复方氨酚烷胺制剂中人工牛黄的薄层鉴别

王书玉 窦佳 栾爽 董莉 董煜 钱小平

复方氨酚烷胺制剂中人工牛黄的薄层鉴别

王书玉 窦佳 栾爽 董莉 董煜 钱小平

目的探讨复方氨酚烷胺制剂人工牛黄中的胆红素薄层鉴别方法。方法将供试液点于硅胶 G 薄层板上, 以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)为展开剂展开, 晾干, 置日光下检视。结果供试品色谱中, 在与对照品相应的位置上均显示相同颜色的斑点。253批复方氨酚烷胺制剂中, 有1批在与对照品及对照药材色谱相应的位置上, 无黄色斑点, 未检出胆红素；若采用原标准中人工牛黄鉴别方法对该批样品进行鉴别, 呈正反应。结论薄层鉴别法鉴别复方氨酚烷胺制剂人工牛黄中的胆红素重复性好、专属性强, 可作为复方氨酚烷胺制剂中人工牛黄的鉴别方法。

复方氨酚烷胺制剂; 胆红素; 薄层鉴别

复方氨酚烷胺制剂包括复方氨酚烷胺片、复方氨酚烷胺胶囊、小儿复方氨酚烷胺片及复方氨酚烷胺颗粒, 其主成分种类(对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、咖啡因、人工牛黄)、配比(125∶50∶1∶7.5∶5)均一致。其中对乙酰氨基酚能抑制前列腺素合成, 有解热镇痛的作用；金刚烷胺可抗“亚-甲型”流感病毒, 抑制病毒繁殖；咖啡因为中枢兴奋药, 能增强对乙酰氨基酚的解热镇痛效果, 并能减轻其他药物所致的嗜睡、头晕等中枢抑制作用；马来酸氯苯那敏为抗过敏药, 能减轻流涕、鼻塞、打喷嚏等症状；人工牛黄具有解热、镇惊作用。上述诸药配伍制成复方, 可增强解热、镇痛效果, 解除或改善感冒所致之各种症状, 主要用于缓解普通感冒及流行性感冒引起的发热、头痛、鼻塞、咽痛等症状, 也可用于流行性感冒的预防和治疗。国内共有132家药厂生产该品种的各种制剂, 为国内应用范围最广的抗感冒药之一。

为更好地控制产品质量, 作者采用薄层鉴别法鉴别人工牛黄中的胆红素, 该方法重复性好、专属性强, 简便高效,结果准确可靠。

1 材料与方法

1.1 材料 仪器：薄层数码成像系统(visualizer, 瑞士CAMAG公司), BP211D 电子天平(Sartorius 公司)。试剂：所用试剂石油醚(30～60℃)、环己烷、乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸、甲苯、三氯甲烷、甲酸乙酯、甲酸等(均购自安徽安特生物化学股份有限公司)均为分析纯。柱层析硅胶 G、国产硅胶G 预制板(均购自青岛海洋化学有限公司)及进口硅胶G 预制板(购自美国Merck 公司)。人工牛黄对照药材(121197-200903)、胆红素对照品(100077-200805)(均购自中国药品生物制品检定研究院)；复方氨酚烷胺片样品128 批, 复方氨酚烷胺胶囊样品110 批, 小儿复方氨酚烷胺片样品7批及复方氨酚烷胺颗粒样品8批, 共计253批供试品。

1.2 供试品溶液的制备 分别取复方氨酚烷胺片10片、复方氨酚烷胺胶囊10粒、小儿复方氨酚烷胺片10片及复方氨酚烷胺颗粒10袋, 混匀, 研细, 称取细粉(相当于人工牛黄30 mg), 加氯仿20 ml超声提取, 过滤, 滤纸和滤渣用少量氯仿洗涤, 合并滤液和洗液, 室温挥干, 残渣用氯仿2 ml搅拌使胆红素溶解并迅速过滤, 滤纸和滤渣用1 ml氯仿洗涤仍迅速过滤, 合并滤液和洗液作为供试品溶液(避光, 临用新制)。

1.3 对照药材及对照品溶液制备 取人工牛黄对照药材10.12 mg, 加氯仿1 ml, 超声处理 10 min, 静置, 取上清液作为人工牛黄对照药材溶液；另取胆红素对照品21.33 mg, 加氯仿10 ml溶解, 作为胆红素对照品溶液(避光, 临用新制)。

1.4 空白辅料溶液的制备 选取处方中几种最常用辅料：滑石粉、硫脲、淀粉、糊精、羧甲淀粉钠、十二烷基磺酸钠、吐温-80、硬脂酸镁、蔗糖、微晶纤维素、二氧化硅, 称取适量(约相当于3片量), 研细, 按“1.2”项下的处理方法制备,作为空白辅料溶液。

1.5 阴性对照溶液的制备 依照处方配比, 称取对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、咖啡因配制成缺少人工牛黄的阴性样品, 研细, 按“1.2”项下的处理方法制备,作为阴性对照溶液。

1.6 试验方法 照薄层色谱法(中国药典2010版二部附录ⅤB)试验, 吸取四种制剂的供试品溶液、空白辅料溶液、阴性对照溶液及人工牛黄对照药材、对照品溶液各10 μl, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 立即检视。

