一例猪日本乙型脑炎的诊断

林荣荣，丁 苗，曾荣荣，付玉蓉，关婷婷，李青竹

(吉林农业科技学院，吉林吉林132101)

一例猪日本乙型脑炎的诊断

林荣荣，丁 苗，曾荣荣，付玉蓉，关婷婷，李青竹*

(吉林农业科技学院，吉林吉林132101)

猪日本乙型脑炎是由乙型脑炎病毒 (Japanese encephalitis virus，JEV)感染引起，该病原体于1934 年在日本最早发现，故名日本乙型脑炎，简称乙脑。猪是乙脑病毒主要易感动物，带毒猪是本病的传染源，临床上以引起妊娠母猪发生流产，产死胎、木乃伊胎，公猪睾丸肿大为特征，少数猪有神经症状。现将1例猪日本乙型脑炎的PCR诊断报道如下，供参考。

1 临床症状

2015年2—3月，吉林某猪场养殖规模1 000头，养猪已5年，从2月起陆续有20余头妊娠母猪出现流产，偶有胎衣不下，无其它明显的临床症状。初步怀疑是细小病毒病、乙脑、蓝耳病，采集取病、死猪的肝、肠、膀胱、睾丸、腹股沟淋巴结及全血送本院动物检疫中心诊断。

2 实验室诊断

2.1 病毒基因组提取 研磨采集的组织病料，提取病毒基因组，操作步骤如下：(1) 10% SDS 25 μL 和20 mg/μL蛋白酶K 5 μL，55 ℃ 消化1.5～2 h。(2)加入酚200 μL，混匀，12 000 r/min 离心10 min ，取上清液。(3)加入氯仿100 μL、酚100 μL，12 000 r/min离心10 min，取上清液。(4)加入氯仿 200 μL，12 000 r/min 离心10 min，取上清液。(5)加入等体积的异丙醇和1/10体积的5 mol/L NaAC室温20～30 min，13 000 r/min 离心15 min ，倒掉上清液。(6)加入75%乙醇600 μL，7 000 r/min离心5 min ，倒掉上清液，室温放置晾干，TE (pH 8.0) 20 μL 溶解沉淀，-20 ℃ 保存。按照实验室常规方法提取RNA并进行反转录，将获得的cDNA于-20 ℃保存备用。

2.2 PCR检测 PCR的反应体系为25 μL，1 μL P1/P2(10 pmol/μL)(P1:5’CAATCATGGCAAACGACAAC3’；P2:5’GCTTCCTCGTTGTCGCTCT3’)，3 μL dNTP(2.5 mmol/μL)、10×buffer 2.5 μL、Taq酶0.25 μL、DEPC灭菌水 16.25 μL，反应条件为25个cycle，预变性 94 ℃ 5 min 后，进入循环94 ℃ 45 s，52～57 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，72 ℃延伸 7 min。1%琼脂糖凝胶电泳检测扩增条带。

3 检测结果

将PCR扩增产物用1 % 琼脂糖凝胶电泳检测，在750 bp位置发现目的带，见图1，说明该猪是由乙脑病毒引发的疾病。

M:DL-2 000 Marker；1：PPV；2：PRRS；3：JEV；4：阴性对照图1 PCR检测结果

4 讨论

4.1 本病是自然疫源性疫病，许多动物和人均可感染，多为隐性感染，病猪是主要的传染源。流行特点是感染率高，发病率较低，病死率也低。

4.2 本病具有一定的季节性，多发于春末夏初，主要是通过蚊虫的叮咬传播，蚊虫既是传播媒介也是病毒的贮存宿主

5 防治措施

本病的治疗无特殊有效方法。猪发病后应立即隔离，采取镇静安神，防止继发感染等措施，必要时可补液治疗，同时应做好护理工作。预防本病应做好以下几方面工作。

5.1 做好杀灭蚊蝇、除蜱工作，可取得较好的预防效果，如清理蚊虫孳生地，及时消灭越冬蚊虫。疏通沟渠，排除积水，并于黄昏时往圈舍内喷洒高效低毒杀虫药物。

5.2 因地而异，制定切实可行的免疫方案，给母猪群定期免疫接种可有效预防和控制该病。免疫注射通常是在蚊虫出现之前，采用日本乙型脑炎弱毒疫苗，种猪群常在每年的2—4月进行，后备母猪配种前再免疫接种1次，以后则按常规每年注射1次。

5.3 科学管理，合理饲养，提高猪体抵抗力。

2015-12-16

吉林农业科技学院2015大学生创新项目(2015109)；吉林农业科技学院青年基金项目(吉农院合字[2015]第207号)

林荣荣 (1993 — )，女，动物医学专业在读本科。

*通讯作者：李青竹(1984 — )，女，博士，主要从事动物营养和动物疾病诊疗研究。

S858.28

B

1007-1474(2016)02-0036-02