大马勃及大口静灰球的抗炎镇痛作用比较研究*

相聪坤，关胜江，马娟娟

（河北省中医院，石家庄　050011）

·中药研究·

大马勃及大口静灰球的抗炎镇痛作用比较研究*

相聪坤，关胜江，马娟娟

（河北省中医院，石家庄050011）

［目的］比较大马勃及大口静灰球的抗炎镇痛作用，为区分马勃真伪的必要性提供依据。［方法］分别采用二甲苯致小鼠右耳肿胀、蛋清致大鼠足肿胀和大鼠棉球肉芽肿实验观察大马勃及大口静灰球的抗炎作用。采用醋酸扭体法、酒石酸锑钾扭体法和热板法观察药物镇痛作用。［结果］大马勃的抗炎作用明显高于混淆品大口静灰球，大口静灰球没有明显的镇痛作用。［结论］大马勃与其混淆品大口静灰球在抗炎、镇痛作用方面都存在一定的差异。

大马勃；混淆品；抗炎；镇痛

马勃，最早载于《名医别录》［1］，味辛性平，有清肺利咽，止血等功效，用于风热郁肺、咽痛、咳嗽、音哑；外治鼻衄，创伤出血。现代药理研究表明，马勃在抑菌［2］、止血［3］、杀虫［4］、抗肿瘤［5］等方面具有明显作用，现代研究还表明马勃具有抗炎镇痛活性［6］。据《中华人民共和国药典》，马勃为灰包科真菌脱皮马勃 Lasiosphaera fenzlii Reich、大马勃Calvatia gigantean（Batsch ex Pers.）Lloyd或紫色马勃Calvatia lilacina（Mont.et Berk）Lloyd的干燥子实体［7］。在中医临床多年的应用实践中，马勃的品种一直较为混乱，灰包科多种大型、小型子实体均作为马勃使用。其中最常见、应用最多的是灰包科真菌大口静灰球Bovistella sinensis Lloyd。在1987年版《四川省中药材标准》中，把大口静灰球收入马勃项下，而2010年版《四川省中药材标准》中，为了与药典相区别，则把大口静灰球和长根静灰球另立新名：川西马勃Chuanximabo BOVISTELLA，从而收入四川的地方标准。时至今日，其他各地市场上仍然能发现大口静灰球混充马勃，供临床使用。两者之间是否有功效上的差别？笔者从抗炎、镇痛方面进行了比较。

1　材料

1.1动物SPF级SD大鼠96只，雄性，体质量（180± 220）g；SPF级昆明小鼠192只，雄性，体质量（18± 22）g，由河北医科大学实验动物中心提供。

1.2受试药物实验用的大马勃（购自安国市药兴药材有限公司），为灰包科真菌大马勃（Calvatia gigantea Lloyd）的干燥子实体；大口静灰球（购自安国市药兴药材有限公司），为灰包科植物大口静灰球（Bovistella sinensis Lloyd）的干燥担子果。药材经河北省药检所段吉平主任中药师鉴定。

1.3大马勃水提液和大口静灰球水提液由河北省中医院煎药室制备：取大马勃粉末250 g，装入纱布口袋，加水750 mL，浸泡0.5 h后，砂锅煎煮0.5 h，滤出提取液；二次加水700 mL，提取0.5 h，滤出提取液；三次加水700 mL，提取0.5 h，滤出提取液。合并3次大马勃提取液，再次过滤，加热浓缩，量瓶定容至250mL，成1kg/L的水溶液，真空包装为10g/袋，共25袋，冰箱冷藏备用。用同样的方法制备大口静灰球水提液。

2　方法

2.1大马勃及大口静灰球的抗炎作用比较

2.1.1二甲苯致小鼠右耳肿胀反应将48只小鼠随机分为3组，每组12只，即：模型对照组、阳性药组、大马勃水煎剂组、大口静灰球水煎剂组。大马勃和大口静灰球水煎剂组小鼠分别灌胃给予大马勃及大口静灰球水煎剂3.6 g/kg（含生药，相当于临床用量的18倍），阳性药组小鼠给予地塞米松片0.001 2 g/kg，模型对照组灌胃给予相应量的生理盐水，每日1次，连续7 d。第7天末次灌胃给药40 min后，在每只小鼠右耳涂二甲苯0.02 mL，左耳涂生理盐水。1 h后处死小鼠，剪下耳片，用8 mm打孔器取左右同一部位耳片，称质量。两耳重量的差值即为耳肿度，以mg（耳肿度）/g体质量表示。

