槲皮苷对实验性高脂血症大鼠血脂代谢的影响

邢影，孙继泽，牟凤辉，李文丽，刘银燕，杨锦竹※

(吉林大学 a．中日联谊医院； b．药学院，长春 130021)

槲皮苷(Quercitrin)的药理活性研究多集中在槲皮苷的保肝、抗炎、抗病毒[1，2]等方面，对槲皮苷的降血脂作用研究未见报道；而黄酮类化合物大多在预防和治疗脑血栓、冠心病、降血脂等方面具有很好的生物活性；因此，对槲皮苷的降血脂作用研究必将填补槲皮苷药理活性方面的空白。本课题组前期实验已经证明，槲皮苷在体外能有效清除羟自由基、超氧阴离子自由基以及二苯代苦味肼基(DPPH)自由基等多种自由基，但作为抗氧化剂对高脂血症大鼠的机体氧化应激损伤是否具有保护作用尚未见报道。本实验采用实验性高脂血症大鼠为模型，探讨其对实验性高脂血症大鼠抗氧化能力和血脂代谢的影响，为槲皮苷的开发利用提供科学依据。

1 实验材料

1.1 实验动物

健康Wistar大鼠50只，体重180g～200g，雌、雄各半(吉林大学实验动物中心提供)。

1.2 实验原料与试剂

槲皮苷(吉林大学药学院药物化学实验室自制)；总胆固醇(TC)检测试剂盒、甘油三酯(TG)检测试剂盒、高密度脂蛋白(HDL-C)检测试剂盒、低密度脂蛋白(LDL-C)检测试剂盒(北京九强生物技术有限公司)；丙二醛(MDA)检测试剂盒、超氧化物岐化酶(SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)；胆固醇(上海新兴化工试剂研究所)；胆酸钠(Sigma公司)。

1.3 实验仪器

DY 89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；KUBOTA KR/200A低温高速离心机(日本KUBOTA SEISAKUSHO公司)；TGL-16 B型离心机(上海安亭科学仪器厂)；WFZ UV-2100型紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)；592型电热三用水箱(北京医疗设备厂)；YKH-Ⅱ型液体快速混合器(江西医疗器械厂)。

2 实验方法

2.1 高脂饲料的配方

基础饲料87.6%、猪油10%、胆固醇2%、胆酸钠0.4%。

2.2 造模与分组

健康Wistar大鼠随机分成5组，每组10只。其中1组为正常对照组(NC)，其余为高脂饮食组。分别给予普通饲料和高脂饲料15d，第15天采血测血脂，与正常对照组比有明显差异，即造模成功。再按血脂水平将形成高血脂模型的40d大鼠随机分成4组，即高脂对照组(MC)、槲皮苷低剂量组[高脂饲料+槲皮苷10mg/(kg·d)]、槲皮苷中剂量组[高脂饲料+槲皮苷20mg/(kg·d)]、槲皮苷高剂量组[高脂饲料+槲皮苷40mg/(kg·d)]。

除正常对照组和高脂对照组，其余各组于实验第16天开始，按组别灌胃给予槲皮苷，每天1次，共21d。试验前1晚，大鼠禁食不禁水。次日上午，将大鼠用3%戊巴比妥钠腹腔麻醉，颈动脉采血，并取肝脏。

2.3 指标测定

2.3.1血液指标血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、SOD、MDA的测定均按试剂盒说明书方法操作。

2.3.2组织指标肝组织SOD、MDA的测定均按试剂盒说明书方法操作。肝组织TG和TC的测定[101]：称取肝组织100mg，加提取液(氯仿∶甲醇=1∶1)2.0mL，研成匀浆，再补加提取液3.0mL，混匀。24h抽提，不断振摇，然后3000r/min离心5min，得提取液，按血清脂质测定方法测定。

2.4 统计方法

3 实验结果

3.1 槲皮苷对高脂血症大鼠血脂水平的影响

与正常对照组比较可见，高脂对照组血清TC、TG和LDL-C含量均显著升高(P<0.01)，HDL-C含量显著下降(P<0.01)，表明大鼠高脂血症模型复制成功。与高脂对照组相比，槲皮苷40mg/kg组可明显降低血清TC、TG和LDL-C含量(P<0.05或P<0.01)，并明显升高血清HDL-C含量；槲皮苷20mg/kg组也可使血清TC和LDL-C含量明显降低，HDL-C含量明显升高(P<0.05或P<0.01)，但对血清TG含量无明显影响；槲皮苷10mg/kg组则对血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量无明显影响(表1)。

表1槲皮苷对高脂血症大鼠血脂水平的影响

组别 Group剂量 Dose[mg/(kg·d)]TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)NC—168±015076±013096±014091±013MC—683±097∗∗098±017∗∗077±014∗∗603±025∗∗10618±066087±015083±010593±024槲皮苷20540±064△086±008090±015△398±018△△40482±049△△079±015△092±014△362±020△△

注：**P<0.01 vs NC；△P<0.05、△△P<0.01 vs MC，下表同。

根据上述测定的结果，按公式AI=(TC-HDL-C)/HDL-C计算动脉硬化指数(AI)以及TC/HDL-C比值和LDL-C/HDL-C比值，结果见表2。从表中可以看出，与高脂对照组相比，槲皮苷20mg/kg组、40mg/kg组可明显降低AI以及TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C比值(P<0.01)；槲皮苷10mg/kg组则对AI以及TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C比值无明显影响。

