treatment day(1,2,and 3 weeks),the healing condition of ulcer,and the level of vascular endothelial growth factor(VEGF)in the serum were detected.Results During the 35-day treatment,for the peripheral curculatory diaorders group,the plantar temperatures in the observation group were significantly higher than that in the control group(P＜0.05),while the hot pain thresholds in the observation group were significantly lower than that in the control group(P＜0.05);For the ulcer group,the level of VEGF and the healing condition of ulcer in the observation group were significantly higher than that in the control group(P＜0.05).Conclusion Silver sulfadiazine combined with aloes burn cream can improve the plantar temperature and pain dysesthesia of rats caused by diabetic peripheral circulatory disorders,and promote the wound healing of diabetic foot ulcers in rats with up-regulation of VEGF,which has the certain guiding value for clinical work.

Diabetic foot;Ulcer;Peripheral curculatory diaorders;Vascular endothelial growth factor(VEGF);Silver sulfadiazine;Aloes burn cream

R-332

A

1003—6350（2017）19—3102—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.19.003

邰贺。E-mall:www.tai_he83@126.com。

2016-12-02)