放疗联合高效细胞因子诱导杀伤细胞治疗鼻咽癌的临床疗效观察

温演伟，董洪松，田耕

(深圳市第二人民医院耳鼻喉科，广东深圳 518035）

放疗联合高效细胞因子诱导杀伤细胞治疗鼻咽癌的临床疗效观察

温演伟，董洪松，田耕

(深圳市第二人民医院耳鼻喉科，广东深圳 518035）

目的分析高效细胞因子诱导的杀伤细胞联合放射治疗治疗鼻咽癌临床疗效和安全性。方法选取2010年6月至2013年6月在我院就诊的60例鼻咽癌患者为研究对象，应用随机数字表法将患者分为分为实验组和对照组，每组各30例，对照组给予放射治疗，实验组则在对照组治疗的基础上给予高效细胞因子诱导的杀伤细胞治疗，比较观察两组患者免疫指标变化和Karnofsky评分变化。结果治疗4周后两组患者CD4+/CD8+比值、Treg细胞百分率、NK细胞百分率、NKT细胞百分率均较前明显改善，但实验组患者Treg细胞百分率和NKT细胞百分率上调更明显，而CD4+/CD8+比值和NK细胞百分率下降更明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。实验组患者的Karnofsky评分明显优于对照组患者，其差异也有统计学意义(P＜0.05)。结论高效细胞因子诱导的杀伤细胞联合放射治疗能够有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活质量，值得在临床上进一步推广。

高效细胞因子；杀伤细胞；放射治疗；鼻咽癌；临床疗效

在我国，鼻咽癌是最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁患者的身心健康，甚至危及患者的性命[1-2]。治疗上，疾病早期首选放射治疗[3-4]，而对于晚期鼻咽癌患者多选用以放射治疗为主、化疗为辅的综合治疗[5-6]。为此，学者们和肿瘤科医师一直致力于优化安全高效的综合治疗方案。高效CIK细胞对肝癌的治疗已经有明确的治疗效果，而高效CIK治疗其他系统的肿瘤具有相同的治疗机制。本研究中笔者采用高效细胞因子诱导的杀伤细胞联合放射治疗在我院就诊的60例鼻咽癌患者，收到了满意的临床效果，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2010年6月至2013年6月在我院就诊的60例鼻咽癌患者为研究对象。患者入组条件：(1)年龄18～75岁；(2)预期生存期大于3个月；(3)病理组织学上确认的鼻咽癌，已经放射治疗，或放疗失败的转移性Ⅳ期患者；(4)血肌酐≤1.5 μlm(正常值上限)，血胆红素≤1.5 μlm(正常值上限)，ALT和AST≤2.5 μlm；(5)骨髓储备充足(白细胞数＞3×109/L，淋巴细胞计数＞0.83×109/L，血小板＞50×109/L)；(6)患者签署知情同意书；(8)无明确过敏史；(9)经济上可以承受。排除标准：(1)有活动的未控制的感染者；(2)有严重心脏病史，未控制的高血压病，不稳定心绞痛，或充血性心力衰竭；(3)怀孕或哺乳期女性；(4)有T淋巴细胞相关的免疫疾病史。应用随机数字表法将患者分为实验组和对照组。其中，对照组30例患者中男性16例，女性14例；年龄51～75岁，平均(58.62±18.47)岁。实验组30例患者中男性17例，女性13例；年龄50～75岁，平均(59.45±18.87)岁。两组患者性别构成和平均年龄等方面比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法对照组患者给予放射治疗，实验组患者则在上述治疗的基础上给予高效细胞因子诱导的杀伤细胞治疗。本试验用的高效CIK细胞由患者自身提供20～100 ml外周血(根据患者本人淋巴细胞绝对值决定所需要的血量)，体外培养扩增至原来的100～1 000倍。每次回输含3～10×109细胞/ 100～200 ml含1%白蛋白的生理盐水。细胞产品无细菌、霉菌、支原体、病毒等任何微生物和内毒素的污染。抽外周血后约2周开始回输，患者每周回输一次，至少回输4次。

1.3 免疫指标及其检测方法观察两组患者的CD4+/CD8+比值、Treg细胞百分率、NK细胞百分率、NKT细胞百分率。检测方法：分别于治疗前1 d及治疗4周后采集患者2 ml清晨空腹以肝素抗凝外周静脉血。严格按照说明书进行操作，取100 μl外周静脉血与20 μl相应抗体充分混匀，在混匀后置于室温时避光反应20 min，加入2 ml 0.85%NH4Cl溶液，再将其置于室温下避光反应10 min，离心去除上清，再PBS洗涤2次，最后将其置于流式细胞仪进行检测。

