不同容器发酵水豆豉对便秘的防治效果及机制

冯霞，赵欣

(1.重庆第二师范学院 重庆市功能性食品协同创新中心，重庆 400067；2.重庆第二师范学院 重庆市功能性食品工程技术研究中心，重庆 400067；3.重庆第二师范学院 功能性食品研发重庆市工程实验室，重庆 400067；4.重庆第二师范学院 生物与化学工程系，重庆 400067)



不同容器发酵水豆豉对便秘的防治效果及机制

冯霞1,2,3,4，赵欣1,2,3,4

(1.重庆第二师范学院 重庆市功能性食品协同创新中心，重庆 400067；2.重庆第二师范学院 重庆市功能性食品工程技术研究中心，重庆 400067；3.重庆第二师范学院 功能性食品研发重庆市工程实验室，重庆 400067；4.重庆第二师范学院 生物与化学工程系，重庆 400067)

对不同容器发酵水豆豉乙醇提取物的便秘预防效果及作用机制进行了研究.对活性炭诱导便秘的小鼠灌胃不同容器发酵水豆豉提取物后发现对照组(活性炭诱导便秘)小鼠的体重下降最多，活性炭在小肠中的推进率最低，排出首粒黑便的时间也最长；相比于对照组玻璃容器发酵水豆豉(GVFS)提取物可以缓解便秘小鼠的体重下降，提高活性炭的推进率和减少排出首粒黑便时间.同时相对于对照组，GVFS可以提高小鼠血清MTL、Gas、ET、AchE、SP、VIP的水平和降低SS水平，且对这些血清水平的影响显著强于陶瓷容器发酵水豆豉(CVFS)提取物和塑料容器发酵水豆豉(PVFS)提取物.RT-PCR实验结果显示GVFS组小鼠的c-Kit、SCF、GDNF mRNA表达高于PVFS、CVFS组和对照组，而TRPV1、NOS表达仅高于正常组.由此可见，水豆豉具有良好的便秘预防效果，且玻璃容器发酵提取物能够使水豆豉具有更好的效果，主要原因可能是由于GVFS含有较高含量的大豆异黄酮.

水豆豉；容器；便秘；活性炭；小鼠

水豆豉是一种传统大豆发酵食品,在中国四川地区被当作调味料和菜品使用已经有上千年的历史，作为保健食品和中药也被长期使用，具有开胃、清热和解毒等效果；通过现代科研手段也进一步发现水豆豉含有多种功能性成分，使其具有抗氧化、抗突变和抗癌效果[1].食品发酵过程中受到多种因素的影响，包括发酵时间、发酵温度、菌种条件和水分含量等因素，由于水豆豉是自然发酵的食品，外界条件的变化对其品质都有直接的影响[2]；同时，人为的条件也可能对水豆豉的发酵产生影响，发酵过程的容器就是一种能对大豆发酵制品产生影响的人为给予条件[3].韩国有研究证明不同发酵容器发酵的大酱(大豆发酵制品)的品质之间有显著差异[4]，进一步说明了容器有可能对大豆发酵制品的品质产生影响.

便秘不是一种疾病，但却是一种肠胃功能异常的表现，这种机体的异常状态如果长期持续会进一步引发许多慢性病，甚至可能导致心肌梗死、脑出血和结肠癌等严重的威胁生命的疾病[5].本研究团队的研究证实水豆豉具有较好的肠胃保护作用，能通过调节机体的保护因子，起到预防胃损伤等作用[6].另外通过体外实验也证明水豆豉具有体外抑制结肠癌细胞的效果，说明其对肠道也可能存在一定的保护作用[7].通过工业生产和家庭自制水豆豉的食用可能对肠道有保健功效，因此通过改进工艺提高水豆豉的保健功效一直是研究的重点.本研究通过比较塑料、陶瓷、玻璃这3种容器对水豆豉在便秘中的预防效果，找出能产生最好抑制便秘作用的水豆豉及其发酵容器，研究结果对进一步改良水豆豉生产工艺，保护水豆豉的生产和应用提供依据.

