流动采血车(屋)快速定量检测乳糜血新方法的研究

孔卫建 侯广安 高占海 纪晓花 冯国先 孙连芳 马振东

随着无偿献血事业的发展，街头采血是血液采集的重要方式。由于街头献血者多是餐后献血，乳糜血的报废率越来越大［1］。降低乳糜血报废率的最有效的方法是在献血者采血前判定血浆乳糜程度，而对于乳糜血的判断，多采用肉眼观察血浆乳糜程度，无参照标准;还有部分血站采用国家标准中测定血液乳糜指数的方法，但都存在着人为误差、主观因素影响大，而且无法在流动采血车应用的问题。为了减少人为误差，降低乳糜血淘汰率，从源头上控制乳糜血，我们根据速率法测定原理，摸索出了一种快速定量测定血浆乳糜程度的新方法，报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

1.1.1 仪器:英诺华分立式全自动生化分析仪D320、日立HITATCHI 7100全自动生化分析仪、Photometer4040半自动生化分析仪、UV－754分光光度计。

1.1.2 试剂:ALT试剂盒，厂家:北京瑞尔达生物公司;酶校准品，厂家:日本和光。

1.1.3 检验器材:移液器0.9%氯化钠溶液。

1.1.4 主要技术参数:波长:340 nm;F 值:－992.6。

1.2 方法 由于每辆采血车均采用速率法检测ALT，而速率法的原理是在340 nm处，用NADH下降的量检测ALT，刚加入血清时的OD值是血清吸光度与NADH的混合值，我们利用乳糜血与ALT试剂混合，OD值要大于非乳糜血OD值的特性，定量检出重度乳糜血。由于乳糜血测量要用一定的浓度，我们增加了血浆的量，调整了F值。并经过了试验，该方法对ALT准确性、精密度均无影响。

1.2.1 标本的选择:①正常血浆标本管的制备:取5～10份正常无溶血、无黄疸、无乳糜的血浆等量混合与洁净的玻璃器皿中，取出2ml于塑料试管中作为正常标准管。②重度乳糜血标准管的选择:取多袋乳糜血(40～50袋)，编号，取塑料试管编号，与血浆袋一一对应，每袋取出1 ml于相应试管中，加入4 ml 0.9%氯化钠溶液充分混合。取稀释好的样品管与正常血浆标本管比较透光度。(注意背对光源，反复比较)，与正常血浆标本管透光度一致的即为重度乳糜血标准管。所对应未稀释乳糜血分装4度保存。

1.2.2 关键技术参数:用 ALT检测程序 其中样品100 μl，ALT 试剂400 μl，F 值:－992.6，波长:340 nm。

1.2.3 检测方法:①试剂准备:每个比色皿中加入400 μl ALT试剂，将比色皿放入预温槽中预温2 min。②空白对照测量:将加入试剂的比色皿放入测量位置进行比色，得出的OD值即为空白对照值，当此值低于1.0时表示试剂失效，需重新配置试剂。③加样:用移液器向比色皿中加入重度乳糜标准管样品100 μl，与试剂充分混匀。④测量:将混匀好的样品放置在测量位置进行比色，即刻读数OD值并记录。⑤结果:测量得出的OD值即为重度乳糜血的参考值(约1.748)，超过此值的缓期献血，低于此值的可以采血。

1.2.4 ALT技术参数调整:由于加样量的增加，F值也要作出相应的调整。用酶校准品(批号:TR391)进行大量实验调节 F值。调节后本站 F值定为:－992.6。ALT关键指标达到 cv%:5%，线性r:0.99，准确性偏差:5%。故使用该参数进行ALT检测，ALT的检测结果仍准确有效。

1.3 统计学分析 计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2012年7至12月乳糜血浆报废情况与2012年1至6月乳糜血浆报废情况进行对比，差异有统计学意义(χ2=7.36，P＜0.01)。应用该方法进行乳糜血初筛后，无偿献血者乳糜血报废率比例较之前大幅度下降近50%，达到预期效果。见表1。

表1 2012年1月至2012年12月乳糜血浆报废结果

3 讨论

乳糜血血浆呈乳白色或混浊状，表示血液中含有高量脂肪，重度乳糜血不能应用于临床，理论上乳糜血给患者输用并没有健康危害，但乳糜血含有多量的微粒子，流入患者体内可能引起微血管堵塞，因此医院血库多半不采用。

按照《全血及成分血质量要求》(2012)［2］中对全血外观的要求:肉眼观察应无色泽异常、溶血、凝块、气泡及重度乳糜等情况;由此可见，在血液的供应中不是不可以用乳糜血，而是不可以有重度乳糜血。如何掌握乳糜血的程度，每个人有不同的尺度，造成了部分血液的报废，也易造成血站和供血医院的矛盾。

《全血成分血质量要求与血液标准化》［3］中附录A测定血液乳糜程度的方法描述了一种测定血液乳糜程度的方法，但这种方法因为操作繁琐，应用性差，所以国内流动采血车(屋)上大多未采用。各地采供血机构近年来纷纷探讨想寻求一种简便检测乳糜血乳糜程度的方法而至今没有结果。

为了进一步完善方法，提高准确率，我们通过反复验证与实践，不断努力终于设计出用于乳糜血检测的新实验方法，此种方法检测乳糜血的速度很快，数秒就可测出，又相对准确，适合于采血车(屋)上使用。通过实验证明该方法具有准确率高、重复性好、影响因素少等优点，可以较好的解决人为误差造成的矛盾，适用于街头无偿献血乳糜血的筛查。从表1可看出，采用该方法后，乳糜血的报废率明显降低。

综上所述，血液是宝贵而又特殊的资源，现阶段还没有可供替代的其他任何物质。因此我们还要继续探讨如何降低脂肪血报废率的方法，同时应加强对无偿献血者献血前饮食，休息等注意事项的宣传，提高工作人员责任心，这样才能够有效减少脂血的血液浪费，缓解临床用血的需求，减少因输脂肪血引起的不良反应，同时也保障献血者和用血的健康，保证血液质量。

1 周雪莲.迷你型离心机应用于街头献血者脂肪血的筛选.内蒙古中医药，2010，29:102-103.

2 中华人民共和国卫生部.中国国家标准化管理委员会.全血及成分血质量要求.2012－01－04.

3 邱艳主编.全血成分血质量要求与血液标准化.第1版.中国标准出版社，2003.10.