猪口蹄疫、猪瘟与高致病性猪蓝耳病疫苗不同免疫方案对其免疫效果的影响

朱 刚王 林王恒昌王立兰陈士九唐志中朴聪雁

（1.灌南县畜牧兽医站，江苏连云港 222500；2.灌南县海洋与渔业局，江苏连云港 222500；3.灌南县田楼动物防疫检疫所，江苏连云港 222500；4.灌南县李集动物防疫检疫所，江苏连云港 222500）

猪口蹄疫、猪瘟与高致病性猪蓝耳病疫苗不同免疫方案对其免疫效果的影响

朱 刚1王 林2王恒昌1王立兰1陈士九3唐志中4朴聪雁1

（1.灌南县畜牧兽医站，江苏连云港 222500；2.灌南县海洋与渔业局，江苏连云港 222500；3.灌南县田楼动物防疫检疫所，江苏连云港 222500；4.灌南县李集动物防疫检疫所，江苏连云港 222500）

为确定合理有效的免疫程序来减少生猪的疫苗接种次数和应激反应，我们设计了相关试验，以验证多重免疫同时进行的可行性。本研究采用这3种疫苗的不同组合进行免疫，观察各组免疫后的副反应以及测定不同时期抗体水平。根据各组的综合分析，在免疫效果和免疫副反应的情况看，可选用D组免疫程序作为实际工作中的首选免疫程序。

疫苗；不同组合；免疫效果

猪口蹄疫、猪瘟与猪高致病性蓝耳是一类动物疫病，给我国养猪业带来不可估计的损失，也只有通过疫苗注射是防控这三种重大动物疫病的首选方法，每年的春防、秋防等，农业部及省市农委给出的重大动物疫病的免疫实施方案是防控重大动物疫病的重要免疫依据，但对各个重大动物疫病的免疫方案是分别给出，而不是多种重大动物疫病联合分阶段给出的免疫方案（程序），虽然分别免疫产生的抗体效价高，但不省工，增加动物的保定次数，同时也加大了动物的应激，并且个别的重大动物疫病的免疫方案在时间上有冲突。为此，我市基层防疫员除按省市农委给予的免疫方案进行免疫外，有的各自为政，免疫后产生的抗体或高或低，纷繁杂乱，为此我们灌南县畜牧兽医站展开了对高致病性猪高致病性蓝耳病、猪瘟、猪O型口蹄疫疫苗联合免疫的效果进行评价的研究，通过多种免疫方案（程序）分别对猪群进行实验，一个猪群只能选择一个免疫方案（程序），并严格按该免疫方案（程序）实施免疫，后通过抗体检测，从而对所产生免疫抗体进行分析，找出最佳的免疫方案（程序），利用这个免疫方案（程序）才能达到最佳的免疫效果，有效的免疫组合既可减少猪只的保定与应激，又省功省时，这样的科学免疫方案（程序）才是生猪防疫工作要遴选应用的方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验地点及实验动物

我们灌南县李集乡大杨村王中才家养猪场，从中选出5窝刚出生的猪只，在日龄上相近、母猪免疫用同一程序与用量、母源抗体相近，并且用同一品种的仔猪。每窝头数分别为14头、12头、10头、9头、11头。确保每次采样7～10头（中途可能有死亡的）。之后对每窝猪按规定的免疫方案（程序）进行免疫注射，在所选用的疫苗都作了事先的规定，如疫苗的生产厂家，批号乃至批次，用法，用量等都作统一安排，每窝猪选定一个免疫方案（程序）后，不作任何改动，直到各种疫苗按免疫方案（程序）注射完毕，并做好档案，登记好猪只耳标号。

1.1.2 试验疫苗

（1）口蹄疫为上海申联生产的合成肽疫苗，批号：20140611，有效期：20150627。

（2）高致病性蓝耳病疫苗为吉林和元生物工程有限公司生产的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗，批号：20140605，有效期：20151223。

（3）猪瘟疫苗为北京华都诗华生物制药有限公司的猪瘟耐热保护剂活疫苗（细胞源），批号：135542，有效期至201512。

1.1.3 诊断试剂

猪瘟抗体ELISA试验盒（BIONOTE韩国安捷公司，批号4413PO003）；蓝耳抗体检测试剂盒（BIONOTE韩国安捷公司，批号4404081）；猪口蹄疫病毒VPI结构蛋白ELISA抗体检测试剂盒（上海申联生物医药有限公司生产，批号20141101）。