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

大豆：2014年秋季黑龙江省嫩江县黑龙江农垦总局大西江农场出产.

胃动素(MTL)、胃泌素(Gas)、内皮素(ET)、生长抑素(SS)、血清乙酰胆碱酯酶(AchE)、P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)血清因子试剂盒，北京普尔伟业生物科技有限公司；CycleTESTTM PLUS DNA染色试剂盒，德国Becton Dickinson公司；Trizol试剂、oligodT18、RNase、dNTP 和MLV，美国Invitrogen公司；RT-PCR引物c-Kit、SCF、TRPV1、GDNF、NOS和GAPDH，天根生化科技有限公司；其余试剂均为国产分析纯.

雌性6周龄SPF级KM(昆明)小鼠100只(体重20～25 g)购于重庆医科大学动物实验中心，动物许可证号：SCXK(渝)2012-0001.

LD2X-50FB立式压力蒸汽灭菌锅,江西华科精密仪器有限公司；PYX-DHS-50X65BS隔水式电热恒温培养箱，上海百典仪器设备有限公司；UV9600紫外分光光度计，北京北分瑞利分析仪器(集团)公司；Bio-Rad小型水平电泳槽，美国Bio-Rad公司；ABI 2720 PCR仪，美国Applied Biosystems公司.

1.2 实验方法

1.2.1 不同容器发酵水豆豉及提取

加入大豆量2倍的蒸馏水进行浸泡(12 h)，去除浸泡水后将大豆进行蒸煮(105 ℃，60 min)，然后将大豆冷却至36 ℃后置于容器(陶瓷、塑料和玻璃容器)中进行保温发酵(36 ℃，72 h).发酵完成后将水豆豉进行冷冻干燥，粉碎后的水豆豉中加入20倍量的体积分数80%的乙醇提取12 h，提取3次后合并提取液，减压蒸干溶剂得到水豆豉提取物用以动物实验.

1.2.2 不同容器发酵水豆豉中大豆异黄酮含量的检测

以染料木素计测定水豆豉中大豆异黄酮含量，将染料木素标准品用体积分数80%的乙醇配制成质量浓度为0.002～0.020 g/L的标准溶液.使用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×25 mm，5 μm)；流动相为体积分数40%的甲醇；流速为1.0 mL/min；检测波长为260 nm；柱温为50 ℃；取染料木素标准品溶液20 μL注入六通阀中，测定样品峰面积.求得回归方程为Y=-316 706+4.20×108X(r2=0.995)，由此计算出标准曲线.再取0.2 g水豆豉提取物用无水乙醇定容至10 mL作为待测液，将待测液测定后对照染料木素标准曲线得到水豆豉中异黄酮含量值[8].

1.2.3 动物便秘实验

通过1周适应环境喂养后将KM小鼠按体重(25.5 g左右)随机平均分为5组，分别是正常组、对照组、CVFS(ceramic vessel fermented Shuidouchi，陶瓷容器发酵水豆豉)组、PVFS(plastic vessel fermented Shuidouchi，塑料容器发酵水豆豉)组和GVFS(glass vessel fermented Shuidouchi，玻璃容器发酵水豆豉)组，每组20只.实验周期为9 d，正常对照组和对照组小鼠每天灌胃0.2 mL蒸馏水，CVFS、PVFS和GVFS组小鼠每天按4 g/kg(小鼠体重)分别灌胃水豆豉组提取物.从第5天开始除正常对照组外其他组小鼠每天灌胃0.2 mL活性炭水(质量浓度为100 g/L，2 ℃)，第8天灌胃活性炭水后各组小鼠均绝食24 h，第9天包括正常组在内所有小鼠灌胃0.2 mL活性炭水.每组20只小鼠再平均分为2组，一组30 min后断颈处死小鼠，然后解剖取小鼠小肠观察活性炭在小肠中的推进率，按推进率(%)=(活性炭在小肠中推进距离/小肠总长度)×100计算；另一组10只小鼠观察其排出首粒黑便的时间[6].实验过程中每天测定并记录各组实验动物的体重.

