人乳头瘤病毒L1及人端粒酶RNA基因在高危型人乳头瘤病毒阳性子宫颈脱落细胞中的表达

王佩红 涂权梅

【摘要】目的：分析高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）阳性患者子宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒L1基因（L1）及人端粒酶RNA基因（hTERC）的表达情况。方法：自就诊于我院和温州医科大学二附院HP-HPV阳性者中，选取90例宫颈组织正常者作为A组，选取90例宫颈上皮内瘤变者作为B组，选取90例宫颈癌者作为C组，对比分析三组间L1及hTERC表达情况。结果：三组间L1位点中CpG-1、CpG-2及CpG-3位点的甲基化水平间存在显著差异，均以C组水平最低，以A组水平最高（P<005）。三组间hTERC阳性表达率存在显著差异，C组阳性表达率为8333%最高，A组阳性表达率为2667%最低（P<005）。结论：在HP-HPV阳性者中，以宫颈癌者L1位点中CpG-1、CpG-2及CpG-3位点的甲基化水平及hTERC阳性表达率最高。

【关键词】人乳头瘤病毒L1基因；人端粒酶RNA基因；子宫颈脱落细胞；高危型人乳头瘤病毒

【中图分类号】R711【文献标志码】A

宫颈癌为严重威胁女性身体健康及生命安全的恶性肿瘤之一，且其发病率在我国呈逐年上升的趋势[1，2]。临床有研究显示，早期的诊断及及时的治疗对于宫颈癌的治疗有着极为重要的作用[3，4]。但目前对于宫颈癌的诊断仍主要依赖于组织病理学检查，因此种检查方法属有创检查方式，临床常不宜用于早期诊断[5]。故本研究为可更为及时有效的对本病进行诊断，将L1及hTERC基因的表达情况进行分析，以初步探讨L1及hTERC基因表达情况对宫颈癌诊断的作用。结果如下。

1资料与方法

11一般资料

自就诊于我院和温州医科大学二附院的HP-HPV阳性者中，选取90例宫颈组织正常者作为A组，选取90例宫颈上皮内瘤变者作为B组，选取90例宫颈癌者作为C组。所有入选者宫颈组织正常、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌诊断均需经病理学检查明确诊断[6]，同时入选者均需完全了解本研究，同意参加本研究并签署知情同意书。所有入选者中，A组患者年龄35～85岁，平均（5031±1323）岁；B组患者年龄36～84岁，平均（5267±1411）岁；C组患者年龄35～84岁，平均（5196±1691）岁。三组间年龄比较，差异无统计学意义（P>005），具有可比性。

12观察方法

分别留取所有入选者的子宫颈脱落细胞，分别对各组间L1位点中CpG-1、CpG-2、CpG-3位点的甲基化水平及hTERC阳性表达率进行统计。对比三组间L1位点中CpG-1、CpG-2、CpG-3位点的甲基化水平间差异及hTERC阳性表达率间差异。

13检查方法

L1位点中CpG-1、CpG-2、CpG-3位点的甲基化水平检测应用酚-氯仿抽提法联合焦磷酸测序法进行检测。首先应用酚-氯仿抽提法提取子宫颈脱落细胞中的DNA成分，并进行DNA体外扩增。成分留取并扩增子宫颈脱落细胞中的DNA后，应用焦磷酸测序法对L1位点中CpG-1、CpG-2、CpG-3位点的甲基化水平进行测定[7，8]。hTERC阳性表达率应用荧光原位杂交技术进行测定，首先应用宫颈液基（TCT）低渗法制作子宫颈脱落细胞涂片，随后应用荧光原位杂交技术测定涂片中hTERC基因拷贝数，确定hTERC阳性表达率[9]。

14统计学方法

以SPSS 170作为统计学分析软件。计量数据表示形式为均数±标准差，应用t检验进行统计分析；计数数据表示形式为百分率，应用χ2检验进行统计分析。所得统计结果中，以P<005作为存在统计学差异。

2结果

21三组间L1位点甲基化水平分析

三组间L1位点中CpG-1、CpG-2及CpG-3位点的甲基化水平间存在显著差异，均以C组水平最低，以A组水平最高（P<005）。见表1。

22三组间hTERC阳性表达率分析

三组间hTERC阳性表达率存在显著差异，以C组阳性表达率最高，以A组阳性表达率最低（P<005）。见表2。

3讨论

目前临床研究显示，人乳头瘤病毒（HPV）为可导致宫颈上皮发生不典型增生的重要危险因素之一[10，11]。而在HPV中，16型及18型属高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV），已被证实为导致宫颈癌及宫颈癌前病变的主要原因之一[12]。故本研究为更好的诊断宫颈癌，通过对L1基因及hTERC基因在HR-HPV阳性的不同疾病间的差异进行对比分析，以期更为全面的探讨在HR-HPV阳性者中L1基因及hTERC基因表达情况对宫颈癌的诊断价值。

L1基因在人类基因组织中的含量最为丰富，临床研究显示，在人体正常组织中，L1基因的甲基化程度较高，而在包括胃癌、结肠癌及膀胱癌等多种恶性肿瘤患者中，其病变组织中的L1基因的甲基化程度较低[13]。故本研究留取子宫颈脱落细胞，以探讨HR-HPV阳性宫颈癌患者中子宫颈脱落细胞内L1基因的甲基化程度。结果显示：不同疾病的三组间L1位点中CpG-1、CpG-2及CpG-3位点的甲基化水平间存在显著差异，均以宫颈癌患者的C组其L1各位点的甲基化水平最低，以宫颈组织正常者组成的A组其L1各位点的甲基化水平最高（P<005）。可见在HR-HPV阳性的宫颈癌患者中，其L1位点中CpG-1、CpG-2及CpG-3位点的甲基化水平均有显著的降低的趋势。而hTERC基因为合成端粒重复序列的重要模板，而近年来在临床研究中显示，在非典型增生的宫颈细胞中，hTERC基因均有着显著的扩增。且已有学者研究显示，hTERC基因检查在宫颈病变的早期诊断中具有较高的敏感性及特异性，且随着宫颈病变恶性程度的增加，其阳性表达率也随之显著的升高[14-16]。故本研究也将hTERC基因作为观察指标，结果显示：三组间hTERC阳性表达率存在显著差异，C组阳性表达率为8333%最高，A组阳性表达率为2667%最低（P<005）。由此可见在HP-HPV阳性的宫颈癌患者的子宫颈脱落细胞内L1基因甲基化程度显著偏低，而hTERC基因的阳性表达率则显著偏高。

综上所述：在HP-HPV阳性者中，以宫颈癌者L1位点中CpG-1、CpG-2及CpG-3位点的甲基化水平及hTERC阳性表达率最高。在本研究中选取270例研究对象对L1基因及hTERC基因表达情况对HP-HPV阳性者宫颈癌诊断的诊断价值进行分析，研究对象较多，因此得到的结论具有较高的可信度。但是未对L1基因及hTERC基因表达情况对HP-HPV阳性者宫颈癌诊断的诊断价值进行进一步探讨，需要进一步进行探究。

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（收稿日期：2015-03-26）