蜂毒明肽对重症急性胰腺炎合并肾损伤大鼠肾功能的保护作用

刘珊珊 袁玉林

(武汉大学基础医学院，武汉市 430071，E-mail：liushanshan0729@sina.com)

蜂毒明肽对重症急性胰腺炎合并肾损伤大鼠肾功能的保护作用

刘珊珊 袁玉林

(武汉大学基础医学院，武汉市 430071，E-mail：liushanshan0729@sina.com)

目的 探讨蜂毒明肽对重症急性胰腺炎(SAP)合并肾损伤大鼠肾功能的影响。方法 将32只SD大鼠分为假手术组(SO组)、SAP组、蜂毒明肽组(Apamin组)、溶剂对照组(DMSO组)各8只。采用胆胰管逆行注射牛黄胆酸钠构建重症急性胰腺炎大鼠模型，其中并对Apamin组大鼠应用蜂毒明肽进行干预，测定术后12 h各组大鼠的血清淀粉酶，脂肪酶及血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)及白细胞介素-6(IL-6)水平，并观察大鼠胰腺及肾脏病理改变。结果 Apamin组及SAP组的淀粉酶、Scr、BUN、TNF-α、IL-1、IL-6水平以及胰腺及肾脏病理评分均高于SO组(P<0.05)，Apamin组的以上指标均低于SAP(P<0.05)。结论 蜂毒明肽能够减轻SAP所致的炎症反应进而缓解其引发的肾损伤。

重症急性胰腺炎；蜂毒明肽；肾损伤；肾功能；淀粉酶；脂肪酶；大鼠

重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是消化系统常见的急腹症之一，其病情发展迅速、病死率高，且极易引发胰腺外脏器衰竭进而发展为多器官功能衰竭，导致病死率明显升高[1]。急性肾损伤是SAP所致胰腺外脏器损伤较为常见的并发症，SAP并发急性肾损伤会使疾病转归发生重大改变，患者病死率明显增高，因此，在SAP发生的早期对可能出现的肾损伤进行积极预防及治疗，对疾病的转归具有重要临床意义。蜂毒是由蜜蜂体内提取出的自然毒素，有研究证实其具有抗关节炎、缓解水肿性炎症引发的疼痛等作用[2-3]。蜂毒的化学成分复杂，其主要由蜂毒肽、蜂毒明肽构成。有研究表明蜂毒肽具有抑制核因子-κB的作用[4]。本实验旨在探讨蜂毒明肽的抑制炎性因子进而保护肾功能的效果，以及减轻SAP所致肾损伤的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物及模型的制备 无特定病原体级雄性SD大鼠32只(北京华阜康公司，质量合格证号：11401300011894)，体重为180～200 g，采用随机数表法分为假手术组(sham-operation，SO组)、SAP组、蜂毒明肽组(Apamin组)、溶剂对照组[二甲基亚砜组(dimethyl sulfoxide，DMSO组)]，每组8只大鼠。实验前8 h予禁食、不禁水。麻醉采用10%水合氯醛(0.3 ml/kg)腹腔注射。在SAP组及Apamin组建立SAP大鼠模型：予腹部消毒，于剑突下正中切口进入腹腔，寻找胆胰管在十二指肠的开口处，逆行插管，5%的牛黄胆酸钠(1 ml/kg)以1 ml/min匀速注入胆胰管，成功制备SAP模型，术后大鼠皮下给予5 ml生理盐水补液。SO组麻醉后仅打开腹腔并翻动十二指肠，另无其他处理。各组均术后补液处理。参照文献[5]的方法，Apamin组在制备SAP模型完成后30 min及6 h皮下注射Apamin(购于Sigma公司；Apamin溶于DMSO后注射)，剂量100 μg/kg。DMSO组给予皮下注射0.5% DMSO(Sigma公司，D2650)，剂量0.2 ml/100 g。SAP组术后仅给予补液，无其他特殊给药。

