高效液相色谱法测定三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ的含量



高效液相色谱法测定三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ的含量

吴莉1江伟1刘永忠2

（1江西省上高县人民医院上高336400；2江西中医药大学南昌330006）

摘要：目的：建立高效液相色谱法测定三七血伤宁分散片中主要成分重楼皂苷Ⅰ的含量。方法：Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（40∶60）为流动相；检测波长203nm；流速：l ml/min；柱温：40℃。结果：重楼皂苷Ⅰ在具有良好的线性关系（r=0.9986，n=6）；平均加样回收率为99.68%（n=6），说明回收率良好。结论：用高效液相色谱法测定三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ，方法简便，重现性好。

关键词：三七血伤宁分散片；重楼皂苷Ⅰ；HPLC法；含量测定

三七血伤宁分散片由三七血伤宁胶囊经改变剂型加工制成。分散片具有多种优良性能，在水中可迅速崩解，均匀分散，相对于普通固体制剂，具有服用方便、溶解吸收快速、生物利用度高、能降低药物的不良反应等特点[1]。而且，它制备简单，工艺和普通片剂相同，对生产设备无特殊要求。三七血伤宁胶囊临床上主要用于止血镇痛、祛瘀生新，对瘀血阻滞、血不归经之各种血证及瘀血肿痛有良好疗效，具有凉血、收涩止血之功效[2]。

1　仪器与试剂

Waters高效液相色谱仪（515型双元泵，996光电二极管矩阵检测器，7725进样阀，Waters色谱工作站）；Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；EJ-2000电子分析天平（日本AND）。乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），水（重蒸馏水）。三七血伤宁分散片（自制，批号：20140801、20140802、20140803、20140804）；重楼皂苷Ⅰ（上海一基生物试剂有限公司，批号：200802）。

2　实验方法

用高效液相色谱法测定自制三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ的含量[3~5]。

2.1色谱条件Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈－水（40∶60）；检测波长203 nm；流速：l ml/min；柱温：40℃。

2.2对照品溶液的制备精密称取对照品重楼皂苷Ⅰ适量，加甲醇适量使之完全溶解，制成每1 ml 含0.5 mg重楼皂苷Ⅰ的溶液，备用。

2.3供试品液的制备随机取三七血伤宁分散片10片，称重，研细，精密称取适量（约相当于重楼皂苷Ⅰ125 mg），置50 ml具塞烧瓶中，加40 ml甲醇，超声处理40 min（功率250 W，频率25 kHz）。取出后放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀后过滤，甲醇洗涤3次，合并滤液，以0.45 μm微孔滤膜滤过，25 ml甲醇定容，即得。

2.4回收率实验取一定量供试品，采用加样回收法，加入一定量对照品溶液，按供试品溶液的制备进行实验，n=6，本品所拟的含量测定方法测定均有良好的回收率。见表1。

表1　三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ回收率试验结果

2.5标准曲线的测定精密称取对照品5.08 mg 置5 ml定量瓶中，加甲醇使之完全溶解，并稀释至刻度，摇匀。准确吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、20 μl注入高效液相色谱仪中，测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，将进样量与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y=2 130 407.3X+2 658.65，r=0.998 6，重楼皂苷Ⅰ在2.032~20.320 μg范围内进样量与峰面积有较好的线性关系。

2.6样品含量测定精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μl，按2.1项下条件，分别注入高效液相色谱仪进行含量测定，测定4批三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ含量。见表2。

表2　三七血伤宁分散片中重楼皂苷Ⅰ含量测定结果

3　讨论

三七血伤宁中的重楼为百合科重楼属植物华重楼ParispolyphyllaSmithvar.chinenisi（Franch）Hara、云南重楼ParispolyphyllaSmithvar.yunnanensis （Franch.）Hand.-Mazz.或七叶一枝花ParispolyphyllaSmithvar,chinensis（Franch.）Hara的干燥根茎。具有消肿止血、清热解毒、凉肝定惊的功效。是国家重点保护的野生植物药材品种，是著名的中成药云南白药、季德胜蛇药的主要成

分。现代药理研究表明重楼皂苷Ⅰ具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、镇静、镇痛、降低胆固醇、降低血压、止血等作用[6]，黄河以南大部分省区有产，但各地的药材中重楼皂苷Ⅰ含量不同[7]。

三七血伤宁为常用中成药，我们对其进行剂型改革，研制成分散片，分散片与原胶囊、散剂等剂型相比有许多优点，可以补充原产品的形式，满足患者的需要，本实验是为该品的质量控制建立方法。

由于重楼中的甾体皂苷易溶于水，易产生大量泡沫，给提取操作带来一定困难，而重楼皂苷Ⅰ（分子式：C44H70O16，分子量855.02）不溶于水、石油醚，可溶于甲醇，所以用甲醇提取简单易行。本实验建立了重楼皂苷Ⅰ的HPLC含量测定方法，回收率好，结果准确，证明该方法可控制本产品的质量。

参考文献

[1]催德福.药剂学[M].北京:人民卫生出版社,2011.276

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].北京:化学工业出版社,2005.401

[3]龙国友,杨云,鲁静.HPLC测定热毒清片中重楼皂苷I的含量[J].中成药,2005,27(10):1155-1157

[4]丘明明.高效液相色谱法测定三七血伤宁散中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的含量[J].中南药学,2010,8(1):85-86

[5]黄芸,崔力剑,刘伟娜,等.HPLC-ELSD法分析重楼商品药材中甾体皂苷的含量[J].中国中药杂志,2006,31(15):1230-1233

[6]李晞,王继红,亚雄.重楼提取液对结肠癌SW480细胞增殖的影响及其作用机制[J].中国生物制品学杂志,2010,23(6):619-622

[7]李峰,蒋桂华.中药商品学[M].北京:中国医药科技出版社,2014.173-174

●综述与进展●

收稿日期：（2015-06-03）

doi:10.13638/j.issn.1671-4040.2015.09.055

文献标识码：B

中图分类号：R284.1