1.2.4 小鼠血清指标检测

小鼠处死后心脏取血，然后将小鼠血浆在5 000 r/min下离心分离5 min，然后取上层血清，按试剂盒说明书测定小鼠血清中MTL(胃动素，motilin)、Gas(胃泌素，gastrin)、ET(内皮素，endothelin)、SS(生长抑制素，somatostatin)、AchE(乙酰胆碱酯酶，acetylcholinesterase)、SP(P物质，substance P)、VIP(血管活性肠肽，vasoactive intestinal peptide)的水平.

1.2.5 RT-PCR 实验

用RNAzol 试剂提取小鼠小肠组织中的总RNA，在37 ℃下使用RNase-free DNase对提取到的总RNA进行消化15 min，然后使用RNeasy试剂盒纯化RNA后将RNA浓度调整到1 μg/μL.在条件37 ℃ 120 min，99 ℃ 4 min，4 ℃ 3 min下，以RNA (2 μg)为模版，在逆转录酶的作用下合成cDNA.接着以反转录-聚合酶链反应法扩增c-Kit、SCF、TRPV1、GDNF、NOS和GAPDH(表1)的DNA表达，测量mRNA基因的转录水平，其中GAPDH是作为内参照的持家基因.最后以含10 g/L溴化乙锭琼脂的电泳检查各PCR扩增产物，并使用Image1.44软件定量分析表达强度，计算水豆豉灌胃各组小鼠的相关基因与对照组小鼠的比值[9].

1.3 数据统计

实验进行3 次平行测定，然后取3次实验的平均结果标记为(平均±SD(标准偏差))，然后采用单因素方差分析(One Way ANOVA)，使用统计学软件(SAS9.1)对各组数据之间的显著差异性进行计算(P<0.05)[9]，然后用小写字母进行标识，不同字母表示存在显著差异性.

表1 RT-PCR引物

2 结果与分析

2.1 实验过程中小鼠体重的变化

由图1可知，在前5天各组小鼠的体重呈正常增长状态，各组小鼠之间体重差别不大，无显著差异(P>0.05).第5天开始由于使用活性炭诱导便秘，除正常组小鼠体重持续增长外，其他各组小鼠出现体重增长被抑制的情况，到第9天对照组小鼠的体重已经呈现大幅度的下降，CVFS、PVFS和GVFS组小鼠的体重也出现一定程度的下降，GVFS组小鼠体重显著高于CVFS和PVFS组小鼠(P<0.05).便秘后会出现食欲不振的情况，影响正常的摄食，从而造成体重的下降，因此体重的异常下降是便秘的一个表现[10].水豆豉可以缓解活性炭诱导便秘造成的体重下降，且GVFS抑制体重下降的能力优于CVFS和PVFS，可见GVFS对便秘的抑制作用好于CVFS和PVFS.

不同字母表示对应组数据平均值存在显著性差异(P<0.05)；相同字母表示对应组数据平均值不存在显著性差异(P>0.05).图1 实验过程中小鼠的体重Fig.1 Body weight of mice during the experiment mice

2.2 不同容器发酵的水豆豉提取物对便秘小鼠排出首粒黑便时间的影响

由图2可知，第9天灌胃活性炭水后各组小鼠排出首粒黑便的时间存在显著差异(P<0.05).正常组排出首粒黑便的时间最短，仅为(61±6) min，对照组时间最长(183±11) min，水豆豉喂养各组排出首粒黑便的时间较对照组大幅度下降，CVFS组为(122±8) min，PVFS组为(110±9) min，GVFS组为(92±7) min.便秘会造成排便困难，使排便间隔时间大大高于正常状态.通过动物实验模拟便秘排便状态，观察活性炭水产生黑便的排出时间可以作为判断便秘程度的一个指标[10].由此可以看出GVFS在3种不同容器发酵水豆豉中可以最大程度地缓解便秘.

