47例婴幼儿巨细胞病毒感染的临床诊断分析

丁忠英 沈国松 何平亚 方嵘 姚娟 沈学萍 张甦

47例婴幼儿巨细胞病毒感染的临床诊断分析

丁忠英 沈国松 何平亚 方嵘 姚娟 沈学萍 张甦

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是严重危害人体健康的病毒之一，是引起先天性及围生期感染的重要病原体,可造成多器官、系统受累[1]，属疱疹病毒科，通过人与人直接接触传播。HCMV多在婴幼儿时期发病，肺、肝是重要靶器官，若不及时抗病毒治疗，会影响患儿健康，严重者危及生命。HCMV临床表现多样，不典型，误诊率较高，明确诊断必须结合实验室检查。因此，早期、快速、准确的检测方法显得尤为重要。笔者通过荧光定量PCR（FQ-PCR）检测患儿尿液及母乳中的HCMV-DNA,并与HCMV-IgM抗体检测比较，探讨FQ-PCR在患儿HCMV感染诊断和治疗中的应用价值及母乳感染HCMV对婴幼儿的影响，以期提高HCMV感染的诊断率。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取2011-01—12本院HCMV血清学检测阳性、拟行HCMV-DNA定量检测的患儿52例，其中5例患儿家属拒绝，共47例入组，男29例，女18例，年龄11～85d，平均（43.60±0.19）d。只采集到患儿尿液样本11例，同时采集到母乳和患儿尿液36例，诊断标准参考1999年中华医学会儿科学分会制定的CMV感染诊断方案[2]。患儿母亲均无明显感染症状，患儿临床诊断：肺炎、支气管肺炎、支气管炎、毛细支气管炎38例，呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）肺炎2例，上呼吸道感染3例，百日咳综合征、破伤风2例，肝功能损伤、高胆红素血症11例，先天性心脏病7例，血型不合、败血症、血小板减少性紫癜3例。其中，肺炎误诊为支气管炎2例，毛细支气管炎误诊为支气管炎1例，误诊肝受损1例，漏诊肝受损2例，RSV肺炎误诊为肺炎1例。另外，14例患儿合并感染其他病原体。

1.2 仪器和试剂 采取患儿随机尿及母乳标本，HCMV-DNA检测采用BIO-RAD ICYCLE PCR荧光定量分析仪、达安基因荧光定量试剂盒；HCMV血清学检测采用ELISA方法，TORCH试剂（意大利Dia.Pro公司生产），VICTOPTM 1420型时间分辨荧光分析仪（美国铂金埃尔默公司生产）及芬兰Wallac公司洗板机。

1.3 方法

1.3.1 HCMV-DNA测定 采用中山大学达安基因诊断中心提供的HCMV核酸扩增荧光定量检测试剂盒，由专业人员严格按照说明书操作。引物序列为正义引物5′-GCTAACTATGCAGAGCATGTA-3′，反义引物5′-GCTGAGTTCTGGTAAAGAAC-3′，TaqMan探针 5′-CTACATTGTACCCGAGGATAAGCG-3′。样本DNA的提取按试剂盒说明书进行。扩增条件：93℃2min预变性；退火93℃×45s，延伸55℃×60s，10个循环；退火93℃× 30s，延伸55℃×45s，30个循环。每次试验按试剂盒提供的定量阳性质控校准品做质控和标准曲线，同时设置阴性、空白对照。

1.3.2 HCMV-IgM抗体测定 血清样本按ELISA试剂盒说明书进行HCMV-IgM抗体检测。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件，计数资料的比较采用χ2检验。

2 结果

2.1HCMV-DNA FQ-PCR与HCMV-IgM抗体检测结果的比较 对47例HCMV-IgM血清抗体检测阳性患儿的尿标本进行HCMV-DNA FQ-PCR检测，FQ-PCR阳性44例，阴性3例，与HCMV-IgM阳性符合率为93.63%。2.2 两种标本HCMV-DNA FQ-PCR检测结果的比较对36例能同时采集到的母乳和患儿尿液进行HCMVDNA FQ-PCR检测，乳汁阳性25例，尿液阳性33例，乳汁检测结果阳性患儿的尿液均为阳性，两种样本检测方法的一致率（阳性符合率与阴性符合率之和）为77.8%，两种样本检测结果的差异有统计学意义（P＜0.05），详见表1。

表1 两种标本HCMV FQ-PCR检测结果比较[例（%）]

