北疆地区规模化猪场猪瘟抗体水平检测与分析

刘　鸽　张培生　于会举　张　倩　刘功成　屈勇刚杨慧敏

北疆地区规模化猪场猪瘟抗体水平检测与分析

刘鸽张培生于会举张倩刘功成屈勇刚*杨慧敏

（石河子大学，新疆石河子 832003）

为了解2014年1月至2016年3月北疆地区猪瘟 （CSF）的免疫抗体水平，试验从克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯4个不同区域的16个规模化猪场采集血液样品共计890份，采用间接ELISA法检测其抗体水平，结果发现CSF的平均抗体阳性率为89.89%，达到国家规定水平 （70%）。16个规模化猪场猪瘟抗体阳性率达85%及以上者占81.25%，抗体检测达90%及以上者占56.25%，各猪场抗体水平差异极显著 （＜0.01）。试验发现4个不同区域猪场猪瘟平均抗体阳性率中：石河子区域阳性率最高，为97.33%；玛纳斯区域阳性率最低，为87.86%；但都在87%以上。4个不同区域猪场猪瘟抗体检测阳性个体平均OD630值中：沙湾区域的平均OD630值最大，为1.425；石河子区域的平均OD630值最小，为1.131。该试验结果表明北疆地域的上述4个不同区域CSF抗体水平较高，该结果在一定程度上可为北疆地区猪瘟防疫工作提供一定的参考。

CSFV；ELISA；抗体水平；阳性率

猪瘟（Classic Swine Fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classic Swine Fever Virus，CSFV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，具有流行广泛、发病率高、死亡率高、危害大的特点。国际兽医局（OIE）将之列为必须上报的动物疫病，我国也将之列为一类动物传染病。CSF是我国四大畜禽疫病之一，至今已流行80余年。20世纪90年代以后，一些原已宣布消灭猪瘟的欧洲国家（荷兰、比利时、英国、德国、意大利、西班牙等）又相继复发，我国一些地区的猪瘟发病率亦有上升趋势［1］。目前，该病主要在亚洲、非洲、南美洲和欧洲等44个国家流行［2］。

我国猪瘟流行形势复杂，没有明显规律性，是困扰我国养猪业健康发展的一大难题，防控任务十分艰巨［3］。针对我国目前猪瘟的流行现状及特点做好免疫监测，保持猪群处于较高的群体免疫水平，坚决淘汰CSFV隐性感染种猪，是规模化猪场有效防控猪瘟的重要手段［4］。为了解2014年1月至2016年3月北疆地区CSF的免疫抗体水平，本试验选择克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯4个不同区域的16个规模化猪场进行，在一定程度上可为北疆地区猪瘟防疫工作提供一定的参考。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1样品来源

2014年1月至2016年3月采自新疆北疆地区的克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯4个不同区域的16个规模化猪场不同类型猪（0～10日龄、11～20日龄、21～30日龄仔猪，后备母猪，经产母猪，种公猪），共采集血样890份。

1.1.2材料和仪器

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前生物制品有限责任公司，批号：20130101），自动酶标仪（美国Bio Tek仪器有限公司）、微量移液器（Eppendorf公司）、恒温培养箱（北京市光明医疗仪器厂）。

1.2试验方法

1.2.1采集样品

对已选定的猪群一次性从前腔静脉或耳静脉采集血液3～5 mL/头，室温静置30分钟左右，待血清析出后，每份吸取1 mL血清于灭菌的1.5 mL EP管中，逐管标记，以4 000转/分钟离心10分钟，可立即进行ELISA检测，亦可放-20℃保存备用。

1.2.2间接ELISA检测方法

按照试剂盒说明书的步骤测样品OD630值。在试验中，于猪瘟抗原包被微孔板加入经1∶40倍稀释的对照血清和待检血清，37℃温育30分钟后，抗原抗体结合，洗涤后加酶标二抗，与抗原抗体复合物温育结合，再次洗涤后加TMB底物，混匀室温避光显色10分钟，加终止液终止反应，在10分钟内，用酶标仪630波长测定各反应孔中的OD630值，据OD630值对抗体水平进行判定。

1.2.3结果判定

在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值≥0.6，阴性对照孔平均OD630值必须＜0.3。

样品OD630值≥0.35，判为阳性；样品OD630值＜0.35，判为阴性。

根据试剂盒说明书，按表1进行OD630值与抗体效价的转换。

1.2.4统计分析

用SPSS软件、Excel软件对试验数据进行统计分析，OD630值结果用平均值±标准差表示。

2试验结果

2.1不同地区不同猪场的猪瘟抗体阳性率及抗体水平

猪场A～E在克拉玛依区域，F～H在沙湾区域，I～L在石河子区域，M～P在玛纳斯区域。890份猪血清共检出抗体阳性血清800份，阳性率为89.89%，OD630值平均值为1.309、标准差为0.657，平均效价为1∶256。A～P16个猪场中只有2个猪场（J、K）的猪瘟抗体水平低于国家规定水平（70%）。这2个猪场猪瘟抗体阳性率分别为68.89%和62.50%。结果见表2。

4个不同区域猪场猪瘟平均抗体阳性率，石河子区域最高，为97.33%；玛纳斯区域最低，为87.86%；但4个区域猪场猪瘟平均抗体阳性率都在87%以上，结果见表3。

4个不同区域的16个规模化猪场的猪瘟抗体检测为阳性的，平均OD630值存在一定差异：平均OD630值＞1.200的猪场有11个，占68.75%；0.600≤平均OD630值≤1.200的猪场有5个，占31.25%；平均OD630值最大值为1.645，最小值为0.845；沙湾区域的平均OD630值最大，石河子区域的平均OD630值最小，但都大于1.100。结果见表2、表3。