1.4 Karnofsky评分[7]患者正常，无症状和体征为100分；能进行正常活动，有轻微症状和体征为90分；勉强进行正常活动，有一些症状或体征为80分；患者生活能自理，但不能维持正常生活和工作为70分；患者生活能大部分自理，但偶尔需要别人帮助为60分；患者常需要人照料为50分；患者生活不能自理，需要特别照顾和帮助为40分；患者生活严重不能自理为30分；患者病重，需要住院和积极的支持治疗为20分；患者重危，临近死亡为10分；患者死亡为0分。量表得分越高，健康状况越好。等分越低，健康状况越差。

1.5 统计学方法应用SPSS19.0软件包进行数据分析，组间计量资料比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者免疫指标变化比较治疗前两组患者CD4+/CD8+比值、Treg细胞百分率、NK细胞百分率、NKT细胞百分率差异无统计学意义(P＞0.05)，治疗4周后，两组患者CD4+/CD8+比值、Treg细胞百分率、NK细胞百分率、NKT细胞百分率均较前明显改善，但是，实验组患者Treg细胞百分率和NKT细胞百分率上调更明显，而CD4+/CD8+比值和NK细胞百分率下降更明显，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组患者免疫指标变化比较(±s)

表1 两组患者免疫指标变化比较(±s)

项目例数CD4+/CD8+NK(%)NKT(%)Treg(%)对照组实验组t值P值30 30治疗前0.94±0.14 0.93±0.16 0.258＞0.05治疗4周后1.18±0.21 1.46±0.22 5.043＜0.05治疗前15.76±2.65 15.84±2.72 0.115＞0.05治疗4周后17.23±3.21 22.26±3.13 6.145＜0.05治疗前5.42±2.56 5.48±2.70 0.088＞0.05治疗4周后10.41±2.85 14.38±2.79 5.452＜0.05治疗前9.21±1.53 9.15±1.47 0.155＞0.05治疗4周后6.28±1.27 4.21±1.23 6.413＜0.05

2.2 两组患者Karnofsky评分比较治疗前两组患者Karnofsky评分差异无统计学意义(P＞0.05)，治疗4周后，两组患者Karnofsky评分均较前明显改善，但是实验组患者Karnofsky评分明显优于对照组患者，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

2.3 毒副反应观察实验组患者在回输高效细胞因子诱导的杀伤细胞过程中有6例出现低热，给予物理降温对症处理后体温均降至正常；1例出现轻度皮疹，给予抗过敏治疗后患者的皮疹消退。

表2 两组患者Karnofsky评分比较（±s，分）

表2 两组患者Karnofsky评分比较（±s，分）

组别对照组实验组t值P值例数30 30治疗前73.18±6.63 72.80±7.02 13.296＞0.05治疗4周后82.57±5.70 89.94±6.89 4.514＜0.05 t值5.882 9.88 P值＜0.05＜0.05

3 讨论

近30年来随着我国人民生活水平的提高和人均寿命不断延长，肿瘤已成为最主要的居民死亡原因。鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤。在东南亚及我国南方多见，广东省是其中高发地。放疗是治疗鼻咽癌的主要方法，但在鼻咽癌放疗不敏感、复发、转移的情况下，缺乏有效、不良反应轻的治疗手段。目前免疫治疗已经成为手术、化疗、放疗之后的一种无创、有效的治疗方法，得到全世界广泛承认。

随着对肿瘤免疫和免疫逃逸机制的深入了解，以及淋巴细胞体外培养技术的长足进步，不同方式的实体瘤的细胞免疫治疗显现了有前景的疗效，其中包括对肿瘤复发转移的抑制作用、对肿瘤瘤体本身的消除作用、对患者生存期的延长作用和对患者生存质量的改善作用，因此在国际上逐渐通过了不同国家的药监机构审查[7-10]，成为进入Ⅲ期临床和获得临床使用新药文号的制剂，如美国Dendreon公司的树突状细胞疫苗Sipuleucel-T和Lapuleucel-T等过继免疫治疗。这使得免疫治疗成为肿瘤的第四种治疗模式渐渐成为现实。