图2 不同容器发酵的水豆豉提取物对便秘小鼠排出首粒黑便时间的影响Fig.2 Influence on time of first black stool discharging in different vessels fermented Shuidouchi extracts treated constipation mice

2.3 不同容器发酵水豆豉提取物对活性炭在便秘小鼠小肠中推进率的影响

通过解剖小鼠，观察小鼠小肠情况，可以看出诱导便秘使对照组小鼠的小肠总长度较其他各组略微缩短(表2)，活性炭水在正常组、GVFS组、PVFS组、CVFS组和对照组小肠中的推进距离依次下降.计算后可知，活性炭在正常组小鼠小肠中的推进率最高，在对照组中最低，在CVFS组中的推进率显著高于其他2种水豆豉(P<0.05).活性炭在小肠中的推进率也是检验便秘状态和小肠功能的重要指标，推进率高证明肠道功能正常，过低意味着便秘状态造成的小肠功能失调，通过提高推进率可以起到恢复便秘状态小肠功能的效果[11].实验结果显示GVFS可以有效地缓解便秘对小肠功能造成的影响，且效果优于CVFS和PVFS.

表2 不同容器发酵的水豆豉提取物对便秘小鼠小肠长度、活性炭推进距离和活性炭推进率的影响(每组小鼠数n=10)

不同字母表示对应组数据平均值存在显著性差异(P<0.05)，相同字母表示对应组数据平均值不存在显著性差异(P>0.05).

2.4 不同容器发酵水豆豉对小鼠血清MTL、Gas、ET、SS、AchE、SP和VIP水平的影响

由表3可知，正常组小鼠血清中的MTL、Gas、ET、AchE、SP、VIP含量比其他各组小鼠的含量更高，SS含量低于其他各组.但是对照组小鼠血清中的MTL、Gas、ET、AchE、SP、VIP含量显著(P<0.05)低于其他各组，SS含量则显著(P<0.05)高于其他各组.相比对照组小鼠，水豆豉可以提高血清MTL、MTL、Gas、ET、AchE、SP、VIP水平和降低SS水平，且GVFS使MTL、MTL、Gas、ET、AchE、SP、VIP增加和使SS降低的能力强于CVFS和PVFS，能使这些指标最接近于正常状态.血清中的MTL、Gas、ET、SS、AchE、SP和VIP水平都与便秘有直接联系，提升MTL、MTL、Gas、ET、AchE、SP、VIP和降低的SS可以有效地缓解便秘[6].MTL和Gas是影响肠道的胃肠激素，可调节小肠的运动，可以加强肠胃蠕动[12].ET能稳定血管张力，便秘会影响ET在肠道中的含量，使肠道的张力出现异常[13].AchE对肠道有调节运动的作用，可以促进胃肠蠕动，减轻便秘[14].SP是重要的胃肠激素，能够直接加快结肠的收缩运动和刺激消化道平滑肌的收缩[15].VIP是一种能够松弛肠道，促进肠道蠕动的神经传递物质，与便秘也有直接关联[5].SS能够抑制胃肠激素的释放，降低平滑肌的收缩，减少胃排空率，这些都可能导致便秘.GVFS对这些血清中的便秘相关因子的正面作用可以有效地缓解便秘.

表3 实验小鼠血清的MTL、Gas、ET、SS、AchE、SP和VIP水平(每组小鼠数n=10)

不同字母表示对应组数据平均值存在显著性差异(P<0.05)，相同字母表示对应组数据平均值不存在显著性差异(P>0.05).

