洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病的抑菌活性试验

祁高展，高丹丹

（西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730030）

洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病的抑菌活性试验

祁高展，高丹丹*

（西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730030）

以新鲜洋葱鳞茎为原料，采用水匀浆法制备粗提物，通过体外抑菌实验研究其对苹果轮纹病的抑菌作用。结果表明，不同质量浓度洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病菌丝生长和孢子萌发均具有抑制活性，浓度越高，抑制作用越强；抑制孢子萌发和菌丝生长的最低有效质量浓度为3.125 mg·mL-1，当质量浓度达到50 g· mL-1时，其对孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别达到99.0%和97.5%。

洋葱鳞茎；粗提物；苹果轮纹病；抑菌作用

苹果轮纹病是苹果重要病害之一，大面积发生时，果实烂果率达到30%～50%［1］。目前，控制苹果轮纹病主要采用化学药剂处理，但是化学药剂处理会造成苹果中药品残留超标，对人体产生危害，不符合无公害产品生产要求［2-12］。因此，就需要一种简单、安全的方法来防治苹果轮纹病。

1 材料与方法

1.1 材料

供试洋葱（Allium sativum L.）为市售新鲜白皮洋葱，苹果轮纹病病原物（Physalospora piricola Nose）由西北民族大学生命科学与工程学院提供，苹果为天水产白娃娃品种，从当地农贸市场购买。

使用的仪器设备有SW-CJ-1FDSW-CJ-2FD型无菌操作台（苏州江东精密仪器有限公司）；YX-280B+型手提式高压灭菌锅（北京维欣仪奥科技有限公司）；YP1201N型电子天平（上海精密仪器有限公司）；HY-4型摇床（广州市科讯实验器材有限公司）；HV-1000Z型台式硬度计（上海联尔实验设备有限公司）；MZB-85手持折光仪（上海精密科学仪器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 不同质量浓度洋葱粗提物制备

将新鲜洋葱去皮，准确称量20.0 g，放入研钵研磨，边研磨边加入200 m L无菌水，滤纸过滤，得滤清液，配制成质量浓度为100 mg·m L-1的母液，然后将母液稀释成0、0.391、0.781、1.560、3.130、6.250、12.500和25.000 mg·m L-1的梯度溶液，剩余母液置于4℃冰箱内储藏备用。此过程需在无菌条件下进行操作。

1.2.2 抑菌圈直径测定

用打孔器打取孔径为8 mm的滤纸片，灭菌，浸泡在配制好的不同质量浓度（0～25.000 mg· m L-1）的粗提物溶液中。浸泡60 min后将滤纸片取出沥干，置于涂布好病菌的PDA培养基中央，25℃避光培养，3 d后量取抑菌圈直径。每处理2个滤纸片，重复3次。

1.2.3 菌丝生长抑制活性测定

含粗提物培养基的制备。将PDA培养基高压蒸汽灭菌，将配制好的（0～25.0 mg·m L-1）粗提物溶液与相同体积的培养基混合均匀，配制成含粗提物0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25.0和50.0 mg·m L-1的培养基，倒于平板上备用。

平板菌落制备。将病原菌活化，加无菌水，配成浓度为104～105个·m L-1的菌悬液，用5 m L移液管吸取菌悬液于PDA平板上，25℃避光培养，待菌落布满平板后使用。

抑菌活性测定。用直径8 mm打孔器在菌落生长良好的平板上打取圆形菌片，放置在含不同质量浓度粗提物的PDA培养基中央，25℃避光培养，每皿放置1个菌片，重复3次，3 d后量取菌落扩展直径，并计算菌丝生长抑制率。

