聚肌胞、阿比朵尔诱导产生干扰素最短时效研究

王洪波，樊凤艳，祁术元，刘娟

（空军总医院输血科，北京 100142）

·论著·

聚肌胞、阿比朵尔诱导产生干扰素最短时效研究

王洪波，樊凤艳，祁术元，刘娟

（空军总医院输血科，北京 100142）

目的探讨干扰素(IFNs)诱导剂聚肌胞、阿比朵尔从鼻腔给药，分别诱导呼吸道局部黏膜产生足量干扰素的最短时间和达到平台期的时间。方法用聚肌胞溶液(A组)、阿比朵尔溶液(B组)和注射用水溶液(C组)分别从鼻腔滴入，连续给药1～6 d、于第2天开始分别采集各组实验动物鼻腔分泌物，检测干扰素含量，各小组间进行比较分析。实验动物为昆明种小鼠，实验组156只，其中A组(聚肌胞组)、B组(阿比朵尔组)各78只；C组(对照组)13只，共计169只。结果(1)聚肌胞、阿比朵尔通过鼻腔给药，1 d就可以诱导呼吸道黏膜产生足量IFNs。(2)持续通过鼻腔给予聚肌胞、阿比朵尔，随着给药时间的延长，呼吸道分泌物中的干扰素的含量呈增长趋势，逐步达到平台期。(3)通过鼻腔滴入适量聚肌胞溶液从第5天开始，诱导呼吸道黏膜产生的干扰素达到平台期。(4)通过鼻腔滴入适量阿比朵尔溶液从第4天开始，诱导呼吸道黏膜产生的干扰素达到平台期。(5)整个实验过程中，动物对鼻腔滴入上述制剂，都有较好的适应性。结论聚肌胞、阿比朵尔通过鼻腔给药，1 d均可诱导呼吸道局部黏膜产生足量干扰素，逐步增多达到较高水平的平台期的时间分别为5 d和4 d。

干扰素；诱导剂；呼吸道；最短实效

为了探讨高效干扰素(IFNs)诱导剂聚肌胞、阿比朵尔从鼻腔给药，诱导呼吸道局部黏膜产生足量干扰素的最短时间和达到平台期的时间，笔者进行了动物实验研究，现将结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 干扰素诱导剂 0.1%聚肌胞溶液(A液)，由济南维尔康生化制药有限公司生产，国药准字H20003566，生产批号1212301，有效期两年；0.1%盐酸阿比朵尔溶液(B液)，由江苏吴中医药集团有限公司苏州制药厂馈赠；盐酸阿比朵尔原料粉剂，批号Y1111209R，取样时间2013年3月；硝酸毛果芸香碱滴眼液(匹罗卡品)，沈阳兴齐制药有限公司生产，批号120701，有效期两年，规格8 ml：80 mg。

1.2 实验动物 昆明种小鼠，雄性，5～8周龄，质量25～30 g，SPF级。购于北京大学医学部实验动物中心。试验动物共计169只，分为实验组和对照组。实验组分A组(聚肌胞组)、B组（阿比朵尔组）两大组，每大组再分为1 d组(24 h，A1组、B1组)、2 d组(48 h，A2组、B2组)、3 d组(72 h、A3组、B3组)、4 d组(96 h，A4组、B4组）、5 d组(120 h、A5组、B5组)、6 d组(144 h、A6组、B6组)共六个小组，每小组小鼠13只。共计156只。对照组(C组)给予注射用水(C液)，小鼠13只。

1.3 试验方法 A组和B组按每只小鼠30 μl/次(每侧鼻腔各15 μl/次)，鼻腔点滴的方式给药[1]，A组为每日上、下午各一次，给予A液；B组为每日上午给药一次，给予B液。按照分组分别连续给药1 d、2 d、3 d、4 d、5 d和6 d，同时观察实验动物的用药反应（有无活动弱、倦缩、食量减少、毛色差、嘶咬等）。并分别于给药后的第2天、3天、4天、5天、6天和7天上午，采集各组小鼠呼吸道分泌液。C组按每只小鼠30 μl/次(每侧鼻腔各15 μl/次)，鼻腔点滴的方式给予注射用水(C液)，每日上午一次，连续给药6 d，于给药后的第7天上午，采集小鼠呼吸道分泌液。

