顶空气相色谱法测定盐酸罗匹尼罗原料药的溶剂残留

2016-01-11 08:26:10张小妮,刘雪峰,王嫦鹤等

西北药学杂志 2015年6期

·药物分析·

张小妮1，刘雪峰2，王嫦鹤2，刘海静1，2*

(1.陕西中医药大学，咸阳712046；2.陕西省食品药品检验所，西安710065)

摘要：目的建立顶空毛细管气相色谱法测定盐酸罗匹尼罗中有机溶剂残留。方法采用毛细管色谱柱DB-624(30 m×320 mm×1.8 μm)，载气为氮气，流速1.5 mL·min-1，分流比1∶1；FID检测器，进样口温度为200 ℃，检测器温度为250 ℃；程序升温，初始温度35 ℃,维持5 min，以10 ℃·min-1的升温速率升至240 ℃，维持5 min；顶空进样，顶空瓶平衡温度为100 ℃，平衡时间30 min。结果甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的线性范围分别为127.5～1 020(r=0.998 7)，75.09～600.7(r=0.996 7)，15.03～120.3(r=0.999 7)，7.212～57.70(r=0.999 4)，125.6～1 005(r=0.999 2)和5.256～42.05(r=0.998 7)，线性关系良好。平均回收率为96.7%，96.1%，95.5%，93.6%，92.7%和92.2%，其RSD分别为1.6%，1.2%，2.3%，2.7%，3.5%和3.0%。结论所建立的方法准确、简便、重复性好，可用于盐酸罗匹尼罗原料药中6种有机溶剂残留的测定。

关键词：顶空气相色谱法；盐酸罗匹尼罗原料药；溶剂残留

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.013

中图分类号：R927.2文献标志码：A

作者简介：张小妮，女，硕士研究生

收稿日期：(2015-03-02)

Determination of residual solvents in ropinirole hydrochloride by headspace gas chromatography

ZHANG Xiaoni1，LIU Xuefeng2，WANG Changhe2，LIU Haijing1，2*(1. Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China；2. Shaanxi Institute for Food and Drug Control，Xi′an 710065，China)

Abstract:ObjectiveTo establish a headspace capillary GC method for the determination of residual solvents in ropinirole hydrochloride. MethodsThe experimental condition was as follows:ADB-624 capillary column(30 m×320 mm×1.8 μm) was used， N2 was used as the carrier gas at a flow rate of 1.5 mL·min-1，and split rate was 1∶1；The injector temperature was 200 ℃ and the FID detector was 250 ℃；The oven temperature was initially held at 35 ℃ for 5 min and then programmed to 240 ℃ at 10 ℃·min-1 and held for 5 min；The headspace sampling was used at heated temperature 100 ℃ for 30 min. ResultsThe linear ranges of methanol，ethanol，methylene，chloride，n-hexane，ethylacetate，pyridine were 127.5-1 020(r=0.999 17)， 75.09-600.7(r=0.996 7)，15.03-120.3(r=0.999 7)，7.212-57.70(r=0.999 4)， 125.6-1 005(r=0.999 2)and 5.256-42.05(r=0.998 7), respectively.The average recoveries were 96.7%，96.1%，95.5%，93.6%，92.7% and 92.2%, respectively，and the RSD were 1.6%，1.2%，2.3%，2.7%，3.5% and 3.0%, respectively. ConclusionThe method is accurate，and repeatable. It can be applied for the determination of 6 residual solvents in ropinirole hydrochloride.

Key words: headspace GC；ropinirole hydrochloride；residual solvents

*通信作者：刘海静，女，硕士生导师，主任药师

盐酸罗匹尼罗化学名为4,2-二正丙基胺乙基-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮盐酸盐，分子式为C16H24N20·HCl，是一种强效的选择性非麦角碱类多巴胺D2-受体激动剂[1]，主要用于治疗帕金森病和中度到重度的不宁腿(多动腿)综合征。1996年首次在英国上市，商品名Requip，1997年获FDA批准在美国上市[2]。目前该药在临床上已广泛应用，前景良好，但国内还未见有关盐酸罗匹尼罗中残留溶剂测定的报道。根据不同厂家的工艺资料，本品在合成、纯化及精制过程中可能涉及了甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶等有机溶剂，根据《中国药典》(2010年版)二部附录VIII P“残留溶剂测定法”项下残留溶剂及限度规定，二氯甲烷、正己烷、甲醇、吡啶为二类溶剂(限度分别为0.06%，0.029%，0.3%和0.02%)，乙醇和乙酸乙酯为三类溶剂(限度均为0.5%)[3]，因此，检测原料药中有机溶剂的残留量是有必要的。本文通过建立顶空毛细管气相色谱法测定盐酸罗匹尼罗中有机溶剂残留的方法对3批原料药进行了检测。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent 6890N气相色谱仪，配置氢火焰离子化检测器(FID)；Agilent 7694E顶空进样仪；塞多利斯ME-235S型电子分析天平。

1.2试药3批盐酸罗匹尼罗原料药根据批号不同分别记作S1、S2、S3；甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和吡啶均为分析纯;N，N-二甲基甲酰胺(DMF)为色谱纯;水为超纯水。

2方法与结果

2.1顶空条件顶空进样，平衡温度为100 ℃，平衡时间为30 min，取样针温度为110 ℃，传输线温度为120 ℃，加压时间为3 min，进样时间为1 min。