2.5 不同容器发酵水豆豉对小鼠小肠中c-Kit和SCF的mRNA表达的影响

由图3可知，相对于对照组小鼠的小肠组织，GVFS、PVFS和CVFS可以显著上调便秘小鼠小肠中的c-Kit和SCF mRNA的表达(P<0.05)，且GVFS上调的幅度最大，可使上调后的c-Kit和SCF表达分别达到对照组小鼠的1.88和7.01倍.Cajal间质细胞(ICC)是一种在肠神经系统和平滑肌之间起重要作用的细胞，ICC可以调节平滑肌细胞中的肠神经信号，临床研究显示便秘状态下肌体中的ICC水平下降，而c-Kit是ICC的特异性标志物，可以作为观察ICC水平的重要标准[16].ICC只有在一定浓度的SCF下才能存活，阻断c-Kit与SCF结合可导致ICC数目减少，SCF浓度降低会导致c-Kit的浓度下降，所以高水平的SCF表达对ICC的存活具有关键作用[17].GVFS可以有效地上调c-Kit和SCF表达，从而可能通过提高体内ICC的水平以达到缓解便秘的作用.

图3 不同容器发酵水豆豉灌胃小鼠小肠中c-Kit和SCF表达水平Fig.3 c-Kit and SCF expression in small intestine tissue of different vessels fermented Shuidouchi intragastrical mice

2.6 不同容器发酵水豆豉对小鼠小肠中TRPV1、GDNF和NOS的mRNA表达的影响

由图4可知，对照组小鼠小肠组织中TRPV1、NOS的mRNA表达高于其他组小鼠，但GDNF低于其他组.水豆豉喂养使各组小鼠小肠中的TRPV1、NOS表达低于对照组，而GDNF显著高于对照组(P<0.05)，使这些表达的强度更为接近正常组小鼠.同时，不同容器发酵的水豆豉对便秘小鼠小肠中的TRPV1、GDNF和NOS表达的影响也具有显著差异(P<0.05)，GVFS组小鼠小肠的TRPV1、NOS表达低于PVFS和CVFS组小鼠，GDNF高于PVFS和CVFS.TRPV1与吸收和排便有密切关系，激活TRPV1可以引发神经递质的释放，导致小肠运动障碍.同时，TRPV1表达增加是肠损伤的重要表现，由于肠道损伤引起肠运动紊乱，便秘状态下小肠中的TRPV1表达更为强烈[18].GDNF能够控制神经细胞的生长发育，并保护和修复受损的神经纤维，有助于修复受损的肠道，防止便秘[16].内源性NO广泛存在于胃肠道，而NOS是NO产生的关键酶，NO的大量产生可引起结肠动力障碍，通过控制NOS的表达可以有效地降低NO的含量，从而缓解便秘[19].因此，有效地降低小肠中TRPV1、NOS表达和增强GDNF表达将是控制和缓解便秘的重要手段，而GVFS比其他容器发酵的水豆豉具有更好的上调GDNF和下调TRPV1、NOS表达的能力，从而起到很好的便秘预防和抑制作用.

图4 不同容器发酵水豆豉灌胃小鼠小肠中TRPV1、GDNF和NOS表达水平Fig.4 TRPV1,GDNF and NOS expression in small intestine tissue of different vessels fermented Shuidouchi intragastrical mice

2.7 不同容器发酵水豆豉中异黄酮的含量(以染料木素计)

对照染料木素标准曲线计算出CVFS、PVFS和GVFS中大豆异黄酮的含量，可以观察到GVFS中大豆异黄酮的含量最高，PVFS的大豆异黄酮含量也高于PVFS(表4).大豆异黄酮具有抗氧化、扩张血管[20]和促进小肠发育、肠绒毛生长的作用[20]，有利于肠道健康，缓解便秘.由此可见，GVFS中大豆异黄酮含量高于CVFS和PVFS，有可能是GVFS便秘抑制作用强于CVFS和PVFS的原因.

表4 不同容器发酵的水豆豉中大豆异黄酮的含量(以染料木素计)

不同字母表示对应组数据平均值存在显著性差异(P<0.05).

