注射用兰索拉唑细菌内毒素检查法研究

李晓春， 王莉芳， 徐长根

(陕西省食品药品检验所药理室，陕西 西安 710065)

注射用兰索拉唑细菌内毒素检查法研究

李晓春， 王莉芳， 徐长根

(陕西省食品药品检验所药理室，陕西 西安 710065)

目的 ：建立注射用兰索拉唑细菌内毒素检查方法。方法：按《中国药典2010年版二部》附录ⅪE细菌内毒素检查法及相关规定，使用两个厂家鲎试剂对3批注射用兰索拉唑进行干扰试验和细菌内毒素检查。结果：稀释样品浓度至0.1 mg/mL时，可排除干扰。结论：注射用兰索拉唑可适用细菌内毒素检查法控制质量。

注射用兰索拉唑；细菌内毒素；鲎试剂；干扰试验

注射用兰索拉唑是白色粉末状物，属于新一代质子泵抑制剂[1]，分布于胃粘膜壁细胞的酸性环境后 ，转变为有活性的代谢物。这种代谢物与存在于酸生成部位的H+-K+-ATP酶结合，通过抑制H+-K+-ATP酶的活性而抑制酸分泌，临床常用于各种类型的腐蚀性食道炎的治疗，包括反流性食管炎、胃溃疡、十二指肠溃疡，亦用于口服疗法不适用的伴有出血的十二指肠溃疡[2-3]。根据《中国药典2010年版》注射剂检验通则(附录212-213)[4-6]，静脉用注射剂要进行热原检查或细菌内毒素检查。《中国药典2010年版》中没有收录注射用兰索拉唑，但在国家食品药品监督管理局标准中是采用家兔法控制热原的。家兔法存在试验条件要求较高、操作较为繁琐和影响因素多等缺点，而细菌内毒素检查法具有快速灵敏、重现性好、简便易行等优点。因此对于注射用兰索拉唑更倾向于采用细菌内毒素检查法。为提高该品种质量标准，加强药品质量控制，本文对注射用兰索拉唑采用细菌内毒素检查法的可行性进行了研究，现介绍如下。

1 材料

1.1 仪器

DHG-9245A电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；ZH-2自动涡旋混合器(天津药典标准仪器厂)；移液器(Eppendorf Research Plus)。

1.2 药品与试剂

注射用兰索拉唑，(规格30mg/支，批号140201、140318、140624，某制药有限公司)；细菌内毒素工作标准品(WSE，规格80 Eu/支，批号150601-201377,中国食品药品检定研究院)；细菌内毒素检查用水(BET水，规格5 mL/支，批号160006-201401，中国食品药品检定研究院)；鲎试剂(TAL，规格0.1 mL/支，灵敏度0.5 Eu/mL，批号1205162，湛江博康海洋生物有限公司；批号1204061，湛江安度斯生物有限公司)。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度(λ)复核

将细菌内毒素工作标准品用BET水溶解，在涡旋混合器上混匀15min，然后稀释成2.0、1.0、0.5、0.25 λ(λ为灵敏度标示值)4个浓度等级，按《中国药典2010年版二部》附录(Ⅺ E)细菌内毒素检查法进行灵敏度复核试验，结果见表1所示。

表1 鲎试剂灵敏度复核

注：+表示反应呈阳性 -表示反应呈阴性

结果显示，2批鲎试剂灵敏度测定值(λc)均在0.5 λ～2 λ之间，结果均符合规定。

2.2 细菌内毒素限值(L)的确定

根据细菌内毒素限值L=K/M，式中K为规定给药途径，人每千克体重每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，注射剂K为5 Eu/( kg·h); M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，按照注射用兰索拉唑说明书用法用量，注射用兰索拉唑为静脉滴注，通常成年人一次30mg，一日2次，推荐静滴时间30min。中国人均体重按60kg计算，则M为1 mg/(kg·h)，则L = K/M = 5 Eu/(kg·h)/1mg/(kg·h)= 5Eu/mg。

2.3 供试品最小有效稀释浓度(MVC)的确定

由于本品为注射用无菌粉末，按《中国药典2010年版二部》附录ⅪE细菌内毒素检查法中供试品最小有效稀释浓度可按公式MVC=λ/ L计算，L为注射用兰索拉唑的细菌内毒素限值5Eu/mg，λ为鲎试剂标示灵敏度。目前市售鲎试剂的λ常为0.5、0.25、0.125、0.06、0.03 Eu/mL，则对应的供试品的MVC为0.1、0.05、0.025、0.012、0.006mg/mL。

2.4 干扰试验预实验

用BET水将转移因子注射液分别制成10、5、1、0.5、0.1、0.05、0.025mg/mL的系列溶液，作为供试品阴性对照(NPC)系列，另制备与NPC系列相同浓度的供试品系列溶液，使每一稀释度的供试品溶液中都含有2λ的细菌内毒素，作为供试品阳性对照(PPC)系列。每一供试品浓度重复2管，按常规设立阳性对照(PC)管和阴性对照(NC)管。用λ为0.5 Eu/mL的鲎试剂与上述系列溶液按照药典方法进行反应。恒温37±1℃，保温60±2min观察结果，结果见表2、表3、表4。

表2 注射用兰索拉唑干扰试验预实验结果

表3 注射用兰索拉唑干扰试验预实验结果

表4 注射用兰索拉唑干扰试验预实验结果

从表2、3、4可以看出，用两个厂家生产的鲎试剂进行干扰试验预实验结果是一致的，质量浓度为0.5mg/mL及以上的供试品对鲎试剂与细菌内毒素之间的凝集反应有抑制作用，但稀释至质量浓度为0.1mg/mL或更低时，抑制作用消失。理论上可选择供试品质量浓度为0.1、0.05、0.025mg/mL中的任一溶液，采用相应灵敏度的鲎试剂进行干扰试验，为了简化供试品的稀释操作步骤和降低对鲎试剂灵敏度要求，本试验选择质量浓度为0.1mg/mL的供试品溶液，用λ为0.5Eu/mL的鲎试剂进行干扰正式试验。

