多元回归光度法同时测定复方对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚和乙酰水杨酸

多元回归光度法同时测定复方对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚和乙酰水杨酸

常春，屈清慧，郭琦*

(西安交通大学药学院，西安710061)

摘要：目的 建立多元回归分光光度法同时测定复方对乙酰氨基酚片中乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚。方法样品用0.2 mol·L-1氢氧化钠水解乙酰水杨酸后，以pH 6.5磷酸二氢钾缓冲溶液为溶剂，采用多元回归分光光度法，测定波长为236，272和283 nm。结果乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚的平均回收率分别为98.9%和99.0%，RSD分别为2.4%和3.0%。结论样品测定结果与部颁标准法比较，其准确度和精密度无显著性差异，该法可同时准确测定复方对乙酰氨基酚片中乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚的含量。

关键词：复方对乙酰氨基酚片；乙酰水杨酸；对乙酰氨基酚；多元回归分光光度法；含量测定

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.014

中图分类号：R927.2文献标志码：A

作者简介：常春，女，实验师

收稿日期：(2015-03-20)

Simultaneous determination of paracetamol and acetylsalicylic acid in Compound Paracetamol Tablets by multiple regression spectrophotometry

CHANG Chun，QU Qinghui，GUO Qi*(School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China)

Abstract:ObjectiveTo estabish a method of multiple regression spectrophotometry for simultaneous determination of acetylsalicylic acid and acetaminophen in Compound Paracetamol Tablets.MethodsThe samples were hydrolyzed by the solution of 0.2 mol·L-1 NaOH.The components were determined in potassium dihydrogen phosphate buffer(pH 6.5) solution.The multiple linear regression spectrophotometry was used at wavelength of 236，272 and 283 nm. ResultsThe average recoveries of acetylsalicylic acid and acetaminophen were 98.9% and 99.0%，with RSD 2.4% and 3.0%，respectively. ConclusionAccuracy and precision of the method was compared with the official quantitative analysis and no significant difference was found. This method is accurate for the simultaneous determination of paracetamol and acetylsalicylic acid in Compound Paracetamol Tablets.

Key words: Compound Acetaminophen Tablets；acetylsalicylic acid；paracetamol；multiple regression spectrophotometry;determination

*通信作者：郭琦，女，副教授

复方对乙酰氨基酚片为常用的解热镇痛药，用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，也用于缓解轻中度疼痛如头痛、关节痛等。它是由乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因3种成分组成的复方制剂。中国卫生部药品标准化学药品及制剂第一册[1]均为容量法，需对样品回流提取，操作较繁琐。本文采用多元线性回归分光光度法[2]进行了乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚的同时测定，结果满意，样品无需预处理，操作快速简便，所用仪器普及，易于推广。

1仪器与试药

1.1仪器SP-2102UV紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；S-25数字式pH计(上海日岛科学仪器有限公司)；AUY220分析天平(SHIMADZU)；GZX-903MBE电热恒温鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)；KQ3200DBB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)。

1.2试药乙酰水杨酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号100113-200603)；对乙酰氨基酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号100018-200408)；水杨酸(西安化学试剂厂)；复方对乙酰氨基酚片2批(产地：西安，批号20131105，20131011)均为市售，规格为每片含乙酰水杨酸230 mg、对乙酰氨基酚126 mg、咖啡因30 mg。

1.3试剂浓度为0.2 mol·L-1氢氧化钠溶液；2 mol·L-1的盐酸溶液；pH 6.5磷酸二氢钾缓冲溶液；0.5 g·L-1酒石酸的无水乙醇溶液；所用试剂均为分析纯。

1.4乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因标准储备液的配制分别精密称取乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因对照品适量，分别精密加入0.2 mol·L-1氢氧化钠溶液1 mL，静置15 min，用pH 6.5的磷酸二氢钾缓冲溶液配制成一定质量浓度的标准储备液，摇匀，备用。

