MyD88通路关键因子IRAK1、IRAK4和TRAF6在尖锐湿疣组织中的表达

史毓杰，杨文林，林 立，陈惠勇，尹嘉文，陈嘉惠

尖锐湿疣是由HPV感染导致的性传播疾病，该病易反复发作难以治愈，研究发现其发生、发展及转归与人体的免疫功能密切相关[1]。Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)通过识别病原相关分子模式激活机体免疫反应，其中MyD88是TLR信号转导通路中最重要的衔接蛋白。本课题组前期实验发现髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88, MyD88)在尖锐湿疣患者中表达上调，且MyD88表达与血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α、白细胞介素(interleukin, IL)-10呈正相关[2-4]。本实验进一步探讨MyD88通路下游关键因子白介素-1受体相关激酶-1(interleukin-1 receptor-associated kinase 1, IRAK1)、白介素-1受体相关激酶-4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4, IRAK4)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6, TRAF6)在尖锐湿疣患者皮损组织中的表达，进一步明确HPV感染是否可以激活MyD88依赖的信号传导通路。

1 材料与方法

1.1一般资料选取2014年5月～2017年5月广州医科大学第二附属医院收治的尖锐湿疣患者60例，均符合尖锐湿疣诊断标准[5]，并经病理检查确诊。其中男性48例，女性12例，年龄24～62岁，平均(42.25±1.33)岁；病程时间1.2～18.3个月，平均病程(3.85±1.40)个月，所有患者于就诊前2周内无抗病毒及免疫制剂治疗史。取男性患者包皮、冠状沟及肛周皮损组织，女性患者外阴及肛周皮损组织作为病损组织，同时选取我院行包皮环切术后的正常包皮组织60例作为对照组织，年龄25～60岁，平均(43.00±1.25)岁。所有组织经10%中性福尔马林固定后用石蜡包埋切片。

1.2方法IRAK1、IRAK4和TRAF6抗体由北京博奥森生物公司提供。采用丹麦Dako公司生产的通用型EnVision两步法免疫组化试剂盒进行检测，所有检测步骤严格按照试剂盒说明书要求进行。依据免疫组化染色阳性细胞比例计分：无阳性细胞染色为(-)，阳性细胞数1%～25%为(+)，26%～50%为()，>50%为()。

1.3统计学处理采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计数资料采用率(%)表示，等级资料采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

60例尖锐湿疣患者和对照组在性别、年龄上差异无统计学意义(P>0.05)。

免疫组化检测结果显示IRAK1、IRAK4和TRAF6在对照组中多呈无表达(-)或低表达(+)；而在尖锐湿疣组中普遍表达，且高表达()例数较多，阳性表达的棕色颗粒主要位于基底细胞和棘层细胞的细胞质和(或)细胞核内(图1～3)。

对两组免疫组化结果按染色程度进行统计分析：对照组中3种因子无表达或低表达的比例分别为IRAK1(96.7%)、IRAK4(98.3%)、TRAF6(100%)，均显著高于尖锐湿疣组。而尖锐湿疣组中，3种因子呈高表达()的比例分别为IRAK1(80%)、IRAK4(83.3%)、TRAF6(91.7%)，也显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，表1)。

3 讨论

尖锐湿疣是国内外目前较为常见的性传播疾病，自20世纪80年代以来无论是发病率还是复发率均现显著上升态势，成为危害公共安全的重要疾病之一[6]。既往研究发现HPV进入人体后可形成持续性感染，而这种持续性感染与机体的免疫监视功能发生障碍有关。在TLRs信号传导的途径中，MyD88是关键的接头分子，是启动下游信号转导的靶分子[7]。MyD88表达激活可促进下游包括NF-κb在内的多条免疫途径活化，促进体内各种炎症因子的释放。

表1 尖锐湿疣组织中IRAK1、IRAK4、TRAF6的表达[n(%)]

①A①B②A②B③A③B

图1对照组(A)和尖锐湿疣组(B)中IRAK1的表达，EnVision两步法图2对照组(A)和尖锐湿疣组(B)中IRAK4的表达，EnVision两步法图3对照组(A)和尖锐湿疣组(B)中IRAK6的表达，EnVision两步法

房婕等[8]发现，初发和复发尖锐湿疣患者外周血CD3+T细胞内MyD88和TRAF6蛋白表达显著增加，而咪喹莫特联合ALA-PDT治疗组尖锐湿疣患者外周血CD3+T细胞内MyD88和TRAF6蛋白表达显著降低。本课题组前期实验亦表明，MyD88在尖锐湿疣患者中表达上调，且MyD88表达与血清TNF-α、L-10呈正相关。本实验进一步对MyD88通路的关键因子检测发现，IRAK1、IRAK4和TRAF6在对照组中无表达或呈低表达，而在尖锐湿疣观察组中普遍呈高表达，两组相比差异均有统计学意义。MyD88与IRAK4结合后，会促进IRAK4介导的IRAK1磷酸化，高磷酸化的IRAK1进入胞质募集可溶性TRAF6，从而导致两种不同信号途径的激活[9-10]。因此，结合前期实验[2-4]和本实验结果，上述通路相关因子的激活可能与尖锐湿疣的发生、发展以及复发存在某种关联性，提示在尖锐湿疣患者中，HPV感染可以激活MyD88依赖的信号传导通路，MyD88可能通过IRAK1、IRAK4和TRAF6的激活实现对下游TNF-α、IL-10等各种免疫因子的调节，导致机体的免疫抑制和免疫损伤。

综上所述，尖锐湿疣患者MyD88及其通路相关因子IRAK1、IRAK4、TRAF6的表达显著高于常人，通过对其进行深入分析和研究将有助于临床寻找预防及治疗尖锐湿疣的新途径。

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