固相萃取-高效液相色谱法测定绿茶中微量邻苯二甲酸酯

闫子龙

(保定市第三中学，河北 保定 071000)

固相萃取-高效液相色谱法测定绿茶中微量邻苯二甲酸酯

闫子龙

(保定市第三中学，河北 保定 071000)

以C18-H为固相萃取柱，V(甲醇)：V(水)=77:23为流动相，建立了绿茶中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯和邻苯二甲酸二丁酯等3种邻苯二甲酸酯的固相萃取-高效液相色谱分离方法。在最佳条件下3种邻苯二甲酸酯在0.02～100 μg/mL范围内线性良好，相关系数r≥0.9992。 平均加标回收率为85.79%～95.31%，相对标准偏差(RSD)≤ 6.0%。该方法可有效消除绿茶中的基体干扰，定量准确可靠，适用于饮料中微量塑化剂的测定和监控。

固相萃取；邻苯二甲酸酯；绿茶；高效液相色谱法

邻苯二甲酸酯(PAEs)，俗称“塑化剂”，广泛存在于塑料制品以及人们的生活、生产中。因邻苯二甲酸酯易使人体生殖系统紊乱, 且具有潜在的致癌性[1]，因此被很多国家列为环境中重点控制监测的污染物之一。近年来，随着生活水平的提高和人们对健康的日益关切，食品中塑化剂的监控和存在水平也备受消费者关注[2]，因此，对食品中塑化剂的高灵敏度检测技术的需求越来越迫切。

目前，检测邻苯二甲酸酯的方法虽然已有高效液相色谱法[3]，气质联用法[4]，液质联用法[5]等。但由于样品中邻苯二甲酸酯的含量常常处于微量级甚至是痕量级，且样品本身基体复杂，干扰组分多，使得样品前处理技术成为分析测定邻苯二甲酸酯的关键环节。固相萃取技术是当前样品前处理技术的主流技术[6]，其常用的吸附剂有C18-H、C60，磁性纳米粒子等。但进一步发展新型吸附剂，提高吸附剂的净化效果和应用范围依然是长期以来研究的热点之一。

本文以C18-H为吸附剂，探讨了固相萃取-高效液相色谱法分离测定绿茶中邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯和邻苯二甲酸二丁酯的固相萃取条件和测定方法，以期为饮料中塑化剂的检测和有效监控提供技术支撑。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

岛津LC-20A 高效液相色谱仪, USE-12C 固相萃取仪(北京优晟科技有限公司)； KQ-3200B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DZF-6050 真空干燥箱(上海申贤恒温设备厂)。C18-H固相萃取柱(500mg/mL，北京飞美斯科技有限公司)。

邻苯二甲酸二甲酯(DMP, 纯度99.5%)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP，纯度,99%)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP, 纯度99.5%)标准对照品(国家标准物质中心)，使用前配成所需浓度的标准溶液。甲醇(色谱纯，天津市大茂化学试剂厂)，水为高纯水。其它试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm；北京分析仪器厂)；流动相：V(甲醇)：V(水)=77:23，流速：1.0 mL/min；检测波长：225 nm；进样量:20 μL；柱温：30 ℃。

1.3 样品前处理

样品来源：绿茶饮料购自当地超市。

取一C18-H固相萃取柱依次用2.0 mL甲苯，5.0 mL甲醇，10 mL超纯水活化，然后准确移取2.00 mL绿茶样品上样，用1.5 mL水淋洗，再用2.0 mL乙腈洗脱。收集洗脱液于30 ℃真空干燥后，用0.50 mL流动相溶解，取20 μL进行色谱分析。

2 结果与讨论

2.1 固相萃取条件的优化

2.1.1 淋洗溶液的选择

淋洗溶液是影响固相萃取效率的一个重要因素，理想的淋洗溶液要具有合适的淋洗强度，既能够有效除去基体杂质，又要尽可能不损失待测物。实验分别考察了V(丙酮): V(水)=1:1，V(甲醇): V(水)=1:9，水，V(丙酮): V(水)=1:9，V(乙腈: V(水)=1:9等淋洗溶液对3种PAEs在C18-H柱上回收率的影响。由结果(图1)可以看出以水和V(丙酮): V(水)=1:9为淋洗溶液可获得较好的回收率。考虑到有机溶剂对环境有污染，实验选择水做淋洗溶液。同时，实验进一步考察了不同体积(0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL)的水对3种PAEs回收率的影响。结果表明，当水的体积大于1.5 mL时，3种PAEs的回收率会有所下降，综合考虑净化效果和回收率，实验选择1.5 mL水为淋洗溶液。