1.2 血清酶学指标及标本 术后12 h行血清酶学、炎症因子检测，以及胰腺、肾脏组织标本取材。大鼠麻醉后于下腔静脉取血，4℃、转速1 300 r/min离心5 min后取上层血清，-20℃保存备用。(1)采用西门子全自动生化检测仪测定血清淀粉酶、脂肪酶、血肌酐(serum creatinine，Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)，由武汉大学人民医院检验科协助完成。(2)根据酶联免疫吸附试验试剂盒(武汉华美生物公司)说明书的操作步骤，取血清检测血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-1(interleukin-1，IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)水平。(3)取胰腺组织及大鼠右肾上极，4%多聚甲醛固定，包埋、切成3 μm厚切片，用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，显微镜下观察胰腺及形态改变，由两名病理医师根据文献[6]中的标准进行胰腺病理学评分，根据文献[7]中的标准进行肾脏病理评分。

1.3 统计学分析 应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，符合正态分布和方差齐的计量资料采用(x±s)表示，多组间数据比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组术后12 h血清胰腺酶学指标的比较 4组间淀粉酶、脂肪酶水平的比较，差异有统计学意义(P<0.05)。其中，SAP组及Apamin组的血清淀粉酶及脂肪酶均较SO组明显升高(P<0.05)；Apamin组淀粉酶水平低于SAP组(P<0.05)，脂肪酶水平低于SAP组，但差异无统计学意义(P>0.05)。DMSO组与SO组的血清淀粉酶及脂肪酶比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组术后12 h血清胰腺酶学指标的比较(x±s，U/L)

注：与SO组比较，*P<0.05；与SAP组比较，#P<0.05。

2.2 各组术后12 h胰腺、肾脏病理学改变及病理评分 (1)病理学改变：SO组胰腺形态完整，无水肿、出血及相关病理改变；SAP组可见胰腺腺泡细胞大量坏死，内有出血水肿；Apamin组可见胰腺腺泡细胞较SAP组坏死减少，仍有出血水肿；DMSO组仅见胰腺轻度水肿。见图1。SO组肾脏无病理学改变，肾小管上皮细胞无出血、水肿及炎症细胞浸润；SAP组可见肾小管间质内出血，肾小管上皮细胞脱落并管型形成；Apamin组可见出血减少，肾小管上皮细胞脱落并管型形成较SAP减轻；DMSO组与SO组相似，均无明显改变，见图2。(2)病理评分：术后12h，SAP组及Apamin组的胰腺及病理评分均明显高于SO组(P<0.05)；经过蜂毒明肽治疗后Apamin组胰腺及肾脏病理评分低于SAP组(P<0.05)。见表2。

A SO组胰腺形态学改变 B SAP组胰腺形态学改变 C Apamin组胰腺形态学改变 D DMSO组胰腺形态学改变

图1 各组术后12 h胰腺病理学改变(HE染色，×200)

A SO组肾脏形态学改变 B SAP组肾脏形态学改变 C Apamin组肾脏形态学改变 D DMSO组肾脏形态学改变

图2 各组术后12 h肾脏病理学改变(HE染色，×200)

注：与SO组比较，*P<0.05；与SAP组比较，#P<0.05。

2.3 各组术后12 h TNF-α、IL-1、IL-6、BUN及Scr水平比较 4组间TNF-α、IL-1、IL-6、BUN及Scr水平比较，差异有统计意义(P<0.05)。SAP组及Apamin组的TNF-α、IL-1、IL-6、BUN及Scr水平均明显高于SO组(P<0.05)，Apamin组的各项指标均低于SAP组(P<0.05)，但DMOS组的各项指标与SO组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 各组术后12 h TNF-α、IL-1、IL-6、BUN及Scr水平比较(x±s)

注：与SO组比较，*P<0.05；与SAP组比较，#P<0.05。

3 讨 论

SAP是目前消化系统疾病中较为严重的综合性疾病，当急性胰腺炎进展为SAP时，严重的全身炎症反应可释放大量炎症因子导致胰腺腺泡细胞坏死，并进一步导致胰外器官功能损害，严重者可发生多器官功能衰竭。目前继发于SAP的急性肾损伤是仅次于肺损伤的一种严重胰腺外脏器损伤。若急性肾损伤发展为急性肾衰竭，患者的死亡率达80%左右[8]，因此在SAP发生时应该预防性地保护患者肾功能，这对治疗SAP具有重要的意义。