2.1.2蛋清致大鼠足肿胀反应大鼠分组给药同

2.1.1，第7天末次灌胃给药40 min后，分别在大鼠后肢足跖皮下注射蛋清每只0.1 mL致炎。40 min后测量大鼠足跖肿胀程度。两足厚度的差值即为足肿度，分别计算各组大鼠的足肿胀度。

*基金项目：河北省科技计划项目（12277794）。

作者简介：相聪坤（1973-），女，副主任中药师，主要从事中药学方面的研究工作。

2.1.3大鼠棉球肉芽肿实验大鼠分组给药同2.1.1，各组大鼠均以3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉，剪去腹部被毛，无菌条件下剪开下腹部正中皮肤，切口长1cm，向双侧腹股沟皮下植入10mg无菌干燥棉球，缝合切口。术后当日按10 mL/kg容积腹腔注射受试药物，每日1次，连续给药7 d。术后8 d，戊巴比妥钠麻醉大鼠，手术取出棉球，剔净周围脂肪组织，放烘箱中60℃烘干24 h，称干质量，该干质量减去棉球原质量即得肉芽肿干质量，以mg（肉芽肿）/100 g体质量表示。

2.2大马勃及大口静灰球的镇痛作用比较

2.2.1醋酸致小鼠扭体反应小鼠分组给药同2.1.1，阳性药组小鼠给予复方乙酰水杨酸片0.2 g/kg，第7天末次灌胃给药40 min后，各组小鼠均腹腔注射0.1 mL/10 g，1%冰醋酸，立即观察20 min内各组小鼠的扭体次数。

2.2.2酒石酸锑钾致小鼠扭体反应小鼠分组给药同2.2.1，第7天末次灌胃给药40 min后，各组小鼠均腹腔注射0.15 mL/10 g，0.05%酒石酸锑钾，立即观察20 min内各组小鼠的扭体次数。

2.2.3热板法致痛实验小鼠分组给药同2.2.1，第7天末次灌胃给药40 min后，将小鼠置于热板上（55.0±0.5）℃，密切观察小鼠反应。秒表记录从置于热板上到舔后足的时间，取其为该鼠的痛阈值。如小鼠在60 s内仍无产生疼痛反应，应立即取出不再刺激，按60 s计算。

2.3统计方法采用SPSS 18.0统计软件进行统计学处理，计量资料用均值±标准差（±s）表示，计量资料组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较若方差齐采用LSD法，若方差不齐采用Dunnett's T3法以，P＜0.05为差异有统计学意义。

3　结果

3.1大马勃及大口静灰球对小鼠右耳肿胀的影响见表1。由表1可见，与模型组相比，大马勃组和伪品组均能明显降低二甲苯所致的小鼠右耳肿胀程度，具有明显的抗炎作用，差异有统计学意义（P＜0.01）。但是，与大马勃组相比较，伪品大口静灰球的抗炎作用明显降低（P＜0.05）。

3.2大马勃及大口静灰球对大鼠足肿胀的影响见表2。表2显示的结果与表1相同，大马勃组和伪品组均能明显降低蛋清所致的大鼠足肿胀程度，具有明显的抗炎作用，与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。而与大马勃组相比较，伪品大口静灰球的抗炎作用显著降低（P＜0.01）。

表1　大马勃及其大口静灰球对小鼠右耳肿胀的影响（±s）Tab.1　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice right ear swelling model induced by dimethybenzene（±s）

表1　大马勃及其大口静灰球对小鼠右耳肿胀的影响（±s）Tab.1　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice right ear swelling model induced by dimethybenzene（±s）

注：与模型组比较，**P＜0.01；与大马勃组比较，#P＜0.05。

组别　动物数　耳肿度［mg/（g·wt）］模型组　12　0.48±0.10地塞米松组　12　0.16±0.10**大马勃组　12　0.19±0.10**大口静灰球组　12　0.30±0.10**#

表2　大马勃及其大口静灰球对大鼠足肿胀的影响（±s）Tab.2　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on rat paw swelling model induced by albumen（±s）

表2　大马勃及其大口静灰球对大鼠足肿胀的影响（±s）Tab.2　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on rat paw swelling model induced by albumen（±s）