3 讨论

HCMV是弱致病因子，具有潜伏活动的生物学特征[3]，分为先天性感染和围生期感染。正常人群中育龄妇女HCMV-IgG阳性率为40%～100%，孕次≥3次者感染HCMV的风险明显增加。本研究36例母乳HCMV-DNA FQ-PCR检测中阳性25例，同时其患儿的血HCMVIgM、尿液HCMV-DNA也表现为阳性，说明乳汁是婴幼儿HCMV传播的重要途径[4]。因此，育龄妇女在怀孕前应筛查是否感染HCMV，而哺乳期妇女若怀疑感染HCMV时应常规检测乳汁HCMV-DNA，避免或减轻新生儿HCMV感染。

HCMV在我国广泛流行，严重时常累及多个系统、脏器，包括间质性肺炎、心肌损害、贫血等，也可单器官受累。患儿临床表现多为呼吸系统症状，且复杂多样，缺乏特异性，早期漏诊、误诊率较高。本研究中肺炎误诊为支气管炎2例，毛细支气管炎误诊为支气管炎1例，误诊肝受损1例，漏诊肝受损2例，RSV肺炎误诊为肺炎1例。除呼吸系统外，HCMV还可侵犯肝细胞和肝内外胆管系统造成肝功能损害,是新生儿病理性黄疸的主要原因之一。本组资料中表现为TBIL、ALT、AST、GGT异常的肝功能损伤、高胆红素血症患儿11例，说明HCMV感染时部分患儿已出现肝功能损害，可能与胆管上皮细胞被侵袭而致胆道阻塞有关[5]。患儿免疫功能较弱，在感染HCMV后宿主细胞免疫功能进一步下降，增加了对其他病原体的易感性，本组患儿中14例合并其他病原体感染，其中7例同时检出RSV。

HCMV感染时多数患儿表现隐匿，实验室检查为主要诊断依据，其中病毒分离是诊断HCMV感染的金标准[6]。临床常用的方法包括血清学测定HCMV特异抗体（即HCMV-IgM）和FQ-PCR测定HCMV-DNA。但由于IgM受人体自身生理及病理状况的影响，易出现假阴性。本组患儿年龄11～85d，其细胞和体液免疫系统发育不成熟，感染后不能产生有效免疫应答，可出现假阴性，因此血清HCMV-IgM检测方法存在一定的局限性。FQ-PCR是在常规PCR技术基础上发展起来的一种新型HCMVDNA定量检测法，能从分子水平上检测HCMV感染情况及抗病毒治疗效果。HCMV具有噬上皮细胞特性，易于感染在肾脏细胞内并随尿排出，因此可以从尿液中检测出HCMV-DNA含量，以说明体内HCMV病毒的感染情况[7]。FQ-PCR检测中采取尿标本虽然方便，阳性率又高，但由于肾小管间歇性排出HCMV颗粒仍然可出现假阴性，因此，同时检测血清HCMV-IgM抗体和尿HCMV-DNA可提高HCMV感染的诊断率，有利于临床分析患儿的感染情况，及时采取合理的治疗方案。

[1] 吴婉芳．围产期巨细胞病毒感染的诊断和治疗[J]．中华儿科杂志,2001, 39(11):698-699．

[2] 中华医学会儿科学分会感染消化学组,中华儿科杂志编委会．巨细胞病毒感染诊断方案[J]．中华儿科杂志,1999,37(7):441．

[3] Ghisetti V,Barbui A,Franchello A,et al．Quantition of cytomegalovirus DNA by polymerase chain as a predictor of disease in solid organ transplantation[J]．J Med Virol,2004,73（2）:223-229．

[4] 陈倩,钟天鹰,张其华．荧光定量PCR法检测母乳巨细胞病毒感染和母婴传播[J]．中国优生与遗传,2005,13(11):42．

[5] 邓先捷,李易娟,曾瑜,等．先天性巨细胞病毒感染的临床研究[J]．中国当代儿科杂志,2002,4(1):39-40．

[6] 方峰,董永绥．诊治巨细胞病毒感染时应注意的几个问题[J]．中国实用儿科杂志,2000,15(2):86．

[7] Gohring K,Dietz K,Hartleif S,et al．Influence of different extraction methods and PCR techniques on the sensitivity of HCMVDNA detection in dried blood spot(DBS)filter cards[J]．J Clin Viral,2010,48:278-281．

2012-05-07）

（本文编辑：严玮雯）

313000 湖州市妇幼保健院产前诊断中心

张甦，E-mail:zmzdzy1985@163.com