三种方法联合检测对新生儿梅毒诊断的应用

朱瑞敏 钟华

三种方法联合检测对新生儿梅毒诊断的应用

朱瑞敏 钟华

梅毒是由梅毒螺旋体(TP, 又称苍白密螺旋体)引起的一种慢性、系统性的性传播疾病, 可通过孕妇胎盘进入胎儿血液引起死胎、流产或新生儿感染, 即先天性梅毒又称胎传梅毒。近年来, 胎传梅毒的发病率有增高趋势, 为更好的辅助临床诊疗,本实验室用梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TPELISA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)两种方法对2080例患儿进行血清学筛查, 阳性标本再用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)法复核, 当结果可疑时, 做发光法TPPA再结合临床症状, 总结出一套可行的对胎传梅毒诊断的实验室方案。

梅毒螺旋体；胎传梅毒；梅毒螺旋体明胶凝集试验；甲苯胺红不加热血清试验；梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验

梅毒(syphilis)的病原体为苍白密螺旋体(treponema pallidum, TP)苍白亚种, 又称梅毒螺旋体, 有螺旋8～20个,体长6～20 μm, 宽0.15～0.25 μm, 运动特征为弯曲移动, 绕轴运动和前后伸缩运动, 属厌氧菌, 体外不易生存, 高温、干燥,常用消毒剂均能将其致死, 但对潮湿和寒冷的耐受性很强。人体受感染后, 梅毒螺旋体很快播散到全身, 几乎可侵犯全身各组织与器官, 临床表现多种多样, 且时显时隐, 早期主要侵犯皮肤及黏膜, 晚期除侵犯皮肤和黏膜外, 还可侵犯心脏、血管及中枢神经系统。

先天性梅毒即胎传梅毒(congenital syphilis, CS)是指孕妇体内梅毒螺旋体由胎盘垂直传播给胎儿所致的一种感染。梅毒孕妇在妊娠内梅毒螺旋体可通过胎盘及脐静脉进入胎儿体内, 引起胎儿在宫内感染, 宫内感染最早可发生在妊娠后7周, 但一般发生在4个月以后, 可引起流产、早产、死胎或分娩胎传梅毒儿。此外, 病期2年以上的梅毒妇女妊娠后仍可传染胎儿, 但传染性比早期梅毒低。本文旨在针对几种梅毒的实验室检查方法, 研究出一套适合基层医院实验室的确诊胎传梅毒的方案, 为临床提供更加及时有力的诊断依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 采集2013年1月～2014年6月鹤岗市人民医院儿科及其他小儿外科0～6岁住院患儿的2080份血清标本。

1.2 仪器与试剂 TRUST试剂购自上海荣盛生物公司, TP-ELISA试剂购自北京万泰生物公司, TPPA试剂购自日本富士株式会社, 发光法TP用美国雅培公司试剂, 酶标仪为安图2010酶标检测系统, 发光法TP检测仪器为雅培IS2000SR免疫分析仪, 水平旋转仪。

1.3 具体方法 所有患儿入院后采血先用TRUST、TPELISA法进行筛查, TRUST为定性试验, 严格按说明书操作, 在水平旋转仪上振荡8 min后判读结果。TP-ELISA法用TPN15、TPN17、TPN47三种梅毒螺旋体重组抗原包原微几板条, 同时包被抗人IgG和IgM免疫球蛋白, 标本吸光度值＜临界值(即cutoff值)为阴性, 而≥cutoff值判为阳性［1］。以上两种方法有一种呈阳性反应再用TPPA法复核, 当TPPA判读结果不好报告时用发光法测TP。