注：与模型组比较，**P＜0.01；与大马勃组比较，##P＜0.01。

组别　动物数　足肿度模型组　12　0.65±0.076地塞米松组　12　0.30±0.069**大马勃组　12　0.39±0.033**大口静灰球组　12　0.52±0.080**##

3.3大马勃及大口静灰球对大鼠棉球肉芽肿的影响 见表3。由表3可见，与模型组相比，大马勃组和伪品组均能明显降低棉球肉芽肿胀程度，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05），具有明显的抗炎作用，而与大马勃组相比较，伪品提取液的抗炎作用明显降低（P＜0.01）。

表3　大马勃及其大口静灰球对大鼠棉球肉芽肿的影响（±s）Tab.3　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on the cotton ball granuloma of rats（±s）

表3　大马勃及其大口静灰球对大鼠棉球肉芽肿的影响（±s）Tab.3　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on the cotton ball granuloma of rats（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与大马勃组比较，##P＜0.01。

组别　动物数　耳肿度（mg/100 g·wt）模型组　12　49.51±2.70地塞米松组　12　20.74±2.45**大马勃组　12　22.40±2.45**大口静灰球组　12　45.72±3.90*##

3.4大马勃及大口静灰球对小鼠醋酸扭体反应的影响见表4。由表4可以看出，与模型组相比，大马勃组对醋酸致小鼠扭体反应有明显的镇痛作用，差异有统计学意义（P＜0.01）。然而伪品组大口静灰球提取液对小鼠扭体反应无明显的镇痛作用（P＞0.05）。

表4　大马勃及大口静灰球对小鼠醋酸扭体反应的影响（±s）Tab.4　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice acetic acid writhing model（±s）

表4　大马勃及大口静灰球对小鼠醋酸扭体反应的影响（±s）Tab.4　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice acetic acid writhing model（±s）

注：与模型组比较，**P＜0.01。

组别　动物数　扭体次数模型组　12　48.83±11.76阳性药组　12　25.00±8.44**大马勃组　12　30.92±9.97**大口静灰球组　12　41.00±9.95

3.5大马勃及大口静灰球对小鼠酒石酸锑钾扭体反应的影响见表5。表5显示的结果与表4相同，与模型组相比，大马勃组对酒石酸锑钾致小鼠扭体反应有明显的镇痛作用，差异有统计学意义（P＜0.01）。然而伪品组大口静灰球提取液对小鼠扭体反应无明显的镇痛作用（P＞0.05）。

表5　大马勃及其大口静灰球对小鼠酒石酸锑钾扭体反应的影响（±s）Tab.5　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice antimony potassium tartrate writhing model（±s）

表5　大马勃及其大口静灰球对小鼠酒石酸锑钾扭体反应的影响（±s）Tab.5　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice antimony potassium tartrate writhing model（±s）

注：与模型组比较，**P＜0.01。

组别　动物数　扭体次数模型组　12　51.58±10.44阳性药组　12　25.75±7.80**大马勃组　12　33.42±8.10**大口静灰球组　12　46.00±10.22

3.6大马勃及大口静灰球对小鼠热板反应的影响见表6。表6结果显示，与模型组相比，大马勃组对小鼠热板反应有明显的镇痛作用，差异有统计学意义（P＜0.05）。然而伪品组大口静灰球提取液对小鼠热板反应无明显的镇痛作用（P＞0.05）。

表6　大马勃及其大口静灰球对小鼠热板反应的影响（±s）Tab.6　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on hot plate model（±s）

表6　大马勃及其大口静灰球对小鼠热板反应的影响（±s）Tab.6　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on hot plate model（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别　动物数　痛阈值（s）模型组　12　24.92±5.92阳性药组　12　50.83±7.65**大马勃组　12　48.33±8.17*大口静灰球组　12　26.50±7.98

4　讨论

炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子发生的防御反应，是感染及其许多疾病的最基本病理过程。本研究采用多种炎症实验动物模型，比较大马勃及其大口静灰球的抗炎作用。研究结果表明，大马勃对二甲苯致耳肿胀以及蛋清致足肿胀急性炎症模型和棉球肉芽肿亚急性炎症模型都具有很好的抗炎作用。然而相比较之下，大口静灰球的抗炎作用较小（P＜0.05或P＜0.01）。在醋酸扭体实验和热板实验均表明大马勃具有明显的镇痛作用，然而大口静灰球无明显镇痛作用。

