加权评分正交实验优选益胃即型凝胶提取工艺

徐宏峰，杨全伟，刘新国，余南才，张耕

(武汉市第一医院药学部，武汉 430022)

加权评分正交实验优选益胃即型凝胶提取工艺

徐宏峰，杨全伟，刘新国，余南才，张耕

(武汉市第一医院药学部，武汉 430022)

目的 优选益胃即型凝胶中丹酚酸B的水回流提取工艺条件。方法 在单因素考察基础上，以君药丹参中水溶性成分丹酚酸B提取量和干膏得率进行加权评分，作为综合考察指标，采用高效液相色谱法测定丹酚酸B的含量，优选其正交实验提取条件。结果 优选工艺为加10倍水浸泡1 h，回流提取2次，每次1 h。结论 优选工艺所得丹酚酸B含量和干膏得率较高，工艺稳定可行。

益胃即型凝胶；丹酚酸B；正交实验；提取工艺；色谱法，高效液相

益胃即型凝胶为武汉市第一医院国家级重点专科脾胃病科的临床处方，是在四君子汤合左金丸基础上化裁而来，主要用于益气和胃，活血止痛，治疗脾胃虚弱、血瘀胃痛、体倦神疲、嗳腐吞酸、缠绵反复。可提高溃疡愈合质量，与三联疗法合用，提高幽门螺杆菌根除率。该方主要由丹参、太子参、姜黄连、大黄等中药组成，具有益气和胃之功，结合胃中的内环境呈酸性，故制备成pH敏感型凝胶，药物直达病灶，能更好发挥其治疗作用。为了优选其最佳提取工艺条件，以方中君药丹参中水溶性成分丹酚酸B的提取量和干膏提取率进行加权评分，作为综合考察指标，采用高效液相色谱法测定其含量，结合提取的干膏得率，以加水量、提取时间、浸泡时间、提取次数分别进行单因素考察，确定其提取因素水平，以L9(34)进行正交实验，实验方法与结果报道如下。

1 仪器与试药

Waters e2695系列高效液相色谱仪(美国)；电子天平：Sartorius ME215S(Max210 g，感量：0.01mg)；丹酚酸B对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110715-201016)；丹参、太子参、白术、茯苓、姜黄连、大黄、仙鹤草、炙甘草、制吴茱萸(湖北天济医药有限公司提供)；甲醇、乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：HYPERSIL-C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：乙腈-甲醇-水-甲酸(7：25：67：1)，流速1.0 mL·min-1，波长286 nm，柱温30 ℃

2.2 溶液的制备

2.2.1 丹酚酸B对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品13.94 mg，置50 mL量瓶中，加75%甲醇溶解并定容，制成每毫升含丹酚酸B 0.278 8 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 按处方比例称取药材121.5 g，用10倍量的水，浸泡1 h，回流提取2次，每次提取1 h，水回流提取，收集所得药液，浓缩至一定程度，加苯甲酸钠0.6 g，调整全量至200 mL，摇匀，即得样品。精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。

2.2.3 丹参药材溶液的制备 精密称取丹参粉末(过三号筛)0.247 3 g，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用75%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[1]。

2.2.4 丹参阴性对照溶液的制备 按处方量称取不含丹参的其余药材，用10倍量的水，浸泡1 h，回流提取2次，每次提取1 h，收集所得药液，浓缩至一定程度，加苯甲酸钠0.6 g，调整全量至200 mL，摇匀，按丹参药材溶液制法即得。

2.3 方法专属性 吸取对照品溶液、丹参药材溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各10 μL，进样，检测，丹酚酸B对照品、丹参药材溶液、供试品在约18 min出现丹酚酸B色谱峰，丹参阴性对照无干扰，见图1。