图1 不同淋洗溶液对PAEs回收率的影响

图2 不同洗脱剂对PAEs回收率的影响

2.1.2 洗脱剂的选择

洗脱剂的种类和体积也是影响回收率的一个关键因素。实验系统考察了乙腈、丙酮、V(甲醇)：V(水)=77:23、V(乙腈): V(水)=9:1，甲醇、二氯甲烷、环己烷、甲苯等洗脱剂对3种PAEs回收率的影响。实验结果(图2)表明，以乙腈为洗脱剂可以得到较好的回收率。进一步洗脱剂的体积(1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL)考察显示，当乙腈的体积小于2.0 mL时，随着乙腈体积逐渐的增加，回收率逐渐增加，但当乙腈体积增加至2.0 mL时，继续增大乙腈体积，3种PAEs的回收率基本保持不变。综合考虑回收率、萃取效果及乙腈的毒性，实验选择2.0 mL乙腈为洗脱剂。

2.1.3 样品酸度和上样体积

样品酸度对固相萃取效率的影响是不可忽略的。实验考察了样品酸度在pH值4～9范围内对3种PAEs的回收率的影响，结果表明(图3)，当样品酸度在pH为7时可获得较好的回收率。同时，实验进一步考察了不同体积的6.0 μg/mL 三种PAEs溶液在C18-H柱上回收率的情况，以此衡量固相萃取柱对样品承载量的大小。由结果(图3)可以看出，随着样品体积的增加三种PAEs的回收率逐渐下降，当样品体积大于2.0 mL时，样品严重损失，回收率显著下降。综合考虑回收率和实际样品中待测物的浓度水平，实验选择样品的上样体积为2.0 mL。

pH值

图4 三种PAEs色谱分离图

2.2 方法特性与样品分析

在选定的色谱和固相萃取条件下，3种邻苯二甲酸酯(DMP、DEP、DBP)可达到完全分离(图4)，且在0.02～100 μg/mL范围内线性良好，相关系数r≥0.9992。DMP、DEP、DBP三种塑化剂的检出限分别为0.030，0.035，0.051 μg/mL。实际样品分析结果表明，某品牌绿茶中DMP的含量水平为0. 061 μg/mL，3种邻苯二甲酸酯在三个加标水平下(0.2，1.0，10 μg/mL)的平均加标回收率为85.79%～95.31%，相对标准偏差(RSD)≤ 6.0%。

[1]李 蕾，宋乃宁，李海山,等. 邻苯二甲酸脂类毒理学效应及其机制研究进展[J].中国药理学与毒理学杂志，2014, 28(3): 467-474.

[2]Yang J, Li Y, Wang Y, et al. Recent advances in analysis of phthalate esters in foods[J]. Trends in Analytical Chemistry, 2015, 72: 10-26.

[3]林兴桃，王小逸，夏定国，等. 固相萃取-高效液相色谱法测定 人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物[J].分析化学，2011, 39(6): 877-881.

[4]Du L, Ma L, Qiao Y, et al. Determination of phthalate ester in teas and infusions by gas chromatography- mass spectrometry[J].Food Chemistry, 2016, 197: 1200-1206.

[5]湛社霞，匡耀求，李秀英，等. SPE-UPLC-MS/MS 测定环境水体中呋喃丹、莠去津、甲萘威及6种邻二甲酸酯类[J].分析测试学报，2015, 34(8): 874-879.

[6]Fan H, Deng Z, Zhong H, et al. Development of new solid phase extraction techniques in the last ten years[J].Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2013, 22 (4), 293-302.

(本文文献格式：闫子龙.固相萃取-高效液相色谱法测定绿茶中微量邻苯二甲酸酯[J].山东化工，2017，46(04)：73-74,77.)

Determination of Trace of Phathalate Eaters in Green Tea Using Solid Phase Extraction - High Performance Liquid Chromatography

YanZilong

(No.3 High School of Baoding, Baoding 071000, China)

Three types of phathalate eaters (Dimethyl phthalate, Diethyl phthalate and Dibutyl Phthalate) in green tea were extracted by solid phase extraction-high performance liquid chromatography method using C18-H column as the extraction column and methanol-water (77:23,V;V) as mobile phase. Under the optimized conditions, the linearity of the three kinds of phathalate eaters was ranged from 0.02 to 100 μg/mL with r≥0.9992. The recoveries at three spiked levels were ranged from 85.79% to 95.31% with RSD less than 6.0%. The proposed method can efficiently eliminate the matrix interferences with accurate results, and it can be applied for analysis of trace phathalate eaters in beverage samples.

solid phase extraction; phathalate eaters; green tea; high performance liquid chromatography

2017-01-10

闫子龙(2001—)，河北保定人， 现从事化学检验方面研究。

TS272.7;O657.72

A

1008-021X(2017)04-0073-02