对CHB和HBV相关性肝硬化患者进行外周血Th17细胞频率检测的临床意义分析

张利霞 张中平 许丽娟

(常州市武进人民医院消化内科 江苏 常州 213017)

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染导致的慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）是我国的常见病、高发病。最新的研究结果表明，由CD4+T细胞介导的获得性免疫应答在肝细胞损伤与肝组织炎症发生发展的过程中扮演了重要的角色。辅助性T细胞17（Th17）是一种CD4+T细胞，具有促进白细胞介素-17（IL-17）的生成、促进肝脏疾病的发生与发展等作用[1]。“外周血Th17细胞频率”即Th17细胞在人体外周血中表达的频率。在本次研究中，我们主要分析对CHB和HBV相关性肝硬化患者进行外周血Th17细胞频率检测的临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究中的患者均为我院2013年10月～2015年10月收治的30例CHB患者与30例HBV相关性肝硬化患者。这些患者的病情均符合《慢性乙型肝炎防治指南》（2010年版）中关于CHB或HBV相关性肝硬化的诊断标准[2]。将这些患者按照病情的不同分为CHB组（n=30）及HBV相关性肝硬化组（n=30）。将同期在我院进行体检的30名健康人纳入正常组。在CHB组患者中，有男性16例、女性14例，其平均年龄为（49.26±8.37）岁。在HBV相关性肝硬化组患者中，有男性17例、女性13例，其平均年龄为（48.83±9.26）岁。在正常组受试者 中，有男性15例、女性15例，其平均年龄为（48.94±9.30）岁。各组受试者的年龄、性别等一般资料相比较，差异无统计学意义（p＞0.05），具有可比性。本次研究已通过我院医学伦理委员会的批准，相关的受试者均对本次研究知情且自愿参与本次研究。

1.2 检测指标 抽取各组受试者的空腹肘静脉血3mL，使用FACSCalibur流式细胞仪（美国BD公司生成）检测其外周血中Th17细胞的频率[5]。将各组受试者的血液标本置于离心机中分离出血浆，采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测其血浆中IL-17的水平。使用C8000型全自动生化分析仪（美国雅培公司生成）检测各组受试者的血清谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）等肝功能指标。使用ABI Prism 7300型荧光定量PCR仪（美国应用生物系统公司生成）及DA7600型全自动荧光定量PCR仪（美国罗氏公司生成）检测各组受试者HBV的血清学标志物及HBV DNA载量等指标。

1.3 统计学分析 采用SPSS18.0统计软件对本研究中的数据进行分析，计量资料用（±s）表示，采用t检验，计数资料用（%）表示，采用χ²检验，采用Pearson法或Spearman法进行相关性分析。检验水准的设定为α=0.05，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 对各组受试者外周血Th17细胞频率的分析 与CHB组患者相比，HBV相关性肝硬化组患者的外周血Th17细胞频率较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与正常组受试者相比，CHB组患者的外周血Th17细胞频率较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。详情见表1。

表1 对各组受试者外周血Th17细胞频率的分析（±s ）

表1 对各组受试者外周血Th17细胞频率的分析（±s ）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与CHB组比较，#P＜0.05。

组别例数外周血Th17细胞频率（%）CHB组302.14±0.33*HBV相关性肝硬化组302.51±0.29*#正常组301.09±0.17#

2.2 对各组受试者血浆IL-17水平的分析 与CHB组患者相比，HBV相关性肝硬化组患者血浆IL-17的水平较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与正常组受试者相比，CHB组患者血浆IL-17的水平较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。详情见表2。

表2 对各组受试者血浆IL-17水平的分析（±s ）

表2 对各组受试者血浆IL-17水平的分析（±s ）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与CHB组比较，#P＜0.05。

组别例数血浆IL-17的水平（pg/mL）CHB组3021.69±4.33*HBV相关性肝硬化组3032.48±8.15*#正常组3011.65±3.30#

2.3 对各组受试者其他检测指标的分析 与HBV相关性肝硬化组患者相比，CHB组患者ALT的水平、HBV DNA的载量较高，其TBIL的水平较低，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组患者ALT的水平、TBIL的水平均高于正常组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。详情见表3。

表3 对各组受试者其他检测指标的分析（±s）

表3 对各组受试者其他检测指标的分析（±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与CHB组比较，#P＜0.05。