1.5乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因对照品溶液的配制精密吸取乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因标准储备液一定量，用pH 6.5的磷酸二氢钾缓冲溶液稀释成适当质量浓度的相应对照品溶液。

2方法与结果

2.1吸收光谱分别精密量取乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因标准储备液，用pH 6.5的磷酸二氢钾缓冲溶液配制成适宜质量浓度，同时按处方比精密称取乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因对照品一定量，用同样方法配制成标准混合溶液，以空白试剂为参比，在200～400 nm范围内进行紫外吸收光谱扫描。结果表明，对乙酰氨基酚、咖啡因和乙酰水杨酸分别在240，275和300 nm处有最大吸收峰，吸收光谱上的较大差异为多元线性回归法提供了可能性。

2.2吸光度加和性考察及测定波长选择用乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因对照品分别配制单一质量浓度的标准溶液及三组分标准混合溶液。以试剂空白为参比，在220～300 nm范围内每隔1 nm测量其各波长处的吸光度值，由标准混合溶液在各波长处测得的吸光度值(Ai)与单一质量浓度乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因标准溶液在各波长处测得的吸光度值之和(ΣA0)比较，计算不同波长下的相对误差|Ai-ΣA0| /ΣA0。在220～300 nm范围内，选择相对误差较小处的波长作为测定波长，结果选择最佳的3个波长为236，272和283 nm，所选择的各测定波长，满足加和性。

2.3回归方程的建立精密移取乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因对照品溶液适量，按正交设计表L9(34) 配制9组标准混合溶液，各组分质量浓度见表1，分别在236，272和283 nm波长测定吸光度，然后用多元线性回归法求得乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚的回归方程及复相关系数(RR)，回归平方和(U)，残差平方和(Q)，F检验值。

表1混合溶液中各组分质量浓度

Tab.1 Concentration of components in mixed solution

编号乙酰水杨酸/μg·mL-1对乙酰氨基酚/μg·mL-1咖啡因/μg·mL-1111.506.3001.505211.5012.603.010311.5025.206.020422.996.3003.010522.9912.606.020622.9925.201.505745.986.3006.020845.9812.601.505945.9825.203.010

乙酰水杨酸CA=0.387 421+1.817 705A236-106.045A272+149.276 6A283

(RR=0.999 756，U=1 849.438，Q=0.451 989，F=6 819.63)

对乙酰氨基酚CP=1.648 09+20.945 49A236+45.856 9A272-78.572A283

(RR=0.997 219，U=554.114 9，Q=1.545 104，F=597.710 5)

式中,CA为乙酰水杨酸的质量浓度，CP为对乙酰氨基酚的质量浓度，A236,A272和A283分别为236，272和283 nm处的吸光度。乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚回归方程的质量浓度范围分别为11.50～45.98和6.30～25.20 μg·mL-1。

2.4样品测定精密称取复方对乙酰氨基酚片细粉适量，置于100 mL量瓶中，精密加入10 mL 氢氧化钠溶液(0.2 mol·L-1)，充分振摇，使溶解，静置15 min，用pH 6.5的磷酸二氢钾缓冲溶液稀释至刻度，摇匀，干滤纸滤过，精密吸取续滤液1 mL，置于100 mL量瓶中，用pH 6.5的磷酸二氢钾缓冲溶液稀释至刻度，以空白试剂为参比，在236，272和283 nm处测定吸光度。分别按乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚各自的回归方程计算其含量，结果见表2。

表2样品含量(标示量)测定结果

Tab.2 The content (labeled amount) of the sample

( n=3)

注：a：RSD(%)；b：F0.05=19.00，t0.05=2.776

2.5回收率实验精密称取等量已知含量的同批(批号071105)复方对乙酰氨基酚片细粉各6份，分别精密加入一定量(低、中、高)的乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚对照品，按照样品测定方法制备测定，计算乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚的回收率，结果见表3。

