NF-κB p65、CyclinD1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

洪良利，秦杰升，黄杰雄，邱前程，董恒

(汕头大学医学院第一附属医院病理科1、耳鼻喉头颈外科2，广东汕头515041)

·临床病理·

NF-κB p65、CyclinD1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

洪良利1，秦杰升2，黄杰雄1，邱前程1，董恒1

(汕头大学医学院第一附属医院病理科1、耳鼻喉头颈外科2，广东汕头515041)

目的探讨NF-κBp65、CyclinD1在甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测257例PTC及癌旁甲状腺组织中的NF-κBp65、CyclinD1表达水平，并分析二者表达水平的变化与临床病理参数的关系。结果(1)NF-κBp65、CyclinD1在PTC组织中的阳性率分别为58.8%(151/257)及89.9%(231/257)，均显著高于癌旁正常甲状腺组织(P＜0.01)；(2)NF-κBp65、CyclinD1的表达水平与肿瘤大小、病灶数目、淋巴结转移及临床分期有关，与性别及年龄无关；(3)NF-κBp65与CyclinD1的表达呈正相关关系(P＜0.01)。结论NF-κBp65、CyclinD1的异常表达与甲状腺乳头状癌的发生发展、转移及预后有密切联系，联合检测二者表达水平可作为判断PTC生物学行为及预后指标，并为其新靶点治疗提供依据。

NF-κB p65；CyclinD1；甲状腺乳头状癌

甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)是头颈部最常见的恶性肿瘤，占甲状腺恶性肿瘤的70%～85%[1]。大多数PTC经手术切除及放射性131I的治疗，预后良好，但由于PTC早期即易发生浸润和转移，而现有对PTC预后的临床评分指标(包括性别、甲状腺功能、肿物大小、多灶性、血管、甲状腺外组织侵犯等)均不能精确判断出生物学行为上具有较高侵袭性及转移能力的PTC，所以对PTC的发病机制和生物学行为的研究显得尤为重要。核因子-κB p65 (NF-κBp65)是一类重要的转录因子，是细胞多种信号转导途径的汇聚点，激活后可与相关基因启动子或增强子特殊DNA序列(κB位点)结合，通过调控其下游靶基因如细胞周期调控蛋白CyclinD1等的表达，与肿瘤的发生发展、浸润和转移关系密切[2]。

本研究采用免疫组织化学法检测甲状腺乳头状癌及癌旁正常甲状腺组织中NF-κBp65和CyclinD1的表达，探讨它们在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用及两者间的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集汕头大学医学院第一附属医院2007年6月至2013年6月经手术切除的257例甲状腺乳头状癌及对应癌旁正常甲状腺组织存档蜡块，每例临床资料完整。其中男性57例，女性200例。年龄17～79岁，中位年龄44岁。所有患者术前均未接受放疗、化疗及免疫制剂等抗癌治疗。

1.2 试剂本实验中所用一抗NF-κ B p65 (sc-8008)购自美国Santa Cruz公司，实验抗体使用浓度为1:100；CyclinD1均购自福建迈新公司，为即用型工作浓度。二抗及DAB显色试剂均购自福州迈新公司。

1.3免疫组化染色及结果判断标准采用En-Vision二步法，由试剂公司提供阳性对照片，分别以乳腺癌、套细胞淋巴瘤组织作为NF-κB p65、CyclinD1的阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，操作严格按照试剂说明书进行。NF-κB p65染色结果以胞浆和(或)胞核棕黄染色者为阳性细胞，无棕黄染色者为阴性；CyclinD1以胞核棕黄染色者为阳性细胞。参照Francesco等的判定标准[3]：0分，无阳性着色；1分，阳性细胞＜10%；2分，阳性细胞介于10%～50%；3分，阳性细胞数＞50%；根据染色程度分为:无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；两项结果相加：总分＜2分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中度阳性(++)，6～7分为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法应用SPSS 16.0统计软件包进行分析，组间率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。检验标准α=0.05。