在我国，已有利用LAK和CIK(Cytokine Induced Killer Cell，细胞因子诱导的杀伤细胞)进行实体瘤治疗的经验，治疗所采用的细胞来源和培养方法在各地、各医院差异较大。随着细胞生物学、肿瘤免疫学近年来在技术手段上的突破和机制研究的发展，新一代的肿瘤细胞免疫治疗方法正在逐步形成并发展。在本研究中，我们采用一种新型的细胞治疗-高效细胞因子诱导的杀伤细胞(高效CIK)进行免疫治疗。该方法使用的淋巴细胞来源于患者自身的少量外周血。在约2周的短时间内，这些淋巴细胞可以活化扩增达约1 000倍后，再回输于患者体内。高效CIK试剂系统培养的自体淋巴细胞在日本为常规使用的肿瘤细胞免疫治疗的手段。日本在治疗肝癌的随机临床试验中，使用高效CIK进行的免疫治疗可提高患者的无复发存活率：经过5次高效CIK回输治疗的肝癌术后患者，与不经该治疗的对照组比较，免疫治疗组出现首次复发的时间要明显延长(P=0.008)。与无该治疗的患者比较，高效CIK治疗组肝癌术后复发率降低18%，复发的危险率减少了41%(P=0.01)。高效CIK在韩国于2007年被批准进入肝癌治疗的Ⅳ期临床，恶性脑肿瘤治疗的Ⅲ期临床试验。日本和韩国截止到2004年为止有2 134例不同系统的肿瘤患者参加了这项治疗，其中完全缓解的患者为5%，部分缓解的患者是17%，长期病情稳定的患者为16%。同时没有发现Ⅲ和Ⅳ度的不良反应。

本研究发现：实验组患者Treg细胞百分率和NKT细胞百分率上调更明显，而比值和NK细胞百分率下降更明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。实验组患者Karnofsky评分明显优于对照组患者的，差异有统计学意义(P＜0.05)。究其原因可能与以下原因有关：患者细胞减少会使肿瘤细胞免疫逃逸，而细胞升高则引起细胞免疫损害，导致患者体内比值明显下降。在肿瘤免疫抑制及逃逸机制中起重要作用的Treg细胞广泛存在于淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、肝癌、肺癌等多种肿瘤微环境中，且患者局部的Treg细胞数量与患者预后密切相关。本研究笔者采用高效细胞因子诱导的杀伤细胞治疗能够明显改善患者T淋巴细胞的数量和比例，刺激T淋巴细胞活化，Treg细胞、NKT细胞、NK细胞、比值异常情况得到纠正，增强肿瘤患者机体细胞和体液免疫功能，有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活质量。

综上所述，高效细胞因子诱导的杀伤细胞联合放射治疗能够有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活质量，值得临床上进一步推广应用。

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Observation of clinical efficacy and safety of nasopharyngeal carcinoma treated with radiotherapy combined cytokine-induced killer cells therapy.

WEN Yan-wei,DONG Hong-song,TIAN Geng.Department of Otolaryngology, The Second People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518035,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo analyze the clinical efficacy and safety of nasopharyngeal carcinoma treated with radiotherapy combined combined cytokine-induced killer cells therapy.MethodsSixty cases of patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC)from June 2010 to June 2013 in our hospital were selected as the research objects,and were divided into experimental group and control group by random number table method.The 30 cases in control group were given radiotherapy,and the another 30 cases in experimental group were given cytokine-induced killer cell therapy combined with radiotherapy.And then immune indexes and Karnofsky scores in both groups were observed.ResultsAfter 4 weeks treatment,CD4+/CD8+ratio,the percentages of Treg cells,the percentages of NK cells and NKT cells in both groups were obviously improved.Compared to the control group,the percentages of Treg cells and NKT cells in experimental group increased more obviously,while CD4+/CD8+ratio and NK cells percentage decreased more significantly with statistical differences(P＜0.05).The Karnofsky score in experimental group was better than that in control group with statistically significant difference(P＜0.05).ConclusionThe cytokine-induced killer cells with radiation therapy can effectively improve the patient's immune function as well as the quality of life,which is worthy of further clinical application.

Efficient cell factor;Killer cells;Radiation therapy;Nasopharyngeal carcinoma;Clinical curative effect

R739.63

A

1003—6350（2014）11—1570—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.11.0610

2013-11-25)

2012年深圳市科技局项目（编号：201202025）

温演伟。E-mail：wyw55@126.com