表3乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚回收率实验结果

Tab.3 The recovery of acetylsalicylic acid and paracetamol

样品乙酰水杨酸原含量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%对乙酰氨基酚原含量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%125.4715.1440.4098.6114.008.29022.0697.23225.4715.1440.90102.6014.008.29021.8995.17325.4720.1944.7795.5914.0011.0625.0299.64425.4720.1945.2898.1214.0011.0624.9398.83525.4725.2450.3898.6914.0013.8228.35103.80625.4725.2450.6899.8814.0013.8227.6999.06X(%)98.91〛98.96RSD(%)2.40〛3.00

2.6重复性实验精密称取同一批号的复方对乙酰氨基酚片细粉5份，按样品测定项下方法测定2组分含量，重复性实验结果表明，乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚标示量含量测定值分别在103.1～104.8和98.5～102.3之间，RSD值分别为0.7%和1.9%(n=5)。

2.7稳定性实验取重复性实验项下任一溶液，分别于0，2，4，6和8 h在选定波长处测定吸光度，结果其RSD值分别为1.2%，1.7%和1.1%(n=5)，表明样品溶液在8 h内测定较为稳定。

将重复性实验项下任一溶液放置不同时间(0，2，4，6和8 h)后测量其吸光度，结果表明，溶液至少在8 h内稳定。

2.8辅料干扰实验精密称取复方对乙酰氨基酚片细粉一定量，按样品测定项下操作制备样品溶液；同时与该片粉量按处方比精密称取适量的乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因对照品，共置于小烧杯中混合，同样按样品测定项下进行操作，制备模拟样品溶液。将样品溶液和模拟样品溶液分别在200～400 nm范围内进行紫外吸收光谱扫描，结果样品与模拟样品的紫外吸收光谱图完全重合，表明辅料对含量测定无干扰。

3讨论

①溶剂选择实验发现,选用不同的溶剂对咖啡因、乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚的溶解度和稳定性有显著的影响。本文曾实验过以pH 6.5磷酸二氢钾缓冲溶液、0.2 mol·L-1氢氧化钠溶液或0.5 g·L-1酒石酸的无水乙醇液来溶解样品进行测定，结果发现pH 6.5磷酸二氢钾缓冲溶液不仅无毒、价廉、对药物有良好的溶解度，而且药物在该溶剂中的稳定性最好，完全满足实验要求。

实验发现选用不同的溶剂对咖啡因、乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚的溶解度和稳定性有显著的影响。本文曾实验过用单一溶剂(如pH 6.5磷酸二氢钾缓冲溶液、0.2 mol·L-1氢氧化钠溶液或0.5 g·L-1酒石酸的无水乙醇液)溶解样品进行测定，效果不理想。由于乙酰水杨酸易水解生成水杨酸，为了使混合物测定时干扰组分数减少，因此本文选用了先将乙酰水杨酸用0.2 mol·L-1氢氧化钠水解成水杨酸，然后再在pH 6.5磷酸二氢钾缓冲溶液中测定，完全满足实验要求。按本文的实验条件对咖啡因和对乙酰氨基酚的紫外吸收进行了考察，结果表明，2种组分的紫外吸收光谱特征在水解前后无任何改变。同时对水杨酸与相当量的乙酰水杨酸水解产物的紫外吸收进行了实验，实验亦表明，两者吸收曲线完全重合。

②实验中还采用中国卫生部药品标准方法[1]对样品中的乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚含量进行了测定，并对采用本方法的测定结果与标准方法的测定结果进行了显著性检验。F和t计算值与理论值(α=0.05)之间无显著性差异，说明2种方法在测定复方对乙酰氨基酚片中乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚时有相似的精密度和准确度。

③本文建立的同时测定复方对乙酰氨基酚片中乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚方法，所需仪器设备简单、普及，操作简便，具有较好的精密度和准确度，取得了满意的结果。

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