菌丝生长抑制率/%=（对照皿菌落直径-处理皿菌落直径）/对照皿菌落直径×100。

1.2.4 孢子萌发抑制活性测定

将病原菌培养产生孢子，配成400倍物镜下每个视野20个孢子的菌悬液。用移液枪吸取60μL菌悬液，分别与同体积不同质量浓度的粗提物混合均匀。将载玻片放入培养皿中，皿底铺有滤纸，将打好的孔径为15 mm的PDA培养基置于载玻片上，每皿放置2片。用移液枪吸取30μL混合液于培养基上，25℃避光培养24 h后，400倍物镜下镜检病原菌孢子萌发情况，计算病菌孢子萌发率和萌发抑制率。

孢子萌发率/%=（孢子萌发数/总孢子数）×100；

孢子萌发抑制率/%=（对照孢子萌发数-处理孢子萌发数）/对照孢子萌发数×100。

用DPS和Excel软件对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 对苹果轮纹病菌的抑菌活性

由表1可以看出，低质量浓度洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病抑制效果不明显，随着粗提物质量浓度提高，抑菌圈直径增大，两者之间呈正相关关系；当质量浓度大于3.125 mg·m L-1时，各处理与对照间的差异达到极显著水平；但质量浓度为3.125和6.25 mg·m L-1的2个处理间及3.125和1.562 5 mg·m L-1的2个处理间的差异不显著。

表1 不同质量浓度洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病的抑菌效果

2.2 对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制活性

从表2可以看出，洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病菌丝生长具有抑制活性，并且随着粗提物质量浓度的增加，抑制作用逐渐增强。质量浓度为6.25 mg·m L-1的处理对菌丝生长的抑制率达到了51.6%，且处理与对照间的差异达到极显著水平；质量浓度分别为12.5、25和50 mg·m L-1的处理对菌丝生长的抑制率分别达到了70.7%、87.6%和97.5%。但25和50 mg·m L-12个处理之间的差异不显著。

表2 不同质量浓度洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病菌丝生长的抑制活性

2.3 对苹果轮纹病孢子萌发的抑制活性

由表3可以看出，随着洋葱鳞茎粗提物质量浓度的提高，其对苹果轮纹病菌孢子萌发的抑制活性逐渐增强。当质量浓度大于3.125 mg·m L-1时，各处理的孢子萌发抑制率分别达到了38.0%、74.5%、96.6%、98.1%和99.0%，且各处理的孢子萌发率与对照间的差异均达到了极显著水平，但1.562 5和3.125 mg·m L-12个处理间以及12.5、25和50 mg·m L-13个处理间的差异不显著。

表3 不同质量浓度洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病孢子萌发的抑制效应

3 小结与讨论

不同质量浓度的洋葱鳞茎粗提物对病原物的菌丝生长和孢子萌发均具有抑菌活性，抑菌活性与质量浓度呈正相关关系，抑菌实验筛选出的最低有效抑菌浓度为3.125 mg·mL-1；当浓度为50 mg· m L-1时，其对病原物孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别达到99.0%和97.5%。

利用天然植物活性物质对真菌病害的拮抗性是果蔬采后病害无害化防治的一个重要研究方向，符合绿色无公害农产品生产的理念，在这方面，相关科研人员做了大量的研究工作，但目前尚没有成熟可靠的技术可用于生产实际，因此相关工作还需要进一步的深入开展。洋葱含有很多活性物质，其对很多真菌具有拮抗作用，且来源广泛，价格低廉，本研究为洋葱鳞茎粗提物用于苹果轮纹病无害化防治技术的开发做一些基础性的工作。

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（责任编辑：张才德）

S436

：A

：0528-9017（2016）12-2065-02

文献著录格式：祁高展，高丹丹.洋葱鳞茎粗提物对苹果轮纹病的抑菌活性试验［J］.浙江农业科学，2016，57（12）：2065-2067.

10.16178/j.issn.0528-9017.20161245

2016-09-18

祁高展（1981—），男，河南商丘人，讲师，硕士，研究方向为农产品贮藏和加工，E-mail：270995651@qq.com。

高丹丹，E-mail：109458906@qq.com。