配制结核含药培养基药液的保存条件探讨

孙蕾 唐诗邈 王毳 李冰

我们观察了结核分枝杆菌在保存于不同条件药液(异烟肼、利福平、乙胺丁醇和链霉素)配制含药培养基中的生长状况，试图寻找配制结核含药培养基药液的理想保存环境，现将我们实验结果报告如下。

1 方法

1.1 药物选择 分别选择异烟肼(INH，100%)、利福平(RFP，98%)、乙胺丁醇(EMB，73.6%)和链霉素(SM，77%)，以上4种药粉来自国家结核病参比实验室，再由辽宁省涂阳肺结核患者的痰培养获得的已确认的结核分枝杆菌40株菌株。

1.2 操作方法 将INH、RFP、EMB和SM分别配制成20 μg/ml、4000 μg/ml、200 μg/ml和 400 μg/ml的药液，并分成四份。第一份药液配制成含药培养基，含药培养基中的药物浓度为:INH(0.2 μg/ml)、RFP(40 μg/ml)、EMB(2 μg/ml)和SM(4 μg/ml)。第二份药液分别室温放置1、3、7 d后，配成含药培养基。第三份药液分别冷藏放置1、3、7 d后，配成含药培养基。第四份药液冷冻(-20℃)1个月后，配成含药培养基。取40株结核分枝杆菌传代培养3周后，调成10-2mg/ml和10-4mg/ml的菌液，接种含药培养基，37℃培养4周，观察结果，判断结核分枝杆菌的耐药性。同时还将10-2mg/ml的菌液分别接种不同保存条件药液配制的含药培养基，37℃培养4周，观察结果。

2 结果

2.1 结核分枝杆菌在不同保存条件药液配制含药培养基中生长状况比较 结核分枝杆菌在不同保存条件含异烟肼及利福平培养基中生长状况比较见表1，结果表明两组各种条件下阳性率分布无明显区别(P均＞0.05)。

结核分枝杆菌在不同保存条件含链霉素及乙胺丁醇培养基中生长状况比较见表2，结果表明两组各种条件下阳性率分布无明显区别(P均＞0.05)。

2.2 药液保存时间对实验污染率的影响 表3为各种药液不同保存时间对实验污染率的影响，结果表明，随着各种药液保存时间的延长，实验污染率都有所增加。

表1 结核分枝杆菌在不同保存条件含异烟肼及利福平培养基中生长状况比较

表2 结核分枝杆菌在不同保存条件含链霉素及乙胺丁醇培养基中生长状况比较

表3 各种药液不同保存时间对实验污染率的影响

3 讨论

结核病是危害人类健康常见疾病，过去临床中常用抗结核菌一线药物疗效也渐不明显，结核分枝杆菌耐药是导致这些现象的重要原因之一，准确地检测结核分枝杆菌的耐药性不但能为临床提供诊疗依据，而且也为结核疾病流行病学监测提供有效方法[1，2]。药物敏感性试验[3]就是这类方法之一，但其需要使用相应含药培养基，于是，寻觅配制含药培养基药液的最佳保存条件，达到既可避免药物浪费，又可方便含药培养基配制途径成了学者们的努力目标。我们新近分别将40株结核分枝杆菌接种于用室温、冷藏保持1 d、3 d、1周及冷冻保存1月药液配制的含药培养基上，另将结核分枝杆菌在当天配制含药培养基上的生长状况作为对照。我们发现，本研究方法与结核分枝杆菌在上述培养基上耐药结果无明显统计学区别，这提示，采用前一种方法保存药液配制的含药培养基比较适用于结核分枝杆菌耐药性检测。我们还证实，随着药液保存时间延长，各类药物实验污染率有所增加，特别是异烟肼和乙胺丁醇药液。因此，需加强配制药液的无菌操作，采用灭菌的容器和蒸馏水配制药液。

总之，通过妥善保存抗结核药液，简化了含药培养基的配制程序，降低了开展结核分枝杆菌耐药检测的成本，有利于结核分枝杆菌耐药监测的开展，为防治耐药结核提供了简单、经济和实用的途径。

[1]蒋云.肺结核病流行现状和预防对策.基层医学论坛，2012，16(7):922-923.

[2]赵玉玲，赵东阳，李辉，等.7年结核分枝杆菌临床分离株对一线和二线抗结核药物耐药趋势监测.中国卫生检验杂志，2010，20(2):338-340.

[3]中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程.深圳:中国教育文化出版社，2006:46-51.