1.4 采集呼吸道及鼻腔分泌液方法 腹腔注射0.01%匹罗卡品60 μl/只·次，1 min后采集呼吸道及鼻腔分泌液，置于0.5 ml EP管中，-20℃保存[1]。分别检测干扰素。干扰素检测试剂购于北京中尚博奥生物技术有限公司，分装eBioscience试剂，货号ME020，批号140206。检测仪器全自动多功能酶标仪(MULTISKAN MK3，Thermo，USA)。

1.5 统计学方法 应用SPSS17统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差()表示，组间两两比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 A组INFs检测结果 A组内各小组鼻腔分泌物中检测的干扰素，呈逐步增多趋势，其中A5组达到峰值，各小组与对照组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01)。A组内A1组分别与其他各组间进行比较分析，A1组与A2组、A1组与A3组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，A1组与A4组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，A1组与A5组、A1组与A6组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01)，见表1和图1。

表1 A组与C组INFs检测结果比较()

表1 A组与C组INFs检测结果比较()

注：A1组与C组比较，t=3.244、P=0.004；A1组与A2组比较，t=-0.962、P=0.346；A1组与A3组比较，t=-1.834、P=0.079；A1组与A4组比较，t=-2.276、P=0.032；A1组与A 5组比较，t=-5.522、P=1.12×10-5；A1组与A6组比较，t=-3.697、P=0.001。

图1 A组干扰素产生的动态变化

2.2 B组INFs检测结果 B组内各小组鼻腔分泌物中检测的干扰素呈逐步增多趋势，其中B5组达到峰值，各小组与对照组比较，除B1组与对照组比较差异有统计学意义(P=0.037)，其他各组与对照组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01)。除B1组与B2组比较差异无统计学意义(P=0.155)，B1组与B3组比较差异有统计学意义外(P=0.032)，B1组与组内其他各组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01)，见表2和图2。

表2 B组INFs检测结果及小组间比较

图2 B组干扰素产生的动态变化

3 讨论

IFNs诱导剂可诱导机体呼吸道黏膜上皮细胞产生IFNs，使局部形成抗病毒状态，从而可以应用于呼吸道病毒感染性疾病的预防和治疗。目前，国内外对IFNs诱导剂作为抗病毒药物的研究和应用报道越来越多[2-6]，给药方式包括涂(软膏)于鼻腔、滴鼻和口服，研究涉及的呼吸道感染性病毒包括：流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒等[7]。

本研究是在证实了多种高效IFNs诱导剂通过呼吸道给药，可以有效诱导小鼠呼吸道产生IFNs[8]，又证实了聚肌胞、阿比朵尔诱导小鼠呼吸道产生IFNs达到峰值的时间，以及持续给药可以持续诱导产生足量IFNs的基础之上[9]，进一步对比观察了聚肌胞、阿比朵尔从鼻腔给药，诱导小鼠呼吸道产生足量IFNs的最短时间，和达到平台期（是指该期各组的数值与同组初始期数值比较，差异非常显著）的时间。结果表明：(1)聚肌胞、阿比朵尔通过鼻腔给药，1 d(24 h)就可以诱导呼吸道黏膜产生足量IFNs。(2)持续通过鼻腔给予聚肌胞、阿比朵尔，随着给药时间的延长，呼吸道分泌物中的干扰素含量呈增长趋势，逐步达到平台期。(3)通过鼻腔滴入适量聚肌胞溶液从第5天开始，诱导呼吸道黏膜产生的干扰素达到平台期。(4)通过鼻腔滴入适量阿比朵尔溶液从第4天开始，诱导呼吸道黏膜产生的干扰素达到平台期。动物在整个实验过程中都有较好的适应性。

此次实验证明：聚肌胞、阿比朵尔制剂通过呼吸道局部给药，可以在较短时间(24 h)诱导呼吸道局部黏膜产生足量干扰素，分别于第5天、第4天在呼吸道分泌物中达到较高水平的平台期，在呼吸道局部形成广谱抗病毒状态。高效干扰素诱导剂溶液呼吸道给药，比其他途径给药以及注射疫苗产生作用时间（一般为14 d[10]左右)短、抗病毒范围宽，尤其是对于应急预防对干扰素敏感的呼吸道病毒感染性疾病，特别是对未知的呼吸道病毒感染性疾病暴发流行的预防有重要意义，应用前景广阔。

(志谢：江苏吴中医药集团有限公司苏州制药厂馈赠盐酸阿比朵尔原料粉剂，特此感谢！)

[1]沈富兵,郑崛村,程曦,等.新城疫病毒合用中药黄芪诱生内源性干扰素的研究[J].成都医学院学报,2008,3(1):24-60.