2 结果

2.1 NF-κBp65、CyclinD1在甲状腺乳头状癌及癌旁正常甲状腺组织中的表达NF-κBp65在PTC组织中出现胞浆表达增强，其中151例(59%)出现少量胞核/核周异位阳性表达，在癌旁正常甲状腺组织滤泡上皮中仅表现为胞浆弱阳性(见图1)，未见核阳性表达；CyclinD1在PTC组织中231例(90%)出现核阳性过表达，在癌旁正常甲状腺组织中未检测到表达或个别病例出现低表达(阳性细胞＜5%)，见图2。

图1 NF-κB p65在癌旁正常甲状腺组织表现为胞膜/胞浆弱阳性，在甲状腺乳头状癌组织中细胞浆表达增强伴少量胞核/核周异位阳性表达(EnVision二步法，200倍)

2.2 癌组织中NF-κB p65、CyclinD1表达与PTC临床病理学参数的关系NF-κB p65、CyclinD1的异常高表达率在PTC组织中的表达水平与肿瘤大小、病灶数目、淋巴结转移及高病理分期有关，但与性别及年龄无关(P＞0.05)。直径大于1 cm的癌表达率高于直径小于1 cm的微小癌；多发病灶组高于单发病灶组；有颈部淋巴结转移组高于无转移组；高临床病理分期(Ⅲ～Ⅳ期)组高于低临床病理分期组(Ⅰ～Ⅱ期)，见表1。

图2 CyclinD1在PTC中弥漫核强阳性，癌旁正常甲状腺组织未见表达(EnVision二步法，200倍)

表1 NF-κB p65、CyclinD1表达与PTC临床病理学参数的关系

2.3 甲状腺乳头状癌中NF-κB p65的表达与CyclinD1之间的相互关系NF-κBp65的表达与CyclinD1阳性表达之间呈正相关关系(P＜0.01)。在151例NF-κBp65阳性标本中，有142例同时存在CyclinD1过表达；而在28例CyclinD1阴性标本中有19例伴NF-κBp65表达缺失，相关分析证实，甲状腺乳头状癌组织中NF-κBp65与CyclinD1表达呈正相关(r=0.412，P＜0.01)，见表2。

表2 甲状腺乳头状癌中NF-κB p65的表达与CyclinD1之间的相互关系(例)

3 讨论

核转录因子NF-κBp65是哺乳动物组织中一类重要的核转录因子，在刺激因素作用下，胞浆中的NF-κ Bp65被激活，逆移入核后与相关基因启动子或增强子特殊DNA序列(κB位点)结合，促进下游靶基因蛋白的表达，参与多种恶性肿瘤细胞如白血病、淋巴瘤、头颈部鳞状细胞癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌等的细胞增殖，抗凋亡、促血管生成及转移作用[2，4-6]。体外细胞学研究表明，在甲状腺乳头状癌、滤泡癌和未分化癌细胞株中存在NF-κB活化水平的升高，并且与甲状腺癌细胞的增殖、侵袭和转移能力相关。也有研究表明甲状腺乳头状癌组织中存在NF-κB的激活，但却没有探讨其临床病理意义[3，6]。在本研究中，NF-κB p65在PTC细胞浆中的表达较癌旁正常甲状腺组织明显增强58.8%(151/257)病例出现少量核或核周表达。NF-κB p65阳性表达与肿瘤大小、病灶数目、颈部淋巴结转移及高临床病理分期有关。因此提示，NF-κBp65的异常激活在甲状腺乳头状癌的发生发展、侵袭及转移中均起了一定作用。

细胞周期调控蛋白CyclinD1是细胞周期的正性调控因子，目前认为是一种原癌基因，其过表达可缩短G1期，加快细胞进入S期，促进肿瘤细胞增殖。本研究结果显示，CyclinD1在PTC组织中阳性率高达90%，与肿瘤大小、病灶数目、颈部淋巴结转移及高临床病理分期呈正相关，而与年龄及性别无关。提示CyclinD1的异常过表达同样不仅参与甲状腺乳头状癌的发生发展有关，并且与肿瘤的转移和预后密切相关。