本研究通过比较大马勃及其混淆品大口静灰球的抗炎镇痛作用，结果发现混淆品大口静灰球的抗炎作用明显低于大马勃（马勃正品），而且大口静灰球没有明显的镇痛作用。说明正品马勃与混淆品大口静灰球在抗炎、镇痛作用方面都存在一定的差异，为临床提供了使用依据。

武翠玲等［8-9］将马勃用热水提取所得的粗品，经Sevag法脱白，DEAE-sepharose fast flow离子交换层析及sephacryl S-300HR凝胶过滤法得大马勃多糖（CGP-l）。气相色谱表明，单糖组成为:Gal，Glc，Man 等4种单糖，其中Gal，Gle，Man摩尔比为3.92∶11.28∶1.22。经溴代十六烷基三甲胺络合后，再通过DEAE-纤维素和SephadexG-75柱层析得马勃多糖精品，经进一步纯化依次得到多糖PS。据推测马勃产生抗炎镇痛药理作用的活性成分很有可能是多糖部分。马勃所含的化学成分比较复杂，马勃种属的复杂性更加剧了这种复杂性［10］。目前对其化学成分的相关研究表明，马勃中主要含有：甾体化合物、萜类化合物、以及多糖、氨基酸、脂肪酸、蛋白质、多肽等，还含有一些微量元素。马勃的抗炎镇痛作用的有效成分到底是什么，仍需要进一步研究。

［1］张庆康，丁永辉.10种马勃的氨基酸含量测定及聚类分析［J］.中成药，1996，18（8）:35-37.

［2］孙菊英，郭朝辉.十种马勃体外抑菌作用的实验研究［J］.中药材，1994，17（4）:37-381.

［3］陶文洲，吕竞竞，杨淑云，等.经纤维胃镜定位喷洒复方马勃液治疗上消化道出血的疗效观察［J］.中西医结合杂志，1987，36（1）: 12.

［4］魏艳，高锦明，郝双红，等.担子菌黄硬皮马勃杀虫活性研究［J］.西北植物学报，2005，25（2）:382-385.

［5］Ng TB，Lam YW，Wang H.Calcaelin，a new protein with translation inhibiting，antipro-Liferative and antimitogenic activities from the mosaic puffball mushroom Calvatia caelata［J］.Planta Med，2003，69 （3）:212-217.

［6］苏方华，潘日兴.马勃的抗炎镇痛实验研究［J］.齐鲁药事，2010，29（10）:586-588.

［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京:中国医药科技出版社，2015:50.

［8］武翠玲，邓永康，孟延发.大马勃水溶性多糖的结构研究［J］.天然产物研究与开发，2008，20（6）:1027-1030.

［9］Lam YW，Ng TB，Wang HX.Antiproliferative and antimitogenic activities in a peptide from puffball mushroom Calvatia caelata［J］. Biochemical and Biophysical Research Communications，2001，289 （3）:744-749.

［10］郭晶，江蔚新，范明松.马勃化学成分及药理作用研究进展［J］.现代医药卫生，2013，29（3）:386-389.

（本文编辑：马英，滕晓东）

Study on the comparison of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on anti-inflammatory and analgesia effects

XIANG Cong-kun，GUAN Sheng-jiang，MA Juan-juan
（Hebei Province Traditional Chinese Medicine Hospital，Shijiazhuang 050011，China）

［Objective］To compare the Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on anti-inflammatory and analgesic effects，and provide the basis for the necessity to distinguish the authenticity of Calvatia gigantea.［Methods］The anti-inflammatory effect was observed by mice right ear swelling model induced by dimethybenzene，rat paw swelling model induced by albumen，and the cotton ball granuloma of rat.The analgesic action was observed by mice acetic acid and antimony potassium tartrate writhing test，and hot plate test. ［Results］Anti-inflammatory effects of Calvatia gigantea was obviously higher than that of adulterant Bovistella sinensis lloyd.Bovistella sinensis lloyd has no obvious analgesic action.［Conclusion］Calvatia gigantea and adulterant Bovistella sinensis lloyd have some differences in the anti-inflammation and analgesic actions.

Calvatia gigantea；adulterant；anti-inflammatory；analgesic

R285.5

A

1672-1519（2016）07-0430-04

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.07.12

2016-04-25）