2.2 16个规模化猪场猪群不同构成成分的猪瘟抗体水平

对16个规模化猪场猪瘟抗体水平进行分析，0～10日龄仔猪、11～20日龄仔猪、21～30日龄仔猪、后备母猪、经产母猪、种公猪的猪瘟抗体阳性率分别为87.50%、85.00%、81.25%、97.38%、85.34%、98.68%；发现三个不同阶段的仔猪，随日龄增大，猪瘟抗体阳性率有降低的趋势；猪群不同构成成分之间的猪瘟抗体水平存在一定差异，猪群中种公猪的抗体水平最高，其次为后备母猪，21～30日龄仔猪的抗体水平最低（81.25%），但远超过国家规定水平（70.00%）；猪群中各成分猪的猪瘟抗体阳性率均在81.00%以上，说明其具有较高的免疫水平。结果见表4。

表1　猪瘟抗体ELISA检测OD630值与猪瘟间接血凝试验 （HIA）效价的转换

表2　北疆地区4个不同区域的16个不同规模猪场猪瘟免疫抗体检测结果

表3　北疆4个不同区域猪场猪瘟抗体分析结果

3讨论

3.1北疆地区猪瘟抗体水平相对较高

试验结果表明，新疆北疆地区的克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯4个不同区域的16个规模化猪场中有14个猪场的猪瘟抗体阳性率在国家规定水平（70%）以上，只有2个猪场的猪瘟抗体阳性率低于70%，应分析产生这种结果的原因，并引起养猪企业和相关研究部门的高度重视。根据杜希珍等［5］研究报道，规模化猪场猪瘟疫情稳定需要猪瘟抗体合格率达到90%以上，北疆地区的16个规模化猪场中有9个猪场猪瘟抗体阳性率达90%以上，占56.25%，也就是说16个规模化猪场中超过半数的猪场达到此标准，并且其中有2个猪场的猪瘟抗体阳性率均为100%。此试验结果在一定程度上说明新疆北疆地区的猪场猪瘟抗体水平较高，但不可否认有少数猪场的猪瘟抗体水平偏低，应引起重视，并采取及时有效的措施改变这种现状，以求北疆乃至全疆生猪养殖事业获得更好更快发展，为国民提供健康放心猪肉。

表4　北疆4个不同区域的16个规模化猪场猪群不同构成成分的猪瘟抗体水平

3.2猪群不同构成成分猪瘟抗体水平存在一定差异

对0～10日龄仔猪、11～20日龄仔猪、21～30日龄仔猪、后备母猪、经产母猪和种公猪的猪瘟抗体水平检测发现，种公猪和后备母猪的猪瘟抗体阳性率均在97%以上，均属较高的免疫水平，而经产母猪的猪瘟免疫水平有待提高，三个不同阶段的仔猪的猪瘟抗体阳性率随日龄增大有下降趋势，其中仔猪出生20天后抗体水平有下降增快的趋势，这可能与母源抗体有一定的关系，提示在仔猪出生后应在适宜的时间及时做好免疫接种工作。曹剑等［6］用HIA法对仔猪母源抗体效价进行动态监测，结果显示，母源抗体在15～21日龄达到最高值，21日龄后逐渐降低，于35日龄达到抗体保护临界值，与本次研究结果基本相符。提醒畜牧兽医工作者要在仔猪出生后20天左右时及时有效地实施猪瘟免疫接种，并提供良好的饲养环境，在免疫接种的同时增强自身抵抗力，促进仔猪群更健康地生长，为猪群后续发展打下良好基础。

3.3猪瘟首免时间的确定

确定猪瘟首免时间非常重要，北疆地区猪瘟首免多数在出生后30天左右，二免在出生后60天左右，但也应根据猪群情况而定，有的猪场应提前进行猪瘟免疫接种，在出生后50天时进行猪瘟二免。调查中发现，也有猪场在仔猪出生后25天时进行首免，这与我们试验结果（仔猪出生20天后抗体水平有下降增快的趋势）相一致。

［1］殷震，刘景华.动物病毒学 ［M］.2版.北京：科学出版社，1997：652-664.

［2］Stark R，Romenapf T，Meyers G，et al.Genomic localization of hogcholera virus glycoproteins［J］.Virology，1990（1）：280-286.

［3］覃绍敏，谢彬，马玲，等.某规模化猪场猪瘟抗体水平及其野毒感染的检测与分析［J］.黑龙江畜牧兽医，2011（17）：92-94.

［4］李娇，沈志强，祖立闯，等.间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用［J］.动物医学进展，2012，33（6）：126-129.

［5］杜希珍，高丽娜，赵海山，等.规模化猪场母猪群猪瘟抗体血清学调查［J］.猪业科学，2009，26（6）：86-88.

［6］曹剑，张磊，李岩.规模化猪场仔猪猪瘟母源抗体效价动态检测［J］.新疆农垦科技，2012（2）：26-27.

S858.28

A

1673-4645（2016）07-0046-04

2016-05-05

新疆石河子市农业科技攻关项目（2013NY04）

刘鸽（1986-），山东淄博人，硕士研究生，主要从事动物传染病诊断与防治工作，E-mail：1539881644@qq.com

屈勇刚（1971-），男，陕西渭南人，副教授，主要从事动物传染病诊断与防治工作，E-mail：quyonggang@shzu.edu.cn