2 结果

置日光下检视, 供试品色谱中, 在与对照品及对照药材色谱相应的位置上, 显相同的黄色斑点；空白辅料无干扰；阴性对照无干扰, 见图1。4种制剂应用本方法主斑点均获得理想Rf值。253批复方氨酚烷胺制剂中, 有1批在与对照品及对照药材色谱相应的位置上, 无黄色斑点, 未检出胆红素；若采用原标准中人工牛黄鉴别方法对该批样品进行鉴别,呈正反应。

图1 4种制剂TLC色谱图(立即检视)

3 讨论

目前复方氨酚烷胺制剂中对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、咖啡因质量基本稳定, 只是人工牛黄存在问题较大, 因为人工牛黄价格昂贵, 且为动物药, 成分繁多,质量控制复杂；而现行标准中, 复方氨酚烷胺片［1］、复方氨酚烷胺胶囊［2］仅对人工牛黄中的胆酸进行化学鉴别, 小儿复方氨酚烷胺片［3］、复方氨酚烷胺颗粒［4］仅对胆酸、猪去氧胆酸进行薄层鉴别, 未对人工牛黄中价格较贵、治疗效果明显的胆红素进行控制, 给企业在生产中弄虚作假提供可乘之机, 其手法十分巧妙, 用胆酸代替人工牛黄, 鉴别实验却仍可成正反应, 采用现行药品标准检验很难发现。以此不仅蒙骗消费者, 尚且能逃过监管机构的监督。因此, 制定检验方法,修订药品质量标准, 对于确保人民群众的用药安全有效非常必要。

3.1 样品前处理 复方氨酚烷胺制剂处方中对乙酰氨基酚占比最大, 人工牛黄占比较小, 前者是后者的25倍, 兼之其他几种组分的干扰, 使直接点样时展开斑点拖尾严重且胆红素浓度太低斑点不清晰；胆红素见光受热均易氧化, 在酸液中亦容易降解, 不溶于水, 溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳及碱液中, 微溶于乙醇、乙醚, 作者尝试几种不同前处理［5,6］方法对样品进行前处理, 以期起到既使胆红素稳定又利于浓缩点样的目的。最终采取静置挥干氯仿进行浓缩, 加少量氯仿溶解并过滤以除去干扰, 展开效果较好。同时整个操作过程注意避光。

3.2 展开剂的选择 作者参考文献［6-9］分别采用环己烷:乙酸乙酯∶甲醇∶冰醋酸(10∶3∶0.1∶0.1)、甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)、石油醚(30～60℃)-甲苯-冰醋酸(15∶5∶0.5)、石油醚(30～60℃)-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(20∶3∶5∶1)等展开系统展开。最终以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.5)为展开剂, Rf值适中, 斑点清晰无干扰, 重现性好。

3.3 薄层板的选择 分别采用自制硅胶 G 薄层板、国产硅胶G 预制板及进口硅胶G 预制板进行展开实验, 自制硅胶 G薄层板及国产硅胶G 预制板均有拖尾现象, 且在同一块板上进行多批检样时易出现“边缘效应”；进口硅胶G 预制板斑点清晰无拖尾, 在同一块板上进行多批检样时无“边缘效应”, Rf值均匀, 稳定性好, 能够适应大批量检验工作需要。

［1］国家药典委员会.化学药品地方标准上升国家标准.第16册.北京:化学工业出版社, 2002:278-279.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准(二部).第5册. 中华人民共和国卫生部药典委员会, 1996:60-61.

［3］国家药典委员会.化学药品地方标准上升国家标准.第13册.北京:化学工业出版社, 2002:128.

［4］国家药典委员会.化学药品地方标准上升国家标准.第3册.北京:化学工业出版社, 2002:203-204.

［5］王文琼, 刘颖, 高华宏, 等.牛黄解毒片等四种制剂中牛黄的薄层鉴别.湖北中医杂志, 2004, 26(2):51.

［6］侯惠婵, 汪杰, 顾利红.猴枣牛黄散中牛黄的质量控制研究.中药新药与临床药理, 2007, 18(2):123-126.

［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:中国医药科技出版社, 2010:6.

［8］朱天明, 姚英.薄层色谱法鉴别感冒通片中人工牛黄.江苏药学与临床研究, 2002, 10(2):11-13.

［9］兰婉玲, 张罗红, 徐燕.牛黄解毒片中人工牛黄的薄层鉴别.中药与临床, 2010, 1(3):26.

Thin-layer chromatography of artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations

WANG Shu-yu, DOU Jia, LUAN Shuang, et al.Dalian City Institute for Drug Control, Dalian 116000, China

ObjectiveTo investigate the bilirubin thin-layer chromatography of artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations.MethodsThe test liquid was dropped on a silica gel G thin layer plate with methylbenzene-ethyl acetate-glacial acetic acid (10∶1∶0.5) as the developing solvent.It was inspected under sunlight after dried in air.ResultsThe chromatogram of the test liquid contained the same color spots as the reference chromatogram.Among 253 batches of compound acetaminophen alkyl amine preparations, there was 1 batch without yellow spots and no bilirubin on corresponding location of reference substance and reference chromatogram.This sample could show positive reaction under chromatography by primary standard for identifying artificial bezoar.ConclusionThin-layer chromatography has good repeatability and high specificity for identifying bilirubin in artificial bezoar among compound acetaminophen alkyl amine preparations.It can be used as the identification method for artificial bezoar in compound acetaminophen alkyl amine preparations.

Compound acetaminophen alkyl amine preparations; Bilirubin; Thin-layer chromatography

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.04.181

2014-10-30］

116000 大连市药品检验所