禽流感H5亚型二价灭活苗免疫效果的试验报告

陈培华 梁永晔（江苏省宝应县畜牧兽医站 225800）

禽流感H5亚型二价灭活苗免疫效果的试验报告

陈培华 梁永晔（江苏省宝应县畜牧兽医站 225800）

为验证重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）对蛋鸡群的安全性和免疫效果，通过注射3家蛋鸡场32400只蛋鸡，注射疫苗后连续2周观察鸡只的精神状态、采食量、粪便及鸡群死亡率，均未发生异常情况，与注射之前无明显差异。表明在鸡场试验条件下，重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）安全性高、副反应小，免疫效果相对较好。

禽流感;Re-6株+Re-7株;田间试验;免疫效果;观察

高致病性禽流感是严重危害蛋鸡生产健康发展主要疾病之一。免疫是防治高致病性禽流感最重要、最有效的手段，并且也取得了很好的防治效果。但是由于近年来，禽流感病毒变异的速度不断加快，防治高致病性禽流感工作面临着极大的挑战。要做好高致病性禽流感的免疫工作，就必须及时掌握流行毒株情况，并及时应用针对性的疫苗。为了验证重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）对蛋鸡的安全性和免疫效果，2014年7～10月，笔者在3家蛋鸡场开展了重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）的免疫试验。试验结果证明，重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）的免疫效果很好。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验鸡群

用于试验观察疫苗免疫安全性和免疫效果测定的3个鸡群为宝应庭余有机农业产销合作社、宝应县兴旺禽业专业合作社、宝应县马庄养鸡场的40日龄京红蛋鸡群，第1鸡群11200只、第2鸡群10200只、第3鸡群11000只，鸡群健康、生长良好，均为重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）非免疫鸡群。

1.1.2 检测试剂

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株），由乾元浩生物股份郑州生物药厂提供，批准文号：兽药生字（2014）160132228，批号：2014068；禽流感病毒H5亚型HI抗原，血凝效价≥7log2，批号：2013002，哈尔滨维科生物技术开发公司生产；SPF鸡感染禽流感H5亚型高免血清，HI≥7log2，批号：2013001，哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

1.1.3 主要试剂

0.01mol/L的PBS液（pH7.2）、生理盐水、1%红细胞悬液现用现配。

1.2 方法

1.2.1 疫苗接种

将试验用疫苗恢复到常温后，鸡颈部皮下注射，每只0.5ml，免疫1次。

1.2.2 采血

第1、2、3群疫苗免疫之前及免疫后15、25、35、45、55、65d各采血1次。翅下静脉采血，1～2ml/只，分离血清，冷藏或冷冻备用。

1.2.3 抗体效价测定

按照《高致病性禽流感免疫技术规范》（NYT769-2004）[2]血凝抑制（HI）试验操作进行，HI效价≥4log2判定为阳性，HI效价＜4log2判定为阴性，以阳性数占检测数的比例计算抗体合格率。

2 试验结果

2.1 安全性试验结果

经注射疫苗后，连续观察2周，鸡的精神状态、采食量、粪便，以及鸡群的死亡率，按照说明注射剂量注射的3个鸡群均无异常情况发生，疫苗对蛋鸡雏鸡群免疫都是安全的，而且疫苗引起的副反应较小。

2.2 母源抗体测定结果

经对3群京红蛋鸡在重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）免疫前采血进行抗体检测，结果显示禽流感抗体合格率均为0，表明3个鸡群为重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）非免疫鸡群，而且无母源抗体。

2.3 免疫效果测定结果

通过对3个鸡群疫苗注射前后采血进行抗体测定，发现疫苗免疫前禽流感抗体合格率为0，第1群疫苗免疫后第15、25、35、45、55、65d的免疫抗体合格率分别为20.83%、51.67%、87.5%、95.83%、99.16%、88.33%，平均抗体滴度分别为 2.01log2、3.52log2、5.35log2、6.75log2、8.02log2、5.3log2； 第2群疫苗免疫后15、 25、35、45、 55、65d的免疫抗体合格率分别为20%、60%、90.83%、98.33%、100%、90.83%，平均抗体滴度分别为2.22log2、4.64log2、6.45log2、7.05log2、7.92log2、6.24log2；第3群疫苗免疫后15、25、35、45、55、65d的免疫抗体合格率分别为23.33%、58.33%、91.67%、100%、100%、92.5%，平均抗体滴 度 分 别 为 2.41log2、 4.14log2、 6.25log2、 7.33log2、7.58log2、6.11log2。免疫后35d抗体合格率分别为87.5%、90.83%、91.67%，平均为90%，监测到免疫后65d，抗体合格率仍分别为88.33%、90.83%、92.5%，平均为90.55%，从免疫后35d起至65d，两期试验的抗体合格率均超过农业部重大动物疫病强制免疫抗体合格率应保持在80%以上的要求。免疫后65d的抗体滴度仍分别为5.30log2、6.24log2、6.11log2，说明疫苗免疫后抗体滴度上升快，维持时间长，并且在蛋鸡养殖中，40日龄时使用该疫苗免疫，120日龄再次免疫该疫苗，以后，每4～6个月肌注1次。

3 结论与讨论

本次免疫试验的3个鸡群共32400只，均未出现免疫副反应，说明重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）安全性高、副反应小，在宝应县基层推广具有可行性。本次试验由于时间关系，仅对免疫1次的小范围鸡群进行免疫效果测定，要更全面、更准确判定该疫苗的免疫效果，笔者将对这3家鸡群在120日龄再次免疫和每4～6个月免疫1次后及时采集血样进行更多次检测，同时进行更多批次疫苗和试验鸡重复试验，得出更全面、更科学、更能指导防疫工作的结论。

江苏省农业三新工程（SXGC[2014]213）。