3 结论

本研究对不同容器发酵水豆豉的便秘预防效果进行了初步研究，通过动物实验观察到水豆豉提取物能够有效地缓解便秘造成的体重丧失，可以有效地加快活性炭水在肠道的通过速度，提高活性炭在小肠中的推进率和减少小鼠排出首粒黑便的时间.通过对血清中相关因子的实验也证明，水豆豉可以通过提高血清中MTL、Gas、ET、AchE、SP、VIP的水平和减少SS水平来达到缓解便秘的目的.进一步通过RT-PCR实验分析小鼠小肠中的基因表达，检测到水豆豉提取物可以上调c-Kit、SCF、GDNF的mRNA表达和下调TRPV1、NOS表达，从而从多个方面抑制便秘的产生.最主要的是虽然不同容器发酵的水豆豉都体现出了抑制便秘的效果，但是相互之间存在显著差异，玻璃容器发酵的水豆豉具有比陶瓷和塑料容器发酵水豆豉更好的效果.同时，玻璃容器发酵的水豆豉具有比其他容器发酵水豆豉更好便秘抑制作用的机制有可能来源于玻璃容器发酵的水豆豉含有比其他容器发酵水豆豉更多的大豆异黄酮.由此可以得出结论，玻璃容器能够利于水豆豉的发酵，生产具有预防便秘的功能性水豆豉产品.

[1] 赵欣.PBL教学法在提高水豆豉感官评价水平上的应用[J].中国调味品，2014,39(4)：24-27.DOI:10.3969/j.issn.1000-9973.2014.04.007.

ZHAO X.Application of PBL pedagogics in raising the levels of sensory evaluation of Natto[J].China Condiment, 2014, 39(4):24-27.DOI:10.3969/j.issn.1000-9973.2014.04.007.

[2] 赵欣，李贵节.发酵时间和浸泡水量对水豆豉理化特性和体外抗癌效果的影响[J].食品工业科技，2013,34(23)：344-348.

ZHAO X, LI G J.Fermentation period and soaked water volume influences on physicochemical properties and in vitro anticancer effect of Shuidouchi[J].Science and Technology of Food Industry, 2013,34(23):344-348.

[3] CHUNG S K,LEE K S,CHO S H.Effect of fermentation vessel on quality of Anchovy soy sauce[J].Korean Journal of Food Preservation,2004,11(2):233-239.

[4] YOO S M,KIM J S,SHIN D H.Quality changes of traditional Doenjang fermented in different vessels[J].Journal of the Korean Society of Agricultural Chemistry and Biotechnology,2001,44(4):230-234.

[5] 骞宇，赵欣.抗消化淀粉对昆明小鼠的便秘预防效果[J].食品科学，2014,35(15)：243-246.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201415049.

QIAN Y, ZHAO X.Preventive effect of type 3 resistant starch (RS3) on constipation in Kunming mice[J].Food Science, 2014, 35(15):243-246.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201415049.

[6] 赵欣，骞宇，李贵节.发酵时间对水豆豉胃损伤预防作用的影响[J].中国粮油学报，2014,29(5)：14-17.

ZHAO X, QIAN Y, LI G J.Influence of fermentation time on gastric injury preventive effects of Shuidouchi[J].Journal of the Chinese Cereals and Oils Association, 2014,29(5):14-17.

[7] 赵欣，郑妍菲.水豆豉和清麴酱品质特性和抗癌效果比较[J].重庆工商大学学报(自然科学版)，2008,25(6)：634-637.

ZHAO X, ZHENG Y F.Comparison of properties and anticancer effects of Shuidouchi and Chungkukjang[J].Journal of Chongqing Technology and Business University(Natural Science Edition), 2008,25(6):634-637.

[8] 赵欣，王强.不同后发酵时间的水豆豉理化特性比较研究[J].食品工业科技，2014,35(11)：346-249，354.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2014.11.068.

ZHAO X, WANG Q.Study on comparisons of different ripening fermentation periods fermented Shuidouchi in their physicochemical properties[J].Science and Technology of Food Industry, 2014,35(11):346-249，354.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2014.11.068.