1.4 TPPA试验 按说明书操作, 每次做阴阳对照, 颗粒成纽扣状聚集为阳性, 颗粒散在成片状分布于板底为阴性。

1.5 观察方法 以TPPA法结合临床资料确诊病例为金标准, 计算TRUST、TP-ELISA、TPPA的敏感度和特异度, 以得出本室对胎传梅毒患儿的检测方案。

2 具体操作及结果

2080份标本TP-ELISA法阳性标本38份,38份标本做TPPA试验35份阳性3份阴性,3份阴性标本用发生法测TP阴性, 做WB试验也阴性故排除。35份阳性标本做TRUST试验, 同时嘱其母亲做TRUST试验, 结果分类：①其中10例患儿TRUST滴度≥母亲4倍, 可确认为胎传梅毒。②9例患儿TRUST (-), 嘱其每3个月采血一次, 连续2次阴性者排除胎传梅毒。③6例患儿TRUST (+)≤母亲4倍, 且有症状,嘱其规范性治疗,18个月后做TPPA试验阳性(4例)确诊,阴性(2例)排除。④3例患儿TRUST (+)≤母亲4倍, 无症状,以后每三个月复查一次, 任何一次滴度不降而升, 可诊断胎传梅毒。⑤3例患儿TRUST (+)≤母亲4倍, 无症状, 每3个月复查一次TPPA试验到18个月龄, TPPA(+), 诊断胎传梅毒。⑥4例患儿TRUST(+)≤母亲4倍, 无症状, 每3个月复查TPPA试验到18个月, 任何一次TPPA(-), 可排除胎传梅毒。即：2080份样本, 跟踪至18个月龄, 确认胎传梅毒17份,18份可疑病例经预防性或规范治疗后排除。胎传梅毒患儿的发病率为0.8％, 孕妇梅毒感染率为1.8％。

3 讨论

通过以上步骤对疑似胎传梅毒患儿及其母亲做相应的实验室检查, 诊断方法简单, 成本低, 易于开展, 总结归纳出以下三个方案。

3.1 方案一 胎儿父母亲无梅毒病史, 患儿入院常规检查TPPA试验, 阴性可排除。

3.2 方案二 胎儿父母有一方有梅毒病史时, 有下列情况之一者可诊断为胎传梅毒：①TRUST定量检测滴度高于或等于母亲滴度的4倍, 无论有无临床症状都可诊断。②TRUST定量检测低于母亲的4倍, 每3个月进行TRUST血清定量检测, 任何一次滴度不下降反而上升, 即可诊断。③患儿第一次TRUST结果为阳性, 以后每3个月做TRUST试验, 结果由阴转阳时即可诊断。④患儿TPPA试验出生(+), 随访至18个月龄时仍为阳性, 无论有无症状, 无论TRUST阴阳都可诊断。

3.3 方案三 患儿父母有病史, 有下列情况之一时可排除胎传梅毒。①TRUST定量检测滴度低于母亲滴度的4倍, 有临床症状,18个月龄后TPPA阴性者可排除。②TRUST定量检测低于母亲4倍, 每3个月做TPPA任何一次转阴即可排除。③TRUST阴性, 以后每3个月复检TRUST试验, 连续2次阴性, 排除诊断。

胎传梅毒如能及时诊断和治疗对胎儿有极大的保护作用, 目前免疫印迹法已成为梅毒血清学诊断的确诊试验［1］,但由于一些基层医院尚未开展, 作者研制的几种方法联合检测对临床也有极大的指导作用。

综上所述, TP-ELISA实验适合大批样品的初筛, 初筛阳性后做TPPA试验, 要想确诊是否是胎传梅毒, 应动态检测TRUST和TPPA试验, 结合临床, 以便确诊, 当不能排除时,做相应的预防性用药, 以便观察, 确诊要及时规范用药以便尽早治愈, 而且监测时间至少到患儿月龄18个月。

［1］史伟峰, 王玉月, 郑为平.免疫印迹法对中老年住院患者梅毒试验诊断的评价. 中华检验医学杂志,2009(5):571-573.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.05.029

2014-11-12］

154101 黑龙江省鹤岗市人民医院检验科(朱瑞敏)；哈尔滨市人口和计划生育技术服务中心(钟华)