酸性染料比色法测定斜脉暗罗茎、叶和皮中总生物碱含量

刘冰晶　曾靖　李超　杜兵　曾发挥　曾雪亮

摘要：以小檗碱为对照品，在pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，以溴甲酚绿指示液为显色剂，利用分光光度法在628 nm测定斜脉暗罗中总生物碱含量，结果表明，小檗碱对照品在2.0～12.0 mg/L范围内浓度（C）与吸光度（D）呈线性关系，回归方程为D=0.008 2C+0.167 1，r=0.9991；斜脉暗罗茎、叶和皮中的总生物碱含量分别为 0.267 1%、1.473 7%和0.790 8%。分光光度比色法测定总生物碱含量操作简便，结果可靠，重复性好，可用于斜脉暗罗总生物碱含量的测定。

关键词：斜脉暗罗；总生物碱；紫外分光光度法；茎；叶；皮

中图分类号： R284.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0263-02

收稿日期：2013-05-23

基金项目：江西省教育厅项目（编号：GJJ13678）；赣南医学院项目（编号：YB201218）。

作者简介：刘冰晶（1988—），男，云南昆明人，硕士，助教，从事中药化学研究。E-mail：974141690@qq.com。斜脉暗罗（Polyalthia plagioneura）属番荔枝科（Annonaceae）暗罗属（Polyalthia genus），系我国特有种，分布于云南、广东、广西南部及海南[1]，为海南优势种[2]。国内外学者从暗罗属20多种植物中得到了生物碱、萜类等多种类型化合物[3-4]，从斜脉暗罗中分离得到生物碱类化合物marcanine A和少量其他化合物[5-7]，但有关斜脉暗罗总生物碱含量的测定未见报道。本研究以小檗碱为对照品，在pH值为4.5的醋酸—醋酸钠缓冲溶液中，以溴甲酚绿为显色剂，在628 nm波长下，利用分光光度法测定斜脉暗罗总生物碱含量，为保护和合理利用药用植物资源斜脉暗罗提供科学依据。

1材料与方法

1.1仪器、试剂与材料

紫外可见分光光度计（尤尼柯UV-4802）；98-C-数显控温电热套（天津泰斯特）；索式提取器；电子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚绿（AR）；小檗碱标准品（成都领航者生物）；pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液；0.01 mol/L氢氧化钠溶液（用乙醇溶解）。

斜脉暗罗采自海南省昌江县霸王岭自然保护区，由海南师范大学生命科学学院钟琼芯教授鉴定为Polyalthia plagioneura，标本现藏于江西省脑血管药理重点实验室。

1.2 试验方法

参照刘冰晶等的方法[8-9]并进行改良。

1.2.1试验溶液配制用0.2 mol/L氢氧化钠滴加冰醋酸，调节pH值为4.5，即得醋酸—醋酸钠缓冲溶液；称取溴甲酚绿40 mg，加100 mL pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液溶解，过滤，即得0.04%溴甲酚绿溶液。

1.2.2标准曲线的制作称取干燥至恒重的小檗碱对照品2 mg，置于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，摇匀即得20 mg/L标准溶液。取小檗碱对照品溶液，显色后进行可见-紫外全波长扫描，结果表明对照品溶液在628 nm处有最大吸收峰。经多次重复，峰形一致且空白对照无干扰，故选择628 nm作为样品测定的波长。取标准溶液1.2、2.4、36、4.8、6.0、7.2 mL分别置于 20 mL 容量瓶中，用三氯甲烷稀释至10 mL，加入pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液 5.0 mL 和0.04%溴甲酚绿溶液 2.0 mL，剧烈振摇5 min，静置 30 min；取下层液5 mL，加入 0.01 mol/L 氢氧化钠—乙醇溶液1.0 mL，摇匀，于628 nm处测吸光度。以小檗碱含量为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线。

1.2.3空白溶液的制备取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，加入5.0 mL醋酸—醋酸钠缓冲液和0.04%溴甲酚绿溶液2 mL，剧烈摇动5 min，然后静置30 min；取下层液 5 mL，加入0.01 mol/L氢氧化钠—乙醇溶液1.0 mL摇匀，作为空白溶液。

1.2.4斜脉暗罗总生物碱的提取分别准确称取斜脉暗罗茎0.5 g、叶0.25 g和皮0.5 g，用适量氨水湿润，密封放置 30 min，索式提取2 h，将提取液置于碘化铋钾溶液经薄层层析（TLC）至不显色为止，回收三氯甲烷，残留物放冷至室温，用三氯甲烷溶解并定容至20 mL；取0.2 mL于容量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混匀作为样品液；取10 mL样品液于3个20 mL容量瓶中，加入5.0 mL醋酸-醋酸钠缓冲液和 2 mL 0.04%溴甲酚绿溶液，剧烈摇动5 min，然后静置 30 min；取下层液5 mL，加0.01 mol/L氢氧化钠—乙醇溶液1.0 mL，摇匀，于628 nm处测吸光度，计算生物碱含量。试验重复3次。

2结果与分析

2.1标准曲线方程

经过统计处理，得到标准曲线回归方程为：D=0.008 2C+0.167 1，相关系数r=0.999 1，线性范围为2.0～12.0 mg/L。

2.2稳定性试验

取斜脉暗罗提取溶液0.2 mL，每隔10 min用分光光度计测定1次吸光度，结果（表1）表明，斜脉暗罗茎、叶、皮提取物在1 h内稳定，RSD值分别为2.140%、2.070%和0.379%。

3.3精密度试验

取同一批样品，进行6次平行试验，测定含量，斜脉暗罗茎、叶和皮提取物吸光度RSD值分别为0.385%、1.882%和0.412%，精密度良好（表2）。

3小结与讨论

以小檗碱为标准品，测定斜脉暗罗茎、叶和皮总生物碱分光含量分别为 0.267 1%、1.473 7%和0.790 8%。利用紫外分光光度法测定斜脉暗罗茎、叶、皮中总生物碱含量，操作简便快捷，灵敏度高，重现性好，测定结果准确可靠。该方法与重量法、滴定法等测定方法比较，克服了多次重复萃取所造成的误差；与液相色谱法比较，具有所用仪器简单、操作方便、耗时少的优点。本研究结果可为斜脉暗罗的开发利用提供科学依据。endprint

参考文献：

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