[2]曹悦群,孙乃玲.盐酸阿比朵尔对呼吸道合胞病毒活性抑制作用[J].中国公共卫生,2013,29(12):1838-1840.

[3]田兆兴,任乃刚,闫崴,等.盐酸阿比朵尔干混乱悬剂治疗病毒性上呼吸道感染的临床研究[J].中国临床药理学杂志,2013,29 (2):104-105.

[4]Wu QF,Wang W,Dai XY,et al.Chemical compositions and anti-influenza activities of essential oils from Mosla dianthera[J].J Ethnopharm,2012,139(2):668-671.

[5]Masycheva VI,Danilenko ED,Sergeev AN.The influence of interferon inducer,a stimulator of innate immunity,on influenza[J].Eur J Immuno,2009,39(1):S250.

[6]Romantsov MG,Golofeevskiǐ SV.Cycloferon efficacy in the treatment of acute respiratory tract viral infection and influenza during the morbidity outbreak in 2009-2010[J].Antibiot Khimioter,2010, 55(1-2):30-35.

[7]Kumaki YL,Day CW,Bailey,et al.Induction of interferon-gamma-inducible protein 10 by SARS-CoV infection，interferon alfacon 1 and interferon inducer in human bronchial epithelial Calu-3 celland BAL B/c mice[J].Antivir Chem Chemother,2010,20 (4):169-177.

[8]王洪波,樊凤艳,刘娟,等.呼吸道给药诱导产生干扰素的实验研究[J].海南医学,2012,23(19):16-18.

[9]王洪波,樊凤艳,李景琦,等.聚肌胞、阿比朵尔呼吸道给药诱导产生干扰素时效性研究[J].海南医学,2013,24(21):3133-3135.

[10]金奇.医学分子病毒学[M].北京:科学出版社,2001:656.

Study on the shortest time of interferon production induced by Poly I:C and Arbidol.

WANG Hong-bo,FAN Feng-yan,QI Shu-yuan,LIU Juan.
Department of Blood Transfusion,General Hospital of Air Force,Beijing 100142, CHINA

ObjectiveTo discuss the shortest time for the interferon inducers Poly(I:C)and Arbidol to produce enough interferon in the local respiratory tract mucosa and the time to reach a plateau by administration. MethodsWe respectively gave experimental animals poly(I:C)(group A),Arbidol(group B)and water for injection(group C,control group)for nasal adminstration for 1～6 days,and then collected the nasal secretions since one day after the drug administration,detected the contents of interferon and compared the difference between two groups. There were a total of 169 Kunming mice,as experimental animals,with 78 in groupAand 78 in group B,13 in group C..Results(1)Poly(I:C)and Arbidol can induce adequate IFNs in the respiratory tract mucosa since the first day of nasal administration.(2)After the continuous stimulation of Poly(I:C)and Arbidol,we found that contents of interferonin respiratory tract secretions increased gradually,and finally reached to the plateau.(3)Poly(I:C)can induce respiratory tract mucosa to produce interferon to reach a plateau since the fifth day of nasal administation.(4)Arbidol can induce respiratory tract mucosa to produce interferon to reach a plateau since the fourth day of nasal administation.(5)All experimental animals had good adaptability to the above inducers during the whole experiment process..ConclusionNasal administration of both Poly(I:C)and Arbidol can induce respiratory tract mucosa to produce enough interferon from the first day while their times of reaching to a plateau were respectively 5 days(Polyinosinic) and 4 days(Arbidol).

Interferon(IFNs);Inducer;Pespiratory;Time

R-332

A

1003—6350（2014）22—3280—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.22.1288

2014-05-15)

王洪波。E-mail：15611161158@163.com