表2槲皮苷对高脂血症大鼠动脉粥样硬化指数的影响

组别 Group剂量 Dose[mg/(kg·d)]TC/HDL-CLDL-C/HDL-CAINC—177±019097±021077±019MC—912±198∗∗808±154∗∗812±198∗∗10754±114726±099654±114槲皮苷20621±134△△455±074△△521±134△△40537±099△△403±068△△437±099△△

3.2 槲皮苷对高脂血症大鼠肝脂水平的影响

与高脂对照组相比，槲皮苷10mg/kg组、20mg/kg组、40mg/kg组均可明显降低高脂血症大鼠肝脏TC水平(P<0.01)，同时，还可使高脂血症大鼠肝脏TG水平显著降低(P<0.05或P<0.01)；槲皮苷10mg/kg组对高脂血症大鼠肝脏TG水平无明显影响(表3)。

表3槲皮苷对高脂血症大鼠肝脂水平的影响

组别Group剂量 Dose[mg/(kg·d)]TC(mmol/L)TG(mmol/L)NC—185±031563±088MC—317±055∗∗831±058∗∗10208±065△△756±074槲皮苷20194±039△△732±072△40182±050△△697±097△△

3.3 槲皮苷对高脂血症大鼠血清及肝组织中MDA含量和SOD活性的影响

3.3.1槲皮苷对高脂血症大鼠血清中MDA含量和SOD活性的影响与正常对照组比较，高脂对照组血清中MDA含量明显升高(P<0.01)，SOD活性明显降低(P<0.01)。与高脂对照组相比，槲皮苷20mg/kg组、40mg/kg组可明显降低血清中MDA含量(P<0.01或P<0.05)，升高SOD活性(P<0.01)；槲皮苷10mg/kg组对高脂血症大鼠血清MDA含量和SOD活性无明显影响，见表4。

表4槲皮苷对高脂血症大鼠血清中MDA含量和SOD活性的影响

组别Group剂量 Dose[mg/(kg·d)]MDA(mmol/L)SOD(U/mL)NC—611±12428688±5893MC—911±109∗∗21323±2183∗∗10781±15623851±3812槲皮苷20733±128△26743±3429△△40721±130△△29626±3153△△

3.3.2槲皮苷对高脂血症大鼠肝组织中MDA含量和SOD活性的影响与正常对照组比较，高脂对照组肝组织中MDA含量明显升高(P<0.01)，SOD活性明显降低(P<0.01)。与高脂对照组相比，槲皮苷20mg/kg组、40mg/kg组可明显降低肝组织中MDA含量(P<0.01或P<0.05)，升高SOD活性(P<0.01或P<0.05)；槲皮苷10mg/kg组对高脂血症大鼠肝组织中MDA含量和SOD活性无明显影响(表5)。

表5槲皮苷对高脂血症大鼠肝组织中MDA含量和SOD活性的影响

组别Group剂量 Dose[mg/(kg·d)]MDA(mmol/gpro)SOD(U/mgpro)NC—275±0786104±850MC—418±118∗∗4030±695∗∗10334±0734728±805槲皮苷20307±052△4806±690△40268±067△△5961±663△△

4 讨论

动脉粥样硬化(AS)的病因和发病机制虽未明了，但研究表明，脂质代谢异常是AS形成的重要因素之一[3]。现已证实，血清TC、TG、LDL水平与AS形成呈正相关[4，5]，HDL水平与AS的形成呈负相关[6，7]。本实验结果表明，高剂量的槲皮苷能显著降低高脂血症大鼠TC、TG、LDL-C水平，明显升高HDL-C水平，这表明槲皮苷具有调血脂作用。

近年来的研究表明，引起AS的主要因素除了高TC、高TG、高LDL-C、低HDL-C以外，TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值和AI等血脂综合指数也是与AS具有独立相关的危险因素，而且能更准确地反映血脂水平与AS之间的关系，更具可靠性、敏感性和临床意义[8～11]。在本实验中，槲皮苷能明显降低高脂血症大鼠的TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值和AI，这进一步说明了槲皮苷具有良好的调血脂作用，可防止AS的形成。

SOD是一种存在于生物体内的重要氧自由基清除剂，具有清除氧自由基和保护机体细胞免受自由基损伤的作用。当SOD含量不足或活性降低时，会导致氧自由基堆积，使脂质氧化产生脂质代谢的终产物MDA。而过氧化脂质的增多和(或)SOD活性的降低，可直接或继发性地导致机体的各种损伤，引发AS。研究表明，与正常对照组相比，高脂血症动物血清MDA含量明显增高，同时发现血清MDA含量与血清TG和TC含量呈正相关。本实验的结果表明，中剂量和高剂量的槲皮苷可使血清和肝组织SOD活性明显升高，MDA含量明显降低，提示槲皮苷可通过提高自由基清除酶的活性以及抑制脂质的过氧化而发挥抗AS作用。

5 结论

槲皮苷具有防止动脉粥样硬化的形成的作用，此作用与槲皮苷能调整实验性高脂血症大鼠的血脂代谢、提高机体清除自由基的能力、纠正自由基紊乱、抑制自由基所导致的损伤有关。

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