两种曲安奈德新型脂质载体经皮渗透性比较*

王国强，梁兆丰，班俊峰，邓广汉，林嘉成，吕竹芬

(1.广东省药物新剂型重点实验室/广东药学院药物研究所，广州 510006；2.广东药学院图书馆，广州 510006)

两种曲安奈德新型脂质载体经皮渗透性比较*

王国强1，梁兆丰1，班俊峰2，邓广汉1，林嘉成1，吕竹芬1

(1.广东省药物新剂型重点实验室/广东药学院药物研究所，广州 510006；2.广东药学院图书馆，广州 510006)

目的 比较曲安奈德(TAA)纳米脂质组装体(TAA-LPPs)、TAA乙醇脂质体(TAA-Ethosomes)的体外透皮特性。方法 制备TAA-LPPs和TAA-Ethosomes，采用透射电镜观察其形态，激光粒度仪测定其粒径分布，改良Franz单室扩散池进行离体大鼠皮肤渗透实验，测定两种曲安奈德脂质载体的累积透过量及在皮肤内的滞留量。结果 TAA-LPPs和TAA-Ethosomes均呈球形或类球形，平均粒径分别为(99.9±1.3)和(105±1.4) nm。TAA-LPPs、TAA-Ethosomes和TAA-混悬液的累积透过量分别为(53.59±4.40)，(87.03±4.87)，(30.54±8.61) μg·(cm2)-1，32 h后皮肤内药物滞留分别为(1.02±0.13)，(0.62±0.08)，(0.55±0.17)μg·(cm2)-1。结论 与TAA-Ethosomes比较，TAA-LPPs更利于曲安奈德经皮局部给药，减少药物全身吸收。

曲安奈德；纳米脂质组装体；乙醇脂质体；经皮渗透

曲安奈德(triamcinolone acetonide，TAA)是治疗增生性瘢痕的皮质类固醇激素药物[1-2]。其治疗一般以瘢痕下注射为主，注射时会伴有剧烈疼痛，同时还会出现皮肤萎缩、毛细血管扩张等并发症。纳米脂质组装体(lipoparticles，LPPs)是结合脂质囊泡和纳米粒各自特性，具有脂质外壳并以纳米粒为核心的新型复式药物载体[3]，这种复式包裹的结构具有更高的稳定性，加入表面活性剂还可增加磷脂膜的流动性，使其具有变形脂质体的柔韧性，可增加药物对皮肤的透过。LPPs中的纳米粒核心具有长效缓释性能，可提高药物在皮肤角质层下的保留，避免更多药物经皮全身吸收，实现局部给药治疗的效果[4]。乙醇脂质体(ethosomes)是由TOUITOU等[5]在1996年提出的一种具有脂质双分子层结构的新型囊泡药物载体，其透皮速率及皮肤滞留量较普通脂质体均显著提高，是皮肤局部用药的理想载体。笔者在本实验制备了TAA-LPPs和TAA-Ethosomes，采用改良Franz单室扩散池法对两种新型脂质载体的体外透皮吸收进行对比评价。

1 材料与方法

1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠，体质量180～200 g，购于广州中医药大学实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2013-0020。动物合格证号：No.44005900000555，温度18～22 ℃，相对湿度50%～70%，动物房常规饲养1周。

1.2 试药 TAA原料(天津金汇药业，含量：99.9%，批号：TI101205)；TAA对照品(中国食品药品检定研究院，含量：98.8%，批号：100055-201103)；聚乳酸羟基乳酸共聚物(济南岱罡生物科技有限公司，聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactide-co-glycolide)acid，PLGA]乳酸：羟基乙酸=70：30，批号：2012053011)；大豆卵磷脂S-100(德国Lipoid公司，批号：1032591/906)，α-生育酚(阿拉丁试剂有限公司，批号：23959)，其他试剂均为分析纯。

1.3 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司，DAD检测器)；Delsa Nano C激光粒度仪(美国Beckman Coulter公司)；TK-12B透皮扩散实验仪(上海锴凯科技贸易有限公司)；JEM-100CXII透射电子显微镜(日本电子株式会社)；JY92-II超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技有限公司)。十万分之一天平(感量0.01 mg)和万平之一天平(感量0.1 mg)。

1.4 TAA脂质载体的制备

1.4.1 纳米脂质组装体混悬液的制备 参考文献[6]，采用自乳化溶剂挥发法结合薄膜分散法制备TAA-LPPs，先取处方量TAA及PLGA溶于丙酮-乙醇中，搅拌下缓慢注入含聚山梨酯-80的水溶液中，继续搅拌6 h，挥去溶剂，制得纳米粒悬浮液。另取大豆卵磷脂、α-生育酚至圆底烧瓶中，加入适量无水乙醇溶解，于40 ℃旋转蒸发，使其形成脂质薄膜层，加入纳米粒悬浮液洗脱脂质薄膜，直至洗脱完全。冰水浴下超声3 min，即得(每毫升含TAA 0.5 mg)。

