正交试验法优选安脑分散片黄芩提取工艺的研究

潘五九 肖 雪 孟庆杰 王伟明

（黑龙江省中医药科学院·哈尔滨 150036）

安脑分散片是在古方安宫牛黄丸基础上，添加了赭石、石膏等药，按中医理论重新组方研制而成，临床上主要用于治疗高热急症，如高热惊厥、脑卒中、烦躁谵语、畜痉劂中风窍闭及昏迷病等。由于处方中同时包含黄芩和黄连两味药物，黄芩中黄芩苷和黄连中黄芩苷易形成难溶于水的盐或分子复合物而析出，故黄芩考虑单提[1]。本研究采用正交试验法，选择黄芩苷提取率和总固体得率作为正交试验指标，进行安脑分散片提取工艺的研究，为生产提供依据。

1 仪器与试药

Agilen 1100高效液相色谱仪(DAD检测器)；BP211D型电子天平(Sartorim公司)；Diamonsil钻石C18色谱柱(200mm×4.6mm，5μm)；KQ-300DB型数控超声仪（昆明市超声仪器有限公司）；黄芩苷对照品(购自中国生物制品检定所。批号：110715-201117)；黄芩药材（购于安徽沪潐中药饮片公司，经检定符合中国药典2010版要求)；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯（均购于美国迪马公司）。

2 方法与结果

2.1 黄芩苷提取率与总固体得率的测定

2.1.1 色谱条件[2]黄芩苷色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。

2.1.2 对照品溶液的制备 取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成为1ml含60μg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 取黄芩药材粉末（过三号筛）约0.3g，精密称定，加70%乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%分次洗涤容器和残渣，滤液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，至10ml量瓶中，加甲醇至刻度中，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品1备用。

称取黄芩药材100g，按L9(34)试验列号各条件分别回流提取、滤过，测量提取液总体积取后，吸取1ml，用流动相定容到10ml，作为供试品2备用。

2.1.4 提取率测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品1、2溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定吸收峰峰面积，外标一点法分别计算供试品1、2中黄芩苷的含量，再将供试品1黄芩苷含量折算成药材中黄芩苷总量；供试品2黄芩苷含量折算成提取液中黄芩苷总量。

提取率=提取液中黄芩苷总量/药材中黄芩苷总量×100%。

2.1.5 总固体得率测定 将提取液用水浴蒸干，置105℃烘箱中，干燥3h，取出置干燥器中冷却0.5h，置105℃烘箱中，干燥1h，至恒重。称量每个实验号下所得恒重药膏的质量，比上100g药材质量，即得。

2.2 提取溶剂的选择 参照中国药典2010年版一部黄芩提取物项下，故我们选择水作为提取溶剂。

2.3 水煎煮提取条件的优化

根据方中药物的性质、现代药理学研究结果和《中国药典》中黄芩药材的质量控制指标，以测定总固体得率和黄芩苷提取率为指标，用正交试验优选处方中药材的提取工艺条件。

2.3.1 正交试验设计 根据预试验结果，选取影响提取效果的因素和水平，试验方案见表1。

表1 试验因素水平表

2.3.2 试验数据见表2，方差分析见表3。

表2 正交试验结果

表3 方差分析结果

2.3.2 结果分析 由直观分析可知较优的提取工艺是A3B3C3。从方差分析结果可知，加水量对提取效果差异有显著性，提取次数、提取时问对提取效果无显著性，比较各因素的极差值可以看，影响提取效果的因素顺序为A＞C＞B。根据上述正交试验结果，结合生产实际节能降耗的需要，我们确定药材较优的提取工艺条件为A3B1C2。即加水量为10倍量，每次1h，提取2次。

2.3.3 验证实验 分别按处方量称取药材，按较优工艺A3B1C2提取，并测定黄芩苷提取率和总固体得率。经验证，此工艺条件下黄芩苷提取率为81.42%,总固体得率24.19%。说明此提取工艺合理、可行、稳定，可应用与工业生产。

3 讨论

黄芩作为安脑分散片中的主药，其主要活性成分为黄芩苷。黄芩苷溶于热水

中国药典2010年版一部提取物项下，收录了黄芩提取物，其中对于黄芩的提取采用水煮法，但其对于提取中涉及加水量、提取时间、提取次数均未明确具体参数，本试验采用正交试验设计对上述参数进行研究，以优化提取工艺参数，为按脑分散片的工业化生产提供依据。指标的选择上，黄芩苷提取的转移率是评价参数是否适合的重要指标，故将其作为评价指标之一，另中药提取物的总固体是其发挥疗效的物质基础，所以本实验也将其作为考察提取工艺优劣的指标之一。将上述指标根据其重要性，按一定权重系数折算计算综合评分，作为最终评价指标。

本试验对安脑分散片中黄芩水提工艺进行了系统研究，最终工艺的确定是在分析正交试验设计试验结果的基础上，结合实际生产中节能、缩短生产周期、生产流程简便等需要，综合考虑最终建立了适于工业生产、操作简捷、合理的提取工艺，这为安脑分散片提供了一种生产周期短、生产成本较低、操作简便、且无需增加企业设备投资的工艺参考。

[1] 秦延讯，郭春景.黄连在复方中药制剂提取中应该注意的问题[J].光明中医，2008，5（5）：595-596.

[2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典2010年版一部[S]．北京：中国医药科技出版社，2010：1．