[9] 赵欣，王睿，庞谅，等.苦丁茶黄酮通过caspases活化诱导人HSC-3口腔癌细胞凋亡的效果[J].现代食品科技，2015,31(4)：1-7.DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.4.001.

ZHAO X, WANG R, PANG L, et al.The apoptosis-inducing effects of Kuding tea flavonoids on human oral cancer HSC-3 cells through caspase activation[J].Modern Food Science and Technology, 2015,31(4):1-7.DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.4.001.

[10] 李贵节，徐廷祥，张腾辉，等.发酵方竹笋对蒙脱石散诱导便秘的预防效果研究[J].西南师范大学学报(自然科学版)，2015,40(4)：36-41.DOI:10.13718/j.cnki.xsxb.2015.04.008.

LI G J, XU Y X, ZHANG T H, et al.On preventive effects of fermented Chimonbambusa quadrangularis shoot on montmorillonite power induced constipation[J].Journal of Southwest China Normal University (Natural Science Edition), 2015,40(4):36-41.DOI:10.13718/j.cnki.xsxb.2015.04.008.

[11] 易清云，伍晓旭，谭亚，等.巫山神茶水提物对昆明小鼠小肠蠕动的影响[J].仲恺农业工程学院学报，2014,27(3)：57-59.DOI:10.3969/j.issn.1674-5663.2014.03.012.

YI Q Y, WU X X, TAN Y, et al.Influence of Wushan Shencha aqueous extract on small intestine peristalsis in Kunming mice[J].Journal of Zhongkai University of Agriculture and Engineering, 2014,27(3):57-59.DOI:10.3969/j.issn.1674-5663.2014.03.012.

[12] 曾曦，焦俊，张兰花.正常结肠运动与血中胃泌素、生长抑素含量的初步研究[J].贵州医药，2004,28(9)：774-779.DOI:10.3969/j.issn.1000-744X.2004.09.002.

ZENG X, JIAO J, ZHANG L H.A Preliminary study on colon transit of the normal adults and gastin and somatostatin in plasma[J].Guizhou Medical Journal, 2004,28(9):774-779.DOI:10.3969/j.issn.1000-744X.2004.09.002.

[13] 李林，胡道松，王红兵,等.豚鼠和大鼠小肠内AchE和VIP阳性神经的分布关系研究:酶组织化学与免疫组织化学结合法观察[J].同济医科大学学报，1999,28(5)：389-393.DOI:10.3870/j.issn.1672-0741.1999.05.007.

LI L, HU D S, WANG H B, et al.A Comparitive study on the distribution of AChE-positive and VIP-immunoreactive nerves in small intestine of guinea pig and rat:a combined histochemical and immunohistochemical observation[J].ACTA Universitatis Medictnae Tangji, 1999,28(5):389-393.DOI:10.3870/j.issn.1672-0741.1999.05.007.

[14] 桂先勇，潘国宗，柯美云，等.胃肠肽在应激所致结肠动力紊乱中的作用[J].中华内科杂志，1997,77(1)：31-34.

GUI X Y, PAN G Z, HE M Y, et al.Potential role of gut peptides in stress- induced colonic motor disorder[J].National Medical Journal of China, 1997,77(1):31-34.

[15] 张洪泉，许正新，周成华，等.复方大黄合剂对小鼠胃肠蠕动的影响及相关机制[J].安徽医药，2003,7(6)：428-429.DOI:10.3969/j.issn.1009-6469.2003.06.009.

ZHANG H Q, XU Z X, ZHOU C H, et al.Effect and relevant mechanism of compound rhubarb mixture on gastrointestinal peristalsis of mice[J].Anhui Medical and Pharmaceutical Journal, 2003,7(6):428-429.DOI:10.3969/j.issn.1009-6469.2003.06.009.

[16] SUO H Y,ZHAO X,QIAN Y,et al.Therapeutic effect of activated carbon-induced constipation mice with Lactobacillus fermentum Suo on treatment[J].International Journal of Molecular Sciences,2014,15(12):21875-21895.DOI:10.3390/ijms151221875.

