HPLC法测定抗菌消炎胶囊中槲皮素和山柰素的含量

陈　健

(重庆市涪陵食品药品检验所，重庆　408000)



HPLC法测定抗菌消炎胶囊中槲皮素和山柰素的含量

陈健

(重庆市涪陵食品药品检验所，重庆408000)

摘要：目的建立抗菌消炎胶囊中槲皮素和山柰素含量测定的高效液相色谱方法。方法色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(50∶50)；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：360 nm。结果槲皮素质量浓度在1.034～20.68 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.999 3)，加样回收率为97.14%，RSD值为0.84%(n=6)；山柰素质量浓度在2.061～41.22 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.999 1)，加样回收率为98.05%，RSD值为0.59%(n=6)。结论该方法定量准确可靠，操作简便，灵敏度高，可用于抗菌消炎胶囊的质量控制。

关键词：槲皮素；山柰素；抗菌消炎胶囊；高效液相色谱法

抗菌消炎胶囊是由金银花、大黄、大青叶、金钱草等7味中药制成，具有清热、泻火、解毒的功效。方中的金钱草是主药，有效成分为槲皮素和山柰素等。笔者参考文献[1-6]，采用高效液相色谱法对抗菌消炎胶囊中槲皮素和山柰素的含量进行测定，建立了该产品有效成分含量测定的方法。

1仪器与试药

1.1仪器Sartorius-ME215S电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；Agilent 1260高效液相色谱仪(安捷伦科技(中国)有限公司)。

1.2试药抗菌消炎胶囊，伊春五加参药业有限责任公司生产，批号分别为20140902，20150101和20150301；槲皮素和山柰素对照品，由中国食品药品检定研究院提供，批号为100081-200406和110861-200808，质量分数为96.5%和93.2%；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：安捷伦Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；检测波长：360 nm；流动相：甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(50∶50)，使用前经0.45 μm有机滤膜抽滤并脱气；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2溶液制备

2.2.1供试品溶液取样品2 g，精密称定，置于锥形瓶中，加盐酸3 mL，再加入体积分数为80%的甲醇40 mL，密塞，加热回流1 h，放冷，移至50 mL量瓶中，用体积分数为80%的甲醇定容，摇匀，过滤。取续滤液，即得。

2.2.2对照品溶液取槲皮素对照品及山柰素对照品适量，精密称定，加体积分数为80%的甲醇制成1 mL含槲皮素10 μg、山柰素20 μg的混合溶液，即得。

2.2.3阴性对照品溶液按照抗菌消炎胶囊制备工艺，制备缺少金钱草的阴性样品溶液，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

2.3.1专属性考察取2.2项下3种溶液，依照2.1项下色谱条件进行测定。结果样品与槲皮素对照品和山柰素对照品在相同时间内有色谱峰出现，而阴性对照品溶液在此处未出现色谱峰，表明该方法专属性良好。见图1。

2.3.2线性关系考察精密量取对照品溶液1，5，10，15和20 mL，加体积分数为80%的甲醇分别定容于100 mL量瓶中，按照2.1项下色谱条件HPLC法进行分析。以峰面积Y和质量浓度X绘制标准曲线，得回归方程：槲皮素Y=48.524X+8.023 4，r=0.999 3，质量浓度在1.034～20.68 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。山柰素Y=51.420X-19.361，r=0.999 1，质量浓度在2.061～41.22 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。

图1HPLC图

A.阴性对照； B.对照品； C.供试品；1.槲皮素；2.山柰素

Fig.1 HPLC chromatograms

A.negative sample；B.reference substances；C.sample；1.quercetin；2.kaempferol

2.3.3精密度实验取同一质量浓度对照品溶液，重复进样6次，计算槲皮素和山柰素峰面积的RSD值分别为0.52%和0.46%(n=6)。

2.3.4重复性实验取样品(批号为20140902)6份，每份2 g，按照2.2.3项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，测定含量，计算槲皮素和山柰素含量的RSD值分别为0.89%和0.82%(n=6)。