2.5 正式干扰试验

根据干扰试验预实验结果，选择注射用兰索拉唑0.1mg/mL浓度进行正式干扰试验。用供试品0.1mg/mL浓度溶液及BET水分别稀释细菌内毒素工作标准品，配制成细菌内毒素最终浓度分别为1.0、0.5、0.25、0.125 Eu/mL的系列溶液，分别取0.1 mL加入到已复溶的两个不同厂家生产的鲎试剂(λ为0.5 Eu/mL)管内，每个浓度平行做4管，另取BET水做2支阴性对照管，进行干扰试验。结果见表5。

表5 注射用兰索拉唑正式干扰试验结果

表5结果显示Et/Es在0.5～2.0之间(Es为用BET水制成的细菌内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值，Et为用供试品溶液制成的细菌内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值)，按照《中国药典》的判断标准，供试品0.1mg/mL浓度溶液对鲎试剂与细菌内毒素之间的凝集反应既无抑制作用，也无增强现象，说明使用鲎试剂方法检查注射用兰索拉唑中细菌内毒素是可行的。

2.6 供试品细菌内毒素检查

取3批注射用兰索拉唑，配制成0.1mg/mL浓度溶液，使用两个厂家的鲎试剂(λ为0.5 Eu/mL)，按《中国药典》二部附录Ⅺ E细菌内毒素检查法检查，每1mg注射用兰索拉唑中含细菌内毒素的量应小于5Eu，结果均符合规定。结果见表6。

表6 注射用兰索拉唑细菌内毒素检查结果

3 讨论

本实验采用2个厂家的鲎试剂，是因为不同厂家的鲎试剂在质量参数、生产工艺等方面有一定差异，其抗干扰的能力也存在差异。所以，通过采用2个厂家的鲎试剂对3个批号的供试品进行试验，可客观地评价供试品的稀释浓度对鲎试剂与细菌内毒素发生凝集反应的干扰程度，初步筛选出对细菌内毒素检查无干扰的供试品浓度范围，以判断该方法是否可行[7-10]。

在干扰试验预实验中，要考察同时满足2个厂家鲎试剂及3批供试品都不产生干扰的供试品浓度，以确定正式干扰试验的供试品浓度，不可以仅以某个单一厂家的某一批供试品的浓度作为正式试验浓度，以免造成结果偏差，给该品种的检验工作带来困扰。本文将注射用兰索拉唑的限值从8.33Eu/mg提高到5Eu/mg，不干扰浓度从文献中的0.06mg/mL提高到0.1mg/mL。在该浓度下，对鲎试剂和细菌内毒素的凝集反应未有干扰，可以认为该品种以5Eu/mg限值进行细菌内毒素检查的方法是可行的。可以为该品种的细菌内毒素控制从家兔法修订为细菌内毒素检查法提供一定的试验依据。

[1] 马革委.鲎试剂法检测注射用兰索拉唑的细菌内毒素[J]. 北方药学，2015，12(6)：99-100.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版二部[S] 北京：中国医药科技出版社，2010：附录99-102.

[3] 中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010：310-325.

[4] 张义伟. 细菌内毒素检查的几点体会[J]. 中国实用医药，2010，5(3)：86-87.

[5] 张 横，蔡 彤，高 华.盐酸莫西沙星注射液细菌内毒素检查方法学研究[J].中国药事，2014，28(12)： 1298-1302.

[6] 杨海燕.帕拉米韦注射液细菌内毒素检查法的研究[J].中国药事，2016，30(2)：133-136.

[7] 杨秀成.采用鲎试剂检查心脉隆注射液中细菌内毒素的可行性研究[J].现代医药卫生,2010，26(11)：1660-1661.

[8] 曾敏华，杨为群.丹参川芎嗪注射液中热原检查方法的研究[J].中医药导报，2010，16(6)：111-112.

[9] 宋天琪，田子新.氟[18F]脱氧葡糖注射液细菌内毒素检查法的方法学验证[J].天津药学，2010，22(1)：3-5.

[10] 吴 婷，李 薇.单硝酸异山梨酯注射液细菌内毒素检查法研究[J].中国医药导报，2010，7(12)：68-70.

(本文文献格式：李晓春， 王莉芳， 徐长根等.注射用兰索拉唑细菌内毒素检查法研究[J].山东化工，2017，46(04)：70-72.)

Study on the Bacterial Endotoxin Test in Lansoprazole for Injection

LiXiaochun，WangLifang，XuChanggen

(Shaanxi Institute for Food and Drug Control, Shaanxi Province, Xi'an 710065, China)

OBJECTIVE To establish the bacterial endotoxin inspection method of Lansoprazole for Injection. MEHTODS According to bacterial endotoxin inspection method and the related regulations of the Chinese Pharmacopoeia 2010 volume Ⅱappendix ⅪE, different products of tachypleus amebocyte lysate(TAL) were used for the investigation of interference and bacterial endotoxin test on three batches of sample. RESULTS Lansoprazole for Injection did not interfere with bacterial endotoxin test when it was diluted to the concentration of 0.1mg/mL. CONCLUSION It is feasible to control quality of Lansoprazole for Injection by bacterial endotoxin test.

lansoprazole for injection; bacterial endotoxin; tachypleus amebocyte lysate; interference test

2016-011-17

李晓春(1982—)，女，内蒙古阿拉善人，主管药师，研究方向：食品药品检验及药理学研究。

R927

A

1008-021X(2017)04-0070-03