2.2色谱条件[4]Agilent 6890N气相色谱仪，7694E顶空进样仪；色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱(5%苯基+95%聚二甲基硅氧烷，30 m×320 mm×1.8 μm)；载气为高纯氮气(质量分数≥99.999%)，流速1.5 mL·min-1，FID检测器；进样口温度为200 ℃，检测器温度为250 ℃；程序升温，初始温度35 ℃，维持5 min，以10 ℃·min-1的升温速率升至240 ℃，维持5 min；氢气流速35 mL·min-1，空气流速300 mL·min-1，尾吹10 mL·min-1，分流比1∶1。

2.3溶液的制备

2.3.1定位溶液的制备取吡啶、正己烷、二氯甲烷、无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯适量，分别加水-DMF(1∶1)2 mL，摇匀，作为定位溶液。

2.3.2对照品溶液的制备精密称取吡啶约0.2 g，正己烷约0.3 g，二氯甲烷0.6 g，置于同一100 mL量瓶中，用水-DMF(1∶1)稀释至刻度作为对照储备液1；精密称取无水乙醇约0.5 g，甲醇约0.3 g,乙酸乙酯约0.5 g，置于同一100 mL量瓶中，用水-DMF(1∶1)稀释至刻度作为对照储备液2；精密移取1 mL对照储备液1与10 mL对照储备液2，置于100 mL量瓶中，用水-DMF(1∶1)稀释至刻度即得混合对照品溶液。

2.3.3供试品溶液的制备精密称取盐酸罗匹尼罗原料药约0.2 g，置于顶空瓶中，精密加入水-DMF(1∶1)2 mL溶解，摇匀，即得。

2.3.4标准曲线溶液的制备分别精密移取对照储备液1溶液0.25，0.5，0.75，1.0，1.5和2.0 mL与对照储备液2溶液2.5，5.0，7.5，10.0，15.0和20.0 mL,一一混合,置于100 mL量瓶中，用水-DMF(1∶1)稀释至刻度，得到系列质量浓度的对照品溶液。

2.4系统适用性精密量取混合对照品溶液、空白溶剂各2 mL，置于20 mL顶空瓶中，进样，按2.2项下色谱条件进行测定，记录气相色谱图(图1)。在所得的色谱图中，各组分峰的理论塔板数均大于10 000，各个相邻峰的分离度均大于3.0，空白溶剂对样品测定无干扰[5]。

2.5线性关系考察精密量取2.3.4项下系列浓度的对照品溶液各2 mL，置于20 mL顶空瓶中，进样，按2.2项下色谱条件进行测定，记录各峰面积。以峰面积为纵坐标、以各对照品的质量浓度为横坐标，进行线性回归，分别得到甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的标准曲线线性回归方程及线性范围，见表1。

图1系统适用性色谱图

A.混合对照品；B.空白溶剂；1.甲醇；2.无水乙醇；3.二氯甲烷；4.正己烷；5.乙酸乙酯；6.吡啶；7.N，N-二甲基甲酰胺；

Fig.1 Chroromatograms of system suitability

A.mixed reference standard；B.blank solvent；1.methanol；2.ethanol；3.methylene chloride；4.n-hexane；5.ethyl acetate;6.pyridine;7.DMF

表1残留溶剂标准曲线的回归方程及线性范围

Tab.1 Regression equation and linear ranges of 6 residual solvents

溶剂线性方程r 线性范围/μg·mL-1甲醇Y=0.6263X-8.25190.9987127.5～1020无水乙醇Y=0.8641X+4.35880.996775.09～600.7二氯甲烷Y=1.8590X-8.85740.999715.03～120.3正己烷Y=1.6720X-11.47700.99947.212～57.70乙酸乙酯Y=3.4358X-108.26000.9992125.6～1005.0吡啶Y=0.3005X+5.94890.99875.256～42.05

2.6最低检测限和定量限将2.3.2项下混合对照品溶液逐级稀释，在信噪比为3(S∶N=3)作为检测限；信噪比为10(S∶N=10)作为定量限。测得甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的检测限分别为0.15，0.12，0.24，0.22，0.58和0.84 μg·mL-1，甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的定量限分别为0.6，0.5，0.5，0.7，1.7和2.8 μg·mL-1。

2.7精密度实验精密量取混合对照品溶液2 mL,置于20 mL顶空瓶中，平行6份，按2.2项下色谱条件进行测定，记录色谱图，计算各有机溶剂峰面积的RSD值，结果甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的日内精密度分别为1.2%，1.7%，0.8%，1.4%，2.5%和3.3%。同法平行操作3 d，测得各有机溶剂峰面积的RSD值，结果甲醇、无水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的日间精密度分别为1.8%，1.7%，0.5%，1.9%，3.0%和3.6%。

2.8重复性实验取供试品S1，按2.3.3项下方法，制备5份供试品溶液，按2.2项下色谱条件进行测定，记录色谱图，计算各有机溶剂含量的RSD值，结果均小于5.0%。

2.9稳定性实验取供试品S1，按2.3.3项下方法，制备供试品溶液，分别于2，4，6，12和24 h进行测定，记录色谱图，计算各有机溶剂含量的RSD值，结果均小于5.0%。

2.10回收率实验精密称取供试品S1约0.2 g，置于20 mL顶空瓶中，以各溶剂检测限度的80%,100%和120%，分别精密加入混合对照品溶液0.8，1.0和1.2 mL，再依次精密加入水-DMF(1∶1)1.2,1.0和0.8 mL，摇匀，各平行3份，共9份。按2.2项下色谱条件进行测定，记录色谱图，计算6种残留溶剂的平均回收率分别为96.7%，96.1%，95.5%，93.6%，92.7%和92.2%，其RSD分别为1.6%，1.2%，2.3%，2.7%，3.5%和3.0%。

2.11样品的测定取2.3.3项下供试品溶液，按2.2项下色谱条件进行测定，记录色谱图(图2)，计算残留溶剂的含量，结果见表2。