1.2 方法

1.2.1 免疫方案（程序）

A、试验动物选14头仔猪的一窝

35日龄用口蹄疫、高致病性蓝耳病疫苗、猪瘟疫苗耳后分点注射三种疫苗，剂量：口蹄疫1.2ml，高致病性蓝耳病1.2头份，猪瘟1.2头份。

B、试验动物选12头仔猪的一窝

（1）高致病性蓝耳病疫苗28日龄1.2头份免疫一次

（2）猪瘟疫苗35日龄1.2头份免疫一次

（3）口蹄疫疫苗42日龄1.2ml免疫一次

C、试验动物选10头仔猪的一窝

（1）高致病性蓝耳病疫苗28日龄1.2头份免疫一次

（2）口蹄疫疫苗、猪瘟疫苗35日龄分别用1.2ml与1.2头份免疫一次

D、试验动物选9头仔猪的一窝

（1）高致病性蓝耳病疫苗、猪瘟疫苗28日龄1.2头份免疫一次

（2）口蹄疫疫苗35日龄用1.2ml与1.2头份免疫一次

E、试验动物选11头仔猪的一窝

（1）口蹄疫疫苗、高致病性蓝耳病疫苗28日龄用1.2ml与1.2头份免疫一次

（2）猪瘟疫苗35日龄用1.2头份免疫一次

五个免疫方案（程序）都实行耳后肌肉注射。猪瘟和高致病性蓝耳病都用专门稀释液。三种疫苗均为政府统一采购的疫苗。

1.2.2 免疫副反应观察与分析

每次免疫后72h内，对各组试验猪逐个观察并记录精神状况、采食、发病、死亡等情况，统计免疫副反应。

1.2.3 采样

对参加试验的动物实行抽血采样，分为三次，第一次采样在最后一次免疫后14d抽血，第二次采样在最后一次免疫后28d抽血，第三次采样在最后一次免疫后42d抽血。

1.2.4 抗体监测

猪瘟免疫抗体采用阻断ELISA试验检测（BIONOTE），判定标准：猪瘟抗体ELISA试验成立条件是：阴性对照的平均OD450值＞0.5，阳性对照的平均OD450值＜0.2。判断标准：阻断率＜40%为阴性；阻断率≥40%判定为阳性。蓝耳抗体检测（BIONOTE）

ELISA 的S/P比例：S/P ＜ 0.4 阴性；S/P≥0.4判定为阳性。猪口蹄疫免疫抗体采用ELISA方法检测。合成肽苗血清样品用VPI结构蛋白ELISA抗体检测试剂盒检测（上海申联）阴性对照的平均OD450值≤0.2，阳性对照的阻断率≥0.5，且≤2.0试验成立；判断标准S/ P ＜ 0.3阴性；S/P≥0.3判定为阳性。

表1 A组试验结果

表2 B组试验结果

表3 C组试验结果

表4 D组试验结果

表5 E组试验结果

2 结果

2.1 免疫副反应观察结果

本实验中共有56头猪，分为5组，仅A组中有3头出现不同程度精神不振、食欲下降的免疫副反应。

2.2 抗体监测结果

由表1可见，A组中高致病性猪蓝耳病与口蹄疫的免疫抗体合格率都为100%，超过国家规定标准80%，猪瘟第一次检测合格，后两次检测仅为33.33%，没有达到国家规定标准，且变异系数大。

由表2可见，B组三种病的免疫合格率都超过了80%国家规定标准，但仅高致病性蓝耳病的变异系数大。

由表3可见，C组猪瘟的免疫合格率有两次没有超过80%国家规定标准，且变异系数大。高致病性猪蓝耳病与口蹄疫的合格率为100%，变异系数比较平稳。

由表4可见，D组中高致病性猪蓝耳病与口蹄疫的免疫抗体合格率都为100%，超过国家规定标准80%，猪瘟开始合格，后一次检测为40.00%，没有达到国家规定标准。

由表5可见，E组由于猪生病少采样一次，但从另外两次采样的检测结果看，猪瘟的抗体合格率都没达标，蓝耳病与口蹄疫虽达到80%的国家规定标准，但存在免疫率下降的趋势，且变异系数大。

3 小结与讨论

（1）根据对A、B、C、D、E组的综合分析，在免疫合格率，变异系数及免疫副反应的情况看，可选用D组免疫程序，可作为实际工作中的首选免疫程序。

（2）试验结果可以看出，A组省功省时，但3头有免疫副反应，猪瘟免疫效果差。B组各项指标都合格，也是省市免疫实施方案的使用方法，但费时费力，保定次数多，应激反应重。当然小型的规模场可以使用。C组减少了保定次数，但在猪瘟免疫上效果不佳，如果加强猪瘟的二免，C组可用作养殖户的免疫程序。E组总体免疫效果较差，不作为免疫程序使用。

（3）从A、B、C、D、E组总体免疫效果的情况分析，无论哪组试验，高致病性猪蓝耳病都有很高的合格率，可以不需要二次免疫。猪瘟的免疫效果总体保护率差，且变异系数大，需要二次免疫。口蹄疫总体抗体水平较好，结合口蹄疫的使用说明书，口蹄疫也应加强二免工作。

[1]董保豫，犹银俊，周启泽，等.猪瘟、猪口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗不同组合免疫效果观察[J].贵州畜牧兽医，2011，35（5）：16-18.

[2]黄文忠，徐志斌，吕粤，等.猪瘟、猪O型口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗联合免疫效果评价[J].云南畜牧兽医，2011，（2）：5-7.