A.丹参阴性对照溶液；B.丹酚酸B对照品溶液；C.丹参药材溶液；D.供试品溶液；1.丹酚酸B

图1 4种溶液的HPLC图

2.4 线性关系考察 取上述对照品溶液，精密量取2，3，4，5，10，20 mL，分别至20 mL量瓶中，加75%甲醇定容，摇匀，即得。分别在上述色谱条件下进样10 μL，测定峰面积，以峰面积为纵坐标、对照品浓度为横坐标线性回归，得回归方程：Y=11 143X-23 229，r=0.999 9；表明丹酚酸B在27.88～278.80 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5 精密度实验 精密量取对照品溶液10 mL至20 mL量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。进样10 μL，连续进样6次，记录丹酚酸B峰面积，峰面积RSD=1.02%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性实验 取“2.2.2”项供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12 h进样10 μL，测定峰面积，计算丹酚酸B峰面积RSD=0.49%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 重复性实验 取本品，按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品溶液，测定丹酚酸B的含量，结果平均含量为1.966 4 mg·mL-1，RSD为0.83%，表明本法重复性良好。

2.8 加样回收率实验 取已知含量的供试品溶液6份，摇匀，精密量取1 mL，分别置50 mL量瓶中，各精密加入适量的丹酚酸B对照品，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得，分别进样10 μL，测定并计算回收率，结果平均回收率为97.74%(RSD=1.38%)，结果见表1。

2.9 正交实验 在查阅文献和单因素考察基础上，针对加水量，提取时间，浸泡时间，提取次数4个影响因素，以丹酚酸B含量和干膏得率进行加权评分，权重系数按丹酚酸B、出膏率所占比例75：25来确定(综合评分=丹酚酸B总量/最大丹酚酸B提取总量×75% +出膏得率/最大出膏得率×25%)，以L9(34)表进行正交实验，结果见表2～4。

正交实验结果表明：通过直观分析，4个因素对丹酚酸B提取量、干膏得率，综合评分的影响次序不同，丹酚酸B提取量为D>A>C>B，最佳工艺为A3B3C2D2；干膏得率为D>A>B>C，最佳工艺为A3B3C1D3；综合评分为D>A>C>B，最佳工艺为A3B3C2D2。以综合评分为指标所考察的4个因素中，加水量和提取次数对提取工艺的影响差异有统计学意义。

综合考虑，最终确定最佳工艺为A3B1C2D2，即浸泡1 h，加10倍量水，提取2次，每次1 h。

根据确定的工艺条件，进行3批小试、中试验证实验，结果见表5，6。按照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅨH项水分测定法第一法(烘干法)测定，测得丹参药材含水量12.69%，丹参药材中含丹酚酸B平均量为42.742 9 mg·g-1。

A.加水量；B.提取时间；C.浸泡时间；D.提取次数；丹酚酸B含量为丹参22.5 g提取量

3 讨论

2010年版《中华人民共和国药典》收载丹参含量测定成分指标为脂溶性成分丹参酮ⅡA和水溶性成分丹酚酸B，本实验为水回流提取，故选择丹酚酸B含量作为考察指标[2]，也有选择对丹参中水溶性成分丹参素钠和原儿茶醛进行测定[3]。本实验采用高效液相色谱法测定丹酚酸B含量，分离效果好，操作简便，稳定性好。

通过正交实验优选提取条件，通过对3批小试及3批中试生产样品中丹酚酸B进行含量测定，丹酚酸B提取率较高，含量稳定，可以为益胃即型凝胶进行工业化大生产提供参考依据。

A.加水量；B.提取时间；C.浸泡时间；D.提取次数；F0.05(2，2)=19.00

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：70-71.

[2] 张昀，刘路，李钦.丹参中丹酚酸B的提取工艺研究[J].中草药，2007，38(8)：1193-1194.

[3] 薛继雄，周晖，刘萌.高效液相色谱法测定消炎灌肠液中丹参水溶性成分的含量[J].医药导报，2005，24(1)：66-67.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.029

2014-05-20

2014-08-29

徐宏峰(1979-)，男，湖北黄陂人，主管中药师，硕士，主要从事中药新制剂新剂型研究。电话：(0)15327269593，E-mail：282215830@qq.com。

张耕(1965-)，男，湖北仙桃人，主任药师，主要从事药物制剂工作。电话：(0)13607167162，E-mail：zhanggeng888@126.com。

R286；TQ460.6

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1004-0781(2015)06-0808-03