[17] BRADING A F,MCCLOSKEY K D.Mechanisms of disease:Specialized interstitial cells of the urinary tract-An assessment of current knowledge[J].Nature Clinical Practice Urology,2005,2(11):546-554.DOI:10.1038/ncpuro0340.

[18] GEPPETTI P,TREVISANI M.Activation and sensitisation of the vanilloid receptor:Role in gastrointestinal inflammation and function[J].British Journal of Pharmacology,2004,141(8):1313-1320.DOI:10.1038/sj.bjp.0705768.

[19] TOMITA R,IGARASHI S,FUJISAKI S,et al.The effects of neurotensin in the colon of patients with slow transit constipation[J].Hepatogastroenterology,2007,54(78):1662-1666.

[20] 刘春龙，李忠秋，孙海霞，等.大豆异黄酮的生理作用及其在医学方面的研究进展[J].大豆科学，2008,27(4)：693-696.

LIU C L, LI Z Q, SUN H X, et al.Research progress and physiological function of soybean isoflavone on medicine[J].Soybean Science, 2008, 27(4):693-696.

[21] 陈功义，郝振芳，肖传斌.大豆异黄酮对固始鸡小肠形态结构的影响[J].动物营养学报，2014,26(11)：3426-3432.DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2014.11.032.

CHEN G Y, HAO Z F, XIAO C B.Effects of soybean isoflavone on morphological structure of small intestine of Gushi chickens[J].Chinese Journal of Animal Nutrition, 2014,26(11):3426-3432.DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2014.11.032.

(责任编辑：赵藏赏)

Preventive effects and mechanisms of different vessels fermented Shuidouchi on constipation

FENG Xia1,2,3,4,ZHAO Xin1,2,3,4

(1.Chongqing Collaborative Innovation Center for Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China; 2.Chongqing Engineering Research Center of Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China; 3.Chongqing Engineering Laboratory for Research and Development of Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China; 4.Department of Biological and Chemical Engineering,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China )

The preventive effects and mechanisms of different vessels fermented Shuidouchi ethanol extract on activated carbon induced constipation were researched.After the mice being treated with different vessels fermented Shuidouchi by lavage,it was found that the body weight of control group (activated carbon induced constipation) mice lost weight the most,the gastrointestinal transit rate was lowest,and the first black stool defecation time was longest.The glass vessel fermented Shuidouchi (GVFS) extract could inhibit the mice body weight lost,increase the gastrointestinal transit rate and decrease the first black stool defecation time compared to the control group.Meanwhile,GVFS could raise the mice serum MTL,Gas,ET,AchE,SP,VIP levels and reduce SS level compared to the control group,and these changes of serum levels were significantly stronger than ceramic vessel fermented Shuidouchi (CVFS) and plastic vessel fermented Shuidouchi (PVFS).By the RT-PCR experiment,the results showed that the c-Kit,SCF,GDNF mRNA expressions of GVFS group mice were higher than those of PVFS,CVFS group mice and control group mice,and TRPV1,NOS expressions of GVFS group mice were only higher than the normal group.From these results,Shuidouchi has favorable constipation preventive effects,and the glass vessel fermentation could make the Shuidouchi have better effects,and the main reason might be that GVFS contained high content of soybean isoflavone.

Shuidouchi; vessel; constipation; activated carbon; mice

10.3969/j.issn.1000-1565.2016.06.012

2016-05-01

重庆市工程技术研究中心建设项目(cstc2015yfpt_gcjsyjzx0027)；重庆高校创新团队建设计划项目(CXTDX201601040)

冯霞 (1976—)，女，江西宜春人，重庆第二师范学院副教授，主要从事食品营养和功能性食品的研究.E-mail：fengxiacqec@126.com

赵欣 (1981—)，男，重庆人，蒙古族，重庆第二师范学院教授，博士，主要从事食品营养和功能性食品的研究.E-mail：zhaoxin@cque.edu.cn

TS201.4

A

1000-1565(2016)06-0641-09