2.3.5稳定性实验取同一供试品溶液，室温放置，分别于配制后0，2，4，8，12和24 h进样测定，计算槲皮素和山柰素峰面积的RSD值分别为0.96%和0.84%(n=6)。

2.3.6加样回收实验取同一批样品(批号为2014 0902)6份，精密加入槲皮素对照品(质量浓度为0.103 4 mg·mL-1)和山柰素对照品(质量浓度为0.206 1 mg·mL-1)适量，按照供试品溶液制备方法进行制备，并依法测定，结果见表1。

表1回收实验结果

Tab.1 Results recovery tests

(n=6)

2.4样品测定依法测定3批样品，计算含量。结果显示，批号为20140902，20150101和20150301的抗菌消炎胶囊中槲皮素和山柰素的含量分别为0.247 2和0.303 1，0.250 8和0.311 7，0.247 5和0.320 3 mg·g-1。

3讨论

取槲皮素对照品溶液和山柰素对照品溶液，用岛津UV-2006型紫外分光光度计在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果在254和360 nm波长处有最大吸收；在360 nm处吸收更灵敏，参考《中国药典》2010年版，采用360 nm为检测波长[7]。

取槲皮素对照品溶液和山柰素对照品溶液，用二极管阵列检测器进行光谱扫描，同时样品也进行光谱扫描，在相应保留时间内扫描结果峰形一致，无杂质峰干扰。

考察水解时间，在0.5，1，2和5 h水解后测定槲皮素和山柰素的含量，在水解1 h后含量无明显增加，所以采用水解时间为1 h。

参考文献：

[1]谭忠谋，韦建乔，蒙露露.高效液相色谱法测定金钱草颗粒中槲皮素含量[J].中国药业，2012，21(9)：24-25.

[2]梁国华，梁晓琪.HPLC测定复方肝炎颗粒中槲皮素和山柰素的含量[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(24)：90-92.

[3]李洪斌，余翔，李洪刚.HPLC法测定尿毒清颗粒中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量 [J].西北药学杂志，2012，27(3)：221-222.

[4]卫星星，王转花.高效液相色谱法测定苦荞籽壳中芦丁和槲皮素的含量 [J].药物分析杂志，2007，27(12)：1909-1910.

[5]徐国防，郭娜，李俊明，等.HPLC法同时测定泌感颗粒中小檗碱和槲皮素的含量 [J].药物分析杂志，2008，28(3)：394-397.

[6]陈健.HPLC法测定含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量 [J].西北药学杂志，2015，30(3)：251-252，317.

[7]国家药典委员会.中国药典2010年版[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010:248.

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.017

中图分类号：R927.2

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2016)04-0383-03

(收稿日期：2015-10-14)

Determination of quercetin and kaempferol in Kangjunxiaoyan Capsules by HPLC

CHEN Jian

(Fuling Institute for Food and Drug Control，Chongqing 408000，China)

Abstract:Objective To establish an HPLC method for the content ditermination of quercetin and kaempferol in Kangjunxiaoyan Capsules.Methods Agilent Eclipse XDB-C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with methanol-4 mL·L-1phosphoric acid solution(50∶50) as the mobile phase；The column temperature was 30 ℃；The flow rate was 1.0 mL·min-1；The detection wavelength was 360 nm.Results The sample of quercetin in the range of 1.034-20.68 μg·mL-1showed a good linear relation-ship with the peak area(r=0.999 3)，The addition recovery rate was 97.14%，RSD was 0.84%(n=6)；The sample of kaempferol in the range of 2.061-41.22 μg·mL-1showed a good linear relationship with the peak area(r=0.999 1).The addition recovery rate was 98.05%，RSD was 0.59%(n=6).Conclusion The method is simple，rapid, accurate，and suitable for the determination of Kangjunxiaoyan Capsules.

Key words：quercetin；kaempferol；Kangjunxiaoyan Capsules;HPLC