CyclinD1同时作为NF-κB p65的重要靶基因，其启动子上含有两个与NF-kB结合的位点，NF-κB的活化可导致CyclinD1过表达，与肿瘤细胞的增殖、浸润及转移密切相关。本研究中，151例NF-κBp65阳性PTC中CyclinD1有82例过表达，NF-κBp65与CyclinD1的表达成正相关关系(P＜0.01)。推测NF-κBp65的激活可能通过调控下游CyclinD1的过度表达，参与PTC的细胞增殖，侵袭及转移，但其确切机制有待进一步探讨。

综上所述，NF-κBp65的激活及CyclinD1的过表达在甲状腺乳头状癌的发生发展侵袭及转移中起了一定作用，提示NF-κBp65可能作为PTC治疗新靶点。临床病理诊断中对手术切除PTC组织及术前甲状腺肿物细针穿刺组织进行NF-κBp65、CyclinD1的检测，可以作为早期诊断甲状腺乳头状癌、帮助判断甲状腺乳头状癌患者是否需要进行颈部淋巴结清扫及判断PTC患者预后的指标，并且为新靶点治疗提供依据。

[1]Zidan J,Karen D,Stein M,et al.Pure versus follicular variant of papillary thyroid carcinoma:clinical features,prognostic factors, treatment and survival[J].Cancer,2003,97(5):1181-1185.

[2]Hinz M,Kappmann D,Eichten A,et al.NF-kappa B function in growthcontrol:regulationofcyclinD1expressionandGO/ GI-to-S-phase transition[J].Mol Cell Biol,1999,19(4):2690-2698.

[3]Starenki DV1,Namba H,Saenko VA,et al.Induction of thyroid cancer cell apoptosis by a novel nuclear factor kappaB inhibitor,dehydroxymethylepoxyquinomicin[J].Clin Cancer Res,2004,10(20): 6821-6829.

[4]Prasad S,Ravindran J,Aggarwal BB.NF-κB and cancer:how intimate is this relationship[J].Mol Cell Biochem,2010,336(1-2): 25-37.

[5]Pacifico F,Mauro C,Barone C,et al.Oncogenic and Anti-apoptotic Activity of NF-Kappa B in Human Thyroid Carcinomas[J].Biol Chem,2004,279(52):54610-54619.

[6]Bauerle KT,Schweppe RE,Haugen BR.Inhibition of nuclear factor-kappa B differentially affects thyroid cancer cell growth,apoptosis,and invasion[J].Mol Cancer,2010,9:117.

Expression of NF-kB p65,CyclinD1 in papillary thyroid carcinoma and its significance.

HONG Liang-li1,QIN Jie-sheng2,HUANG Jie-xiong1,QIU Qian-cheng1，DONG Heng1.
Department of Pathology1,Depertment of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery2,The First Affiliated Hospital of Shantou University Medical College, Shantou 515041,Guangdong,CHINA

>ObjectiveTo investigate the expression of nuclear factor kappaB(NF-kB)p65 and CyclinD1 in papillary thyroid adenocarcinoma(PTC)and its clinical significance.MethodsWe investigated the expression of NF-kB p65,CyclinD1 in 257 cases of papillary thyroid adenocarcinoma and normal thyroid tissues by immunohistochemical technique.Results(1)The expression of NF-kB p65 and CyclinD1 in PTC is significantly higher than that in the normal thyroid tissues(P＜0.01).(2)The aberrant expression rates of NF-kB p65 and CyclinD1 in PTC were closely related to tumor size,numbers of lesion,lymph node metastasis and clinicopathological stage but did not show correlation with age and gender.(3)There was a significant positive correlation between NF-kB p65 and CyclinD1(P＜0.01).ConclusionNF-kB p65 and CyclinD1 may play roles in the occurrence and development of PTC.It is possible to use a joint test of NF-kB p65 and CyclinD1 in identifying the disease and providing a prognosis.

NF-kB p65;CyclinD1;Thyroid papillary;Adenocarcinoma

R736.1

A

1003—6350（2014）12—1853—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.12.0721

2014-01-24)

洪良利。E-mail：hong_liangli@163.com