本研究通过胆胰管逆行注射牛黄胆酸钠构建SAP大鼠模型，探讨蜂毒明肽在SAP肾损伤中的保护作用，实验中采用DMSO作为Apamin溶剂，但DMOS组的血清淀粉酶、脂肪酶、肾功能等指标与SO组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，且胰腺、肾脏无明显病理改变，提示DMSO对正常大鼠影响不大。建模成功后SAP组及Apamin组大鼠的血清淀粉酶、脂肪酶均较SO组明显升高(P<0.05)，而TNF-α，IL-1、IL-6、BUN及Scr水平也明显高于SO组(P<0.05)。此外SAP组及Apamin组的胰腺及肾脏病理评分均高于明显高于SO组(P<0.05)，提示大鼠发生SAP后血液中炎性因子水平升高并存在急性肾功能损伤。而与SAP组相比，Apamin组的血清淀粉酶、TNF-α，IL-1、IL-6、BUN及Scr水平均明显下降(P<0.05)。镜下病理结果显示Apamin组胰腺、肾脏的损伤较SAP组减轻，胰腺、肾脏病理评分亦较SAP组降低(P<0.05)，提示应用蜂毒明肽治疗后能够明显降低大鼠的炎症因子水平并改善胰腺及肾脏病理评分，这表明蜂毒明肽可通过抑制机体的炎症反应进一步减轻胰腺及肾损伤。其可能的机制为蜂毒明肽通过抑制炎症细胞浸润以起到抗炎作用。TNF-α、IL-1及IL-6等炎症因子在发生炎症时候能够产生一系列连锁反应及放大效应，会进一步导致全身炎性反应及多器官功能衰竭。近年来研究显示，蜂毒在炎症发生过程及进展中具有明显的负向调节作用，从而能在多种炎症反应综合征中保护相关器官[4]。已有研究表明蜂毒明肽可在骨关节、心血管及呼吸系统等诸多器官的急、慢性炎性疾病及全身炎症反应综合征中发挥一定的作用，包括缓解炎症反应、减轻组织形态损伤、保护脏器功能等[9]。

综上所述，蜂毒明肽作为蜂毒中主要化学成分之一，在大鼠发生SAP时对肾功能具有保护作用，其机制可能与抑制炎症因子的浸润有关。

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Protective effect of apamin on renal function in rats with severe acute pancreatitis combined with renal injury

LIUShan-shan,YUANYu-lin

(SchoolofBasicMedicalSciences,WuhanUniversity,Wuhan430071,China)

Objective To explore the effect of apamin on the renal function in rats with severe acute pancreatitis(SAP) combined with renal injury.Methods Thirty-two SD rats were divided into sham-operation group(SO group),SAP group,apamin group(Apamin group) and solvent-control group(DMSO group),with 8 rats for each group.Retrograde cholangiopancreatic duct injection with sodium taurocholate was used to establish the rat models of severe acute pancreatitis.And the rats in the Apamin group were intervened with apamin.At 12 hours after operation,the levels of serum amylase,lipase,serum creatinine(Scr),blood urea nitrogen(BUN),tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin-1β(IL-1β ) and interleukin-6(IL-6) were detected in all groups.Pancreas and renal histopathological changes of the rats were observed.Results Compared to OS group,Apamin group and SAP group had higer levels of amylase,Scr,BUN,TNF-α,IL-1β,IL-6,pancreas and renal histopathological scores(P<0.05).And these indices of Apamin group were lower than those of SAP group(P<0.05).Conclusion Apamin may alleviate renal injury by reducing SAP-induced inflammatory responses.

Severe acute pancreatitis,Apamin,Renal injury,Renal function,Amylase,Lipase,Rat

刘珊珊(1980～)，女，硕士，主治医师，研究方向：消化系统疾病的诊治。

袁玉林(1967～)，女，博士，教授，研究方向：消化系统疾病的诊治，E-mail：yuanyulin19620120@126.com。

R 576.1

A

0253-4304(2016)02-0157-04

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.02.03

2015-07-29

2015-10-23)