1.4.2 TAA乙醇脂质体混悬液的制备 参考文献[5]，采用注入法制备TAA-Ethosomes。将TAA、大豆卵磷脂和聚山梨酯-80溶于乙醇中，恒温40 ℃搅拌下缓慢注入纯化水，注完后继续搅拌10 min，冰水浴下超声3 min，即得(每毫升含TAA 0.5 mg)。

1.4.3 TAA混悬液的制备 取适量经微粉化的TAA混于30%聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)400溶液中，采用超声波细胞粉碎机超声处理，即得(每毫升含TAA 0.5 mg)。

1.5 TAA脂质载体的理化表征

1.5.1 外观形态 采用透射电镜观察TAA脂质载体的形态，取样品溶液滴加到专用铜网上，用1.5%磷钼酸染色后置于电镜下观察并拍摄照片。

1.5.2 粒径分布 将制得的TAA脂质载体稀释适当倍数，采用Delsa Nano C激光粒度仪测定其粒径分布。

1.6 TAA分析方法的建立

1.6.1 色谱条件 照《中华人民共和国药典》[7]方法。采用Kromasil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-水(525：475)为流动相，检测波长为240 nm，柱温40 ℃，流速1.0 mL·min-1，进样量20 μL。

1.6.2 溶液的制备

1.6.2.1 对照品溶液 取TAA对照品10.18 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得203.6 μg·mL-1对照品贮备液。

1.6.2.2 供试品溶液 分别取TAA-LPPs、TAA-Ethosomes和TAA混悬液各1 mL于Franz扩散池的离体皮肤上，按“1.7.2”项条件实验，分别得到药物皮肤渗透量和皮肤滞留量的供试品溶液[8]。

1.6.2.3 阴性对照溶液 取纯化水1 mL于Franz扩散池离体皮肤，其余同供试品溶液的制备，分别得到药物皮肤透过量的阴性对照溶液和皮肤滞留药量的阴性对照溶液。

1.6.3 专属性实验 分别取“1.6.2”项对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液进样测定，记录色谱图(图1)。阴性对样品测定无干扰。

1.对照品溶液；2.TAA-LPPs；3.TAA-Ethosomes，4.TAA混悬液；5.阴性对照溶液；a.TAA

1.6.4 线性关系考察 精密量取“1.6.2”项TAA对照品贮备液适量，分别用甲醇稀释成浓度为0.254 5，0.509，1.018，5.09，10.18，20.36，40.72 μg·mL-1系列对照品溶液，按“1.6.1”项色谱条件进样测定，以峰面积(A)与浓度(C)进行线性回归。得回归方程A=208.7C+34.65，(r=0.999 8)。结果表明，药物浓度在0.254 5～40.72 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。检测限按信噪比3：1计为1.8 ng·mL-1，定量限按信噪比10：1计为5.9 ng·mL-1。

1.6.5 重复性实验 精密量取1 mL TAA-LPPs混悬液于Franz扩散池的离体皮肤上，平行6份，按“1.7.2”项条件实验，32 h后取接收液过滤后进样测定，测得药物透过浓度为9.95 μg·mL-1，RSD为6.36%。即单位面积药物透过量为54.26 μg·(cm2)-1，RSD为6.36%。

1.6.6 回收率实验 精密量取 20. 36 μg·mL-1对照品溶液 1，2，3 mL 各 3 份于 10 mL 量瓶，分别作为低、中、高浓度组，加入“1.6.2”项药物皮肤透过量阴性对照溶液稀释至刻度。 滤过，取续滤液进样测定，根据测得量与加入量的比值计算各组回收率(n=3)和RSD。结果低、中、高浓度组回收率(RSD)分别为95.17%(1.33%)， 95.57%(2.53%)，97.52%(1.15%)。

1.6.7 稳定性实验 取“1.6.5”项下同一供试品溶液，分别于0，1，3，6，9，12，24 h进样测定，测得RSD为0.68%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

1.7 透皮扩散实验

1.7.1 离体大鼠皮肤的制备 将大鼠用乙醚麻醉后断脊椎处死，用8%硫化钠溶液作脱毛剂脱毛，脱毛后洗净残留脱毛剂。小心剥离大鼠腹部皮肤并刮去皮下脂肪等残余物，0.9%氯化钠溶液冲洗干净，4 ℃保存备用。

1.8 统计学方法 本实验使用SPSS 18.0版统计软件进行数据处理，应用One-Way ANOVA进行多组样本均数的比较，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 透射电镜观察结果 将所制得的TAA-LPPs、TAA-Ethosomes及TAA混悬液在透射电镜下观察，结果见图2。结果可见其形状规整，大多数呈球形或类球形，TAA-LPPs和TAA-Ethosomes的粒径约100 nm，TAA混悬液粒径约200 nm。

2.2 粒径分布测定结果 TAA-LPPs、TAA-Ethosomes和TAA混悬液的平均粒径分别为(99.9±1.3)，(105.0±1.4)，(240.7±2.2) nm，多分散系数(polydispersity index，PDI)分别为(0.268±0.008)，(0.068±0.003)，(0.464±0.019)，结果见图3。三者粒径分布均呈单一峰，粒径约100～300 nm，其结果与透射电镜结果一致。