组别例数ALT（U/L）TBIL（μmol/L）HBV DNA载量（IU/mL）CHB组30182.84±17.35*35.59±11.36*5.94±0.81 HBV相关性肝硬化组3065.72±10.41*#329.50±83.82*#3.73±0.59#正常组3020.39±4.55#12.29±4.07#--

2.4 对各组受试者的外周血Th17细胞频率与其他指标相关性的分析 进行相关性分析的结果显示，各组受试者的外周血Th17细胞频率与其IL-17的水平呈正相关（P＜0.05），与其ALT的水平、TBIL的水平及HBV DNA的载量无明显的相关性（P＞0.05）。详情见表4。

表4 对各组受试者的外周血Th17细胞频率与其他各项指标相关性的分析

3 讨论

乙肝是临床上最常见的病毒性肝炎，具有病程长、治疗周期长、易复发等特点，可对患者的健康及生活造成严重的影响。乙肝患者在发病的早期其临床症状较隐匿，其病情需经肝功能检查、病毒载量检测等多项检查才能得到确诊。如何及早确诊乙型肝炎患者的病情，改善其预后，阻止其病情进展为肝硬化是进行临床研究的重要课题。研究发现，CHB患者的机体对HBV的清除能力不足是导致HBV感染持续存在的主要原因，其机体的免疫机制异常与其Th1和Th2细胞的免疫应答失调具有一定的关联性。最新的研究成果表明，CHB患者外周血中Th1细胞的占比与健康人相比无明显的差异性，且与其病情的严重程度无明显的关联性。可见，慢性HBV感染不是由单一因素导致的，此病患者可能是在较多免疫机制的影响下发生持续的肝脏损伤[3]。

Th17是有促炎作用的CD4+T淋巴细胞亚群，具有促进人体内IL-17等炎症介质的分泌等作用。本次研究的结果显示，HBV相关性肝硬化组患者外周血中Th17细胞的频率显著高于CHB组患者，CHB组患者外周血中Th17细胞的频率显著高于正常组受试者。可见，随着HBV感染者肝脏损伤程度的加剧，其外周血Th17细胞频率及外周血、肝组织内IL-17的水平可逐渐上升。IL-17除具有促炎的作用外，还可诱导IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、趋化因子、金属蛋白酶的生成，加速局部组织中炎症细胞的浸润与组织损伤。本研究的结果显示，各组受试者的外周血Th17细胞频率与IL-17的水平呈正相关（P＜0.05）。可见，Th17细胞可促进IL-17的表达，在肝脏损伤的发生发展中可发挥重要的作用。有学者发现，人的外周血Th17细胞频率与ALT的水平有一定的相关性[4]。但本研究的结果显示，各组受试者的外周血Th17细胞频率与ALT、TBIL的水平及HBV DNA的载量均无明显的相关性。这可能与本研究的样本量有限且纳入的CHB患者病情较轻，其外周血Th17细胞频率与ALT的水平等肝功能指标的关联性不明显有关。Wang等人[5]指出，患者发生肝损伤的部位中Th17细胞的含量可显著增多且其含量与发生炎症反应的程度呈正相关。可见，对Th17细胞进行靶向调节有望为治疗CHB及HBV相关性肝硬化新的策略。

综上所述，随着CHB及HBV相关性肝硬化患者肝损伤程度的加重，其外周血中Th17细胞的频率可显著增高。Th17细胞诱导的IL-17分泌增多可能是导致肝损伤发生发展的主要原因。

[1]王爱珍, 彭国平. 慢性乙肝患者外周血 Treg/Th17 及相关细胞因子的变化[J]. 中国现代医生, 2013, 51(4): 108-110.

[2]金磊, 张纪元, 孙红启, 等. Th17 细胞在乙肝肝硬化患者中的免疫致病机制研究[J]. 解放军医学杂志, 2013, 38(1): 62-65.

[3]刘艳琼, 杨小安, 邹勇, 等. 慢乙肝患者外周血中 Th17细胞趋化因子受体的表达水平[J]. 中华实验和临床病毒学杂志,2014, 28(3): 161-163.

[4]林伟研, 倪进东,唐豪,等.Th17细胞因子IL-17A与乙肝疫苗无/弱应答关联的研究[J]. 实用预防医学, 2014, 21(8):904-905.

[5]Wang B, Zhao X P, Fan Y C, et al. IL-17A but not IL-22 suppresses the replication of hepatitis B virus mediated by over-expression of MxA and OAS mRNA in the HepG2.2.15 cell line[J]. Antiviral research, 2013, 97(3): 285-292.