2.3 体外经皮渗透实验 以TAA混悬液为对照，研究TAA-LPPs和TAA-Ethosomes的经皮渗透性质，结果见图4和表1。从结果可知，TAA-Ethosomes的32 h透过量和透皮速率大于TAA-LPPs和TAA混悬液，且随着时间的推移透过量差异越来越明显。累积透过量依次为：TAA-Ethosomes> TAA-LPPs>TAA 混悬液，三者透皮速率及32 h累积渗透量均差异有统计学意义(P<0.05)。32 h后皮肤内药物滞留量依次为：TAA-LPPs>TAA-Ethosomes>TAA混悬液，TAA-LPPs在皮肤内的滞留量大于后两者，差异有统计学意义(P<0.05)。

A.TAA-LPPs(×100 000)；B.TAA-Ethosomes(×100 000)；C.TAA混悬液(×50 000)

A.TAA-LPPs；B.TAA-Ethosomes；C.TAA混悬液

图4 TAA离体皮肤累积渗透曲线(n=3)

Fig.4 Accumulative transdermal penetration curve of TAAinvitro(n=3)

表1 TAA脂质载体的经皮渗透特性

Js为稳态透皮速率，Qr和Qs分别为32 h药物经皮累积透过量和药物在皮肤内滞留量；与TAA混悬液组比较，*1P<0.05；与TAA-Ethosomes组比较，*2P<0.05

Js is the steady percutaneous speed, Qr and Qs is accumulative transdermal penetration and retention amount in the skin respectively；Compared with TAA suspention group，*1P<0.05；compared with TAA-Ethosomes group，*2P<0.05

3 讨论

笔者前期实验中测得TAA在1%十二烷基硫酸钠、20%PEG400和20%乙醇0.9%氯化钠溶液中的溶解度(91.34，522.47和544.66 μg·mL-1)均可达到TAA的漏槽条件，故在筛选透皮实验的接收液时曾尝试使用以上3种溶液，结果发现20%乙醇0.9%氯化钠溶液具有抑菌防腐的作用，可防止大鼠离体皮肤长时间实验过程中产生异味或腐烂，故最终选用20%乙醇0.9%氯化钠溶液作为透皮实验的接收溶液。

TAA-Ethosomes对TAA的经皮渗透促进作用最为显著，原因是其含有高浓度的乙醇，通过软化角质层，使离体皮肤紧密排列的脂质分子结构发生改变，同时也可增加磷脂膜的流动性和柔韧性，增加药物对皮肤的透过率[9]。

体外经皮渗透实验表明，TAA-Ethosomes的药物累积透过量及透皮速率高于TAA-LPPs，但皮内药物滞留量低于TAA-LPPs，因而对于增生性瘢痕的治疗，TAA-LPPs将更有利于TAA的经皮局部给药，减少药物全身吸收。

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DOI 10.3870/yydb.2015.03.022

Comparison of Transdermal Penetration of Two New Kinds of Triamcinolone Acetonide Lipid Carriers

WANG Guoqiang1，LIANG Zhaofeng1，BAN Junfeng2，DENG Guanghan1，LIN Jiacheng1， LYU Zhufen1

(1.KeyLaboratoryofAdvancedDrugDeliveryofGuangdongProvince/InstituteofMaterialMedica，GuangdongPharmaceuticalCollege，Guangzhou510006，China；2.LibraryofGuangdongPharmaceuticalCollege，Guangzhou510006，China)

Objective To compare transdermal penetration of triamcinolone acetonide liposparticles (TAA-LPPs) and TAA-Ethosomesinvitro. Methods The TAA-LPPs and TAA-Ethosomes were produced and the morphology was observed by transmission electron microscope，particle size was detected by laser particle analyzer.The percutaneous permeabilityinvitrowas tested by modified Franz diffusion pools.The amount of penetrated triamcinolone acetonide and the retention in the skin were determined by HPLC. Results The shape of TAA-LPPs and TAA-Ethosomes was almost spherical with mean diameter of (99.9±1.3) and (105±1.4) nm, respectively.The cumulative transdermal penetration of TAA-LPPs, TAA-Ethosomess and TAA suspension was (53.59±4.40),(87.03±4.87),and (30.54±8.61) μg·(cm2)-1, respectively .The drug retention in the skin after 32 h was (1.02±0.13), (0.62±0.08), (0.55±0.17) μg·(cm2)-1, respectively． Conclusion TAA-LPPs is better for transdermal administration of triamcinolone acetonide by reducing systemic absorption of the drug.

Triamcinolone acetonide；Lipoparticles；Ethosomes；Percutaneous penetration

2013-11-26

2014-01-20

*广东省教育厅科技计划资助项目(GCZX-A0807)

王国强(1988-)，男，辽宁丹东人，在读硕士，主要从事药物制剂新技术与新剂型的研究。电话：020-39352513，E-mail:wanggq_88@126.com。

吕竹芬(1965-)，女，教授，主要从事药物制剂新技术与新剂型的研究。电话：020-39352506，E-mail: luzhufen@163.com。

R944.9；R